叶绿素提取步骤
叶绿素及其代谢产物的提取步骤
参考Minguez-Mosquera 等（Minguez-Mosquera and Garrido-Fernandez 1989）的方法，稍作改动，具体步骤如下（均在避光条件下进行）：
（1）液氮研磨后称取1克果皮（成熟度增加取样量适当增加）至50 mL 离心管中，加入10 ml DMF （含0.1%碳酸镁）提取液，冰浴超声波振荡30 min，4000 g，离心10 min，吸上清至新的50mL 离心管中。重复上述步骤至沉淀无色。合并上清，4000 g离心5 min；
（2）合并的上清移至事先加入14 ml 正己烷的分液漏斗中，振荡1分钟，静置10分钟至完全分层；下层放出至新的盛有14 mL 正己烷的分液漏斗中，重复上一步。重复至正己烷相无色；
（3）下清移至新的50 ml 离心管中，加入5 mL正己烷剧烈振荡，放入-20℃冰箱中，静置20-30 min或过夜。移除最上层白色乳油滴状物质及上层正己烷；
（4）加入20 mL 10% NaCl 溶液，摇匀，静置5 min，4000g ，离心5 min。绿色上层转至盛有10 mL 1:1 正己烷:无水乙醚混合溶液的50 mL离心管中；
（5）4步骤中剩余下层加5 mL无水乙醚萃取残余叶绿素两次，每次4000 g 离心5 min ，上清吸出合并入1:1正己烷：乙醚溶液的50 ml 离心管中；
（6）合并的上清加入10-20 mL 10% NaCl，摇匀，4000 g，离心5 min。吸出上清至新离心管，加入5 ml 正己烷，加入无水Na2SO4，震荡，静置10 min，4000 g，离心5 min；
（7）上清分装至干净的10 ml离心管，真空浓缩仪旋转蒸发，30℃，30 min,干燥产物-80℃下避光保存；
（8）干燥产物用0.5-1.5 ml 丙酮溶解，马上上样或者在-20℃下保存不超过18 h，上样前13000 g离心10 min，过0.22nm 滤膜。