高效液相色谱法检测糖化血红蛋白的方法学评价
,检验医学与临床年月第卷第期,,·2305·
·论 著·
高效液相色谱法检测糖化血红蛋白的方法学评价
)张文华,侯晗宇,张建荣,王菊英,周立荣(宁夏医科大学总医院医学实验中心,银川750004
,摘要】评价全自动糖化血红蛋白分析仪HLHPLC)C723G8性能。方法根 【 目的 采用高效液相色谱法(-
)据美国国家实验室标准委员会E样品含量的测定,P5EP9HbA1c-A、-A文件要求,通过对不同浓度糖化血红蛋白(对仪器精密度、准确度、携带污染率、线性进行评价。结果 批内C批间C准确度V均小于1.0%,V均小于1.3%;
2
)。结携带污染率小于2%;满足判断标准;HbA1c在4.6%~18.1%范围内线性良好(a值在0.95~1.05,r98≥0.
重复性好、结果准确、交叉污染小、线性范围宽,完全能满足临床检测要求。论 该仪器主要指标精密度高、
【关键词】 高效液相色谱法; 糖化血红蛋白; 方法学评价:/DOI10.39699455.2012.18.024.issn.1672-j
文献标志码:A
()文章编号:16729455201218230502---
hihliuidchromatorahHPLC)detectionofHbA1cmethodevaluation ZHANG Wen-hua,HOUerformance gqgpy(p
Han-u,ZHANG Jian-ronWANG Ju-inZHOU LironMedicalResearch Center,Ninxia MedicalUniver-- yg,yg,g(g
sitHosital,Yinchuan,Ninxia750004,China)y pg
】【AbstractbectiveoevaluateoffullautomatedlcoslatedhemolobinanalzerHLC723theG8per O T - -ygyygyj (formancebusinhiherformanceliuidchromatorahHPLC).MethodsccordintotheUnitedStatesNa A -yggpqgpyg
,tionalLaboratorStandardsBoardEP5EP9documentreuirementsdifferentconcentrationsofhemolcated -A,-A -yqgy ,,,lobin(HbA1c)weredeterminated.Theinstrumentrecisionaccuraccarroverlinearitwereevaluated. gpyyy
ResultsheresultsofCV waslessthan1.0%,interassaCV waslessthan1.3%;accuraccouldmeetthecrite T - -yy
2
;riacarroverwaslessthan2%;HbA1cwasinthelinearraneof4.6%-18.1%(avalueof0.95-1.05,r ≥yg),,0.98.Conclusion Themainindicatorsoftheinstrumenthavehihrecisionoodreeatabilitandaccurateno gpgpy
,,crosscontaminationbetweensamlesawidelinearraneitisfullabletomeetthereuirementsofclinicaltestin.- pgyqg 【】;;erformancelcoslatedKewordsihliuidchromatorahhemolobinothodevaluation h g m pyygqgpygy )作为糖尿病筛选、诊断、血糖控制、HbA1c 糖化血红蛋白(疗效评价的有效指标,在临床上已广泛使用,是监测糖尿病的
1]
,金标准[高效液相色谱法(则被列为检测HHPLC)bA1c参
分析,统计结果,计算结果均值与标定值的偏倚,偏倚应小于或等于3.0%。
混合均匀后连续测1.2.3 携带污染率 取高浓度全血样本,
测定值分别为H再取低浓度全血样本,连定3次,1、H2、H3;续测定3次,测定值分别为L1、L2、L3。按公式计算携带污染。携带污染率=()()。率(0%)L1-L3×100%/H3-L3≤3.
选取高值H和低值1.2.4 线性试验 (1)bA1c(18.1%)()吸取2的人全血样品。(HbA1c4.7%)20μL的高值样品注
入样品管,加入4m溶血洗净液配制成样品A。L(200倍稀释)()吸取2加入4m30μL的低值样品注进样品管,L(200倍稀释)溶血洗净液配制成样品B。(在分析仪上测定样品A和4)样品B,根据打印结果分别确认两个样品的色谱峰总面积(To-),该总面积表示H调整总面积,使talAreabA1c的浓度。(5)
样品A与样品B的色谱峰总面积相近,此时调整后样品B的浓度为4.按照16%。(6)00%、80%、60%、40%、20%、0%比,例稀释混匀(每个样品检测3次,对检测结果的B为稀释液)均值和预期值进行直线回归统计。将实测值与理论值作比较(,,)要求:偏离应小于1计算y=a验证线性。(0%)x+b7a值
2在1±0.相关系数r05范围内,95。≥0.
