增强革兰氏染色液
增强革兰氏染色液
简介:
革兰氏染色法是丹麦医生Christain Gram于1884年所发明,是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,亦是一种复染法。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物,乙醇能使它脱色。在革兰阴性细胞染色中,乙醇或丙酮破坏了胞壁外膜、损伤肽聚糖层和细胞质膜,结晶紫和碘复合物从细胞中渗漏出来,当再用其他染色液复染时,显现红色。红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞,但被紫色盖没,所以红色显示不出来。在革兰阳性细胞染色中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水,导致孔隙变小,由于结晶紫和碘复合物分子太大,不能通过细胞壁,不易脱色,所以保持着紫色。
组成:
操作步骤(仅供参考):
1、 涂片:取待检细菌,于载玻片中央涂成薄层或者或在载玻片上滴加少许无菌水,取菌与
的水混合均匀,涂成一薄层。
2、 干燥:涂片后在室温下自然干燥,也可在酒精灯上略加温,使之迅速干燥。 3、 固定:手持载玻片一端,标本面朝上,在酒精灯的火焰外侧快速来回移动。 4、 初染:滴加结晶紫染色液染色,清水冲洗去染色液。 5、 媒染:滴加Gram碘液,并覆盖载玻片室温放置,水洗。
6、 脱色:滴加脱色液摇动,直至流下的脱色液不出现紫色时为止,立即用水冲去脱色液,
终止反应。
7、 复染:滴加沙黄染色液染色,水洗。 8、 干燥。镜检:置油镜观察。
注意事项:
1、 涂片之前,应事先在背面做好圆圈标记,以便判断后续试验的位置。
2、 取细菌时,应注意自我防护,拔或塞试管塞时,应将试管口通过火焰略加烧灼。 3、 加热固定涂片时,应注意玻片勿太靠近火焰。
4、 革兰氏染色的关键在于严格掌握脱色程度,脱色时间应根据经验判断。脱色过度,阳性
菌可被误染为阴性菌;脱色不够,阴性菌可被误染为阳性菌。
5、 待检细菌培养时间会影响染色,阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解,常呈阴性。 6、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。