第9章 动物繁殖新技术
第9章 动物繁殖新技术
综合测试题
一、填空题
1 2
3．三种保存胚胎的方法分别为常温保存、低温保存和冷冻保存。 4 5 6 7．提供胚胎的个体称为供体。 8
9．胚胎发育的期限为供体发情配种后
10．同一性原则包括供、受体在分类上的同属性、生理上的一致性和解剖部位的一致性。二、选择题
1．（ A ）要进行超数排卵。
A ．供体 B ．受体 C ．个体 D ．母体 2．胚胎要移植到（ B ）体内。
A ．供体 B ．受体 C ．个体 D ．母体 3．受体要选择（ D ）。
A ．优秀个体 B ．怀孕个体 C ．患病个体 D ．普通个体4．供体要选择（ A ）。
A ．优秀个体 B ．怀孕个体 C ．患病个体 D ．普通个体 5．手术法采胚时，供体的保定姿势为（ C ）。
A ．前高后低 B ．前后一样高 C ．前低后高 D ．左高右低
三、简答题
1．胚胎移植在畜牧业生产中有何意义？ 答：（1）充分发挥优良母畜的繁殖潜力； （2）缩短世代间隔，及早进行后裔测定； （3）增加双胎率；
（4）保存品种资源； （5）防止疾病传播；
（6）使不孕母畜获得生育能力； （7）促进基础理论研究； （8）满足畜牧业现代化的需要。 2．简述胚胎移植的基本原则。
答：胚胎移植的基本原则主要有以下几点：
（1）同一性原则 包括供体和受体在分类学上的同属性、生理上的一致性及解剖部位的一致性；
（2）胚胎发育的期限； （3）胚胎的质量； （4）供、受体的状况。
3．简述供体超数排卵的目的与方法。
答：超排技术的目的是让优良母畜排出大量卵子，充分发挥其繁殖潜力，是胚胎移植中的一个重要环节。其方法有以下几种：
（1）PMSG 或FSH 超排 根据不同家畜种类选择不同剂量的PMSG 或FSH 在供体发情周期的不同时间，注射PMSG 或FSH ，发情开始后12～16h 和20～24h 各配种（输精）一次，并于第一次配种后静脉注射HCG 或LH ，以便排出更多卵子。
（2）配合应用前列腺素（PG ） PG 的用法通常是在应用PMSG 以后大约48h 进行肌注。牛的用量因PG 种类而异，PGF 2α为30mg ，15甲基PGF 2α为 2mg, 氯前列烯醇为500μg ；绵羊和山羊的用量为牛的一半。
（3）PMSG 与抗PMSG 配合使用 抗PMSG 可以消除PMSG 的残留作用，明显增加可用胚胎数，提高超排效果。
4．超排效果及其判断标准是什么？
答：超排是胚胎移植中最难控制的一个环节，在实践中只要能使一半以上处理母畜达到满意结果，则认为超排是成功的。
超排数目的多少，对于受精、胚胎回收及胚胎品质均有影响。一般对牛较理想的要求是回收胚胎数达到10～12个，可用胚胎按65%计算，可得可用胚6～7个；移植后平均妊娠率60%，
可获3～4头犊牛。随着超排方法的不断完善，超排的数量和质量都会不断提高。
5．简述影响胚胎移植妊娠率的因素。
答：影响胚胎移植妊娠效果的因素是多方面的，而且各种因素相互制约，加之胚胎损失的原因很复杂，涉及至生理、内分泌、遗传、免疫和环境因素等。
（1）胚胎因素 包括胚胎质量，日龄，移植胚胎的数量，胚胎在体外培养的时间，鲜胚和冻胚等。
（2）母体因素 包括供、受体发情同期化程度，受体的孕酮水平，受体的营养，子宫、卵巢的生理状况等。
（3）其他因素 包括自然发情与人工诱导发情，移植器污染程度以及操作者熟练程度等。
四、实训题
羊和兔的胚胎移植。
1．目的 通过应用外源性激素对母畜进行超数排卵及同期发情处理，以及对胚胎移植的全过程的观察，了解这些技术的各个环节，为在生产和科研中应用打下基础。
2．材料
（1）动物 选择供体母羊、母兔及受体母羊、母兔若干只。
（2）药品 FSH 、PMSG 、LH 、HCG 、PGF 2α、2%普鲁卡因、0.25%普鲁卡因、速眠新、生理盐水、75%酒精、2%碘酒、青霉素等。
（3）器械注射器（1、5、10、30mL ）、手术刀、剪、镊、止血钳、创布、缝合针、缝合线、敷料及手术台、冲胚管、胚胎吸移管、实体显微镜、表面皿、异物针等。