考方法。本中心引进一台日本TOSOH公司HLC723G8全-自动糖化血红蛋白分析仪,除用于测定H还可获得bA1c外,血红蛋白F(的值,现对其检测HHbA1、HbF)bA1c性能进行评价。1 材料与方法1.1 材料
抗凝全血样本,来1.1.1 样本来源 乙二胺四乙酸(EDTA)自本院门诊及住院患者。
1.1.2 仪器 日本TOSOH公司HLC723G8全自动糖化血-红蛋白分析仪。
)、)、批号E校准品(批号Z质1.1.3 试剂 试剂(B102SS0002-),控品(批号1均为原装配套,由日本T00842OSOH公司提供。1.2 方法 样本检测前均采用原公司提供的配套校准品进行校准,并用2个浓度水平的质控品进行控制,结果在控,手工操
[2]
作步骤严格按照《全国临床检验操作规程》进行。
1.2.1 精密度试验
含正常、异常浓度,1.2.1.1 批内试验 选取新鲜全血样本,分别测定H在一天内重复测定2计算变异bA1c的含量,0次,系数。
含正常、异常浓度,分别测1.2.1.2 批间试验 采用质控品,,定H每天上下午各测定1次,连续测定1计bA1c的含量,0d算变异系数。
1.2.2 准确度试验 使用校准物在分析仪上连续进行10次
2 结 果
2.1 精密度试验 见表1。2.2 准确度试验 见表2。
满2.3 携带污染率 本次试验验证的携带污染率为1.09%,
。足要求(0%)≤3.2.4 线性试验 将检测结果的均值和预期值进行直线回归统
,计。将实测值与理论值作比较(偏离应小于1计算y=a0%)x
·2306·,检验医学与临床年月第卷第期,,2
,其中a=0.满足要求(+b9832,r=0.9922,a值在1±0.05
2
)。范围内,相关系数r95≥0.
百分率形式表示出各血红蛋白的组分结果与色谱图。作者通过测定全血中H从以下几个方面对该仪器性能bA1c的含量,
进行综合评价。
批间变异系数小于3.1 精密度 批内变异系数小于1.0%,
/符合C1.3%,LIA′88对室间评估的允许误差要求,14允许误,/差范围为批内不精密度判断限(0%)13允许误差范围≤3.
,说明该仪器的重复性好,测为日间不精密度判断限(0%)≤4.定结果稳定。
用校准品3.2 准确度评价 分析厂商提供的HbA1c校准品,
校准后,连续重复测定该批号校准品1统计结果,计算检0次,测试结果偏倚均小于3.满足要测均值与标定值的偏倚,0%,求,说明该仪器准确性高。
样品间的交叉污染极3.3 其携带污染率小于或等于3.0%,
满足检测要求。小,
可观察各稀释点均呈现较好线性,3.4 通过线性试验,a值及2
均满足要求,试验所验证项目的测量范围符合线性。r
综上所述,全自动糖化血红蛋白分析仪HLC723G8精密-度高、准确性好、交叉污染极小,且具有良好线性等优点;另外,
表1 精密度试验
项目
批内
HbA1c
水平1
水平21018.40.0470.26%1010.40.0650.63%
n s CV
10 5.63 0.048 0.85%10 5.9 0.08 1.29%
批间
n s CV
表2 准确度试验-定值校准品
项目
HbA1c
低值10 6.00 6.00 0.00%0%≤3.
高值1010.9911.00-0.09%0%≤3.
测试速度快、操作简便。为临床调整糖尿病治疗方案提供准确依据,有很好的应用前景。参考文献
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n标定值偏倚判断标准
3 讨 论
HbA1c水平反映的是在检测前120d内的平均血糖水平,而与抽血时间、患者是否空腹等因素无关,是监测糖尿病控制
3]
。情况的良好指标[
、美国颁布的《临床实验室修正法案的最终法规》ISO的认15189医学实验室认可标准以及美国病理家学会(CAP)
]46-
证标准[均要求实验室对引进或改变的检测系统进行性能验
证后方可用于常规工作。全自动糖化血红蛋白分析仪HLC-
通过阳离子交换柱723G8基于高效液相色谱分析法的原理,利用电位差将血红蛋白组分分离。利用3种不同浓度洗脱液使包括H分离成6bA1c在内的多种血红蛋白进行梯度分离,
个部分。经检测器检测分离后的各血红蛋白组分的吸光度,以(上接第2304页)
因,作者认为CsC在血液与间质流体之间不存在大的差异。 y
综上所述,作者认为CsC能够准确可靠的使用胶颗粒增y强免疫透射比浊法测定末梢血样本。参考文献
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