（4）其他 工作服、帽、胶手套、手巾、消毒桶、肥皂、保定绳等。 3．方法
（1）羊的超数排卵与胚胎移植
● 供体和受体母羊的同期发情及供体母羊的超排处理方案（见下表）。
表1 母羊超数排卵方案
供体
受体 时间 药物 剂量 方法 药物 剂量 方法 第一天
FSH
50IU ×2
肌注
PGF 2α
1mg
肌注
第二天 FSH PGF 2α 50IU ×2，1mg
肌注 FSH 50IU 肌注
第三天 FSH
50IU ×2 肌注
第四天 上、下午试情
第五天 LRH-A 3
10μg
首次配种时肌注
每天试情并记录发情开始
第六天 每隔8小时配种一次
及结束时间
第七天 第8~10小时配种一次直至发情结束
第八天 回收胚胎
手术移植胚胎
● 胚胎回收
回收时间 供体母羊在发情结束后2～3天里，胚胎还处于输卵管中，此时可回收输卵管胚胎。
母畜麻醉、保定 用2%普鲁卡因6～8mL 作腰荐部硬膜外腔麻醉，母羊采用前低后高的形式仰卧保定在手术架上，再以0.25%普鲁卡因在母羊左后侧腹部作局部麻醉，或用1mL 速眠新全身麻醉后保定在手术架上。
手术部位 在羊乳房左侧切口，便于将输卵管和子宫露出切口部位，切口长度4～6cm 。 采胚 输卵管冲胚时用注射器的磨钝针头刺入子宫角尖端，注入冲胚液2～4mL ，然后从输卵管的伞部用表面皿或小烧杯接取冲胚液；子宫角冲胚时从子宫角上端注入冲胚液10～20mL ，用小烧杯由基部接取或由子宫角基部注入冲胚液，由子宫角上端接取。
● 胚胎检验
指将冲胚液回收之后，尽快置于放大10～15倍的实体显微镜下，检查收集到的胚胎数，并用一细检胚吸管将胚胎移至新鲜培养液内，实体显微镜下，进行形态学观察，选出适合于移植的正常胚胎。形态不正常的胚胎及发育延迟2d 以上者，都不可用于移植。检胚应在20～25℃的无菌操作室内进行，操作过程要求迅速、准确、保温和无菌。
未受精卵 呈圆球形，外周有一圈折光性强且发亮的透明带，中央为质地均匀色暗的细胞
质，透明带和卵黄膜之间的空隙很小甚至看不到。
早期胚胎 卵子受精后，经过卵裂过程，当处于桑椹胚或早期囊胚期的胚胎，卵裂细胞排列紧密，形态呈圆球形，其显著特征是透明带平坦而均匀，边缘整齐，形态清晰，卵裂球大小相等，颜色一致。
●移植胚胎
受体的选择 选择与供体发情时间一致（不超过一天）的受体。 麻醉、保定 参考供体的处理方法。
移植部位 将经检查后确定的可移植胚胎移入有黄体一侧输卵管或子宫角内。
胚胎的注入 从供体输卵管得到的胚胎可用移胚细管吸取正常胚胎注入到输卵管的腹腔孔内。从供体子宫内回收的胚胎可用1mL 注射器及封闭长针头吸取胚胎注入到受体子宫角的相应部位。
（2）兔的超数排卵与胚胎移植 ● 供体母兔的超排处理（见下表）。
表2 兔超数排卵方案
时间 第一天 第二天 第三天 第四天 第五天
药物 FSH （PMSG ）
FSH - LH （HCG ）
剂量 30IU （200IU ）
30IU -
100IU （40IU ）
方法 肌注 肌注 - 静注
配种 - - 试情 配种
（3）在生殖器官表面撒涂低浓度肝素液、樟脑油等，以防止其表面附着血或血凝块。 （4）缝合要牢固、紧密，防止术后发生疝症。
下午手术取胚
● 受体母兔同期发情处理 在供体母兔作超排处理的第四天给受体母兔LH100IU 或HCG40IU 作同样处理，以诱发同期排卵。次日作受体接受胚胎移植。
● 胚胎回收
麻醉、保定 供体母兔呈仰卧姿势保定在小动物手术台上，用0.25%普鲁卡因5～6mL 进行局部麻醉。
手术部位 由胸骨到耻骨前沿连线的中点以上2cm 起，沿腹中线向后作3～4cm 长的切口，即可拉出子宫角、输卵管及卵巢。
冲胚：方法和羊相同。
● 胚胎鉴定和移植胚胎 方法和羊相同。 4．防止手术部粘连的方法
（1）不要用金属器械挟持生殖器官。
（2）所用手套、棉花、纱布等术前要用生理盐水浸湿，以防粘附于生殖器官上。