实验二十二 胡萝卜素的柱层析分离
实验二十二 胡萝卜素的柱层析分离
【目的】
1、掌握层析法的基本原理
2、了解柱层析分离法在生物化学中的应用
【原理】
胡萝卜素存在于辣椒和胡萝卜等植物中，因其在动物体内变成维生素A 故又称维生素A 原，胡萝卜素可用酒精、石油醚和丙酮等有机溶剂从食物中提取出来，且能被氧化铝(A12O 3) 所吸附。由于胡萝卜素与其他植物色素的化学结构不同，它们被氧化铝吸附的强度以及在有机溶剂中的溶解度都不相同，故将提取液用氧化铝（固定相）吸附，再用石油醚（流动相）等冲洗层析柱，即可分离成不同的色带。同溶质的其它色素比较，胡萝卜素吸附最差，跑在最前面，故也最先被洗脱下去，且可分成两种胡萝卜素（α-胡萝卜素、β-胡萝卜素）
【器材】
研钵、分液漏斗、层析管等。
【试剂】
1、95%乙醇
2、石油醚
3、1%丙酮-石油醚
4、氧化铝（Al 2O 3）
5、无水硫酸钠
【操作】
1、提取
取烘干的红辣椒皮3~4个，剪碎后放入研钵中，加95%乙醇4ml ，研磨至提取液成深红色，在加石油醚6ml 研磨3~5分钟，研磨中可酌情再加石油醚10ml 左右。用纱布将提取液直接滤入分液漏斗中，用30ml 蒸馏水洗涤三次，直至水层透明为止（为除去提取液中的乙醇）。将红色的石油醚倒入干燥的试管中，加入少量无水硫酸钠除去水分，用软木塞塞紧以免石油醚挥发。
2、层析柱的准备
将玻璃层析管（底部有过滤垫），装入氧化铝（Al 2O 3 ）粉末约10cm 高度，于其上铺一
张圆形的小滤纸。将管垂直夹在铁夹上备用。
3、层析
用滴管吸取约2ml 石油醚，沿管壁加入层析柱，当层析柱上端石油醚即将但尚未完全浸入氧化铝时，即用滴管吸取石油醚提取液1.0ml 沿管壁加入层析柱。待提取液全部浸入层析柱，立即加入含1%丙酮的石油醚冲洗，使吸附在柱上端的物质逐渐展开成为数条颜色不同的色带。
【结果及分析】
观察色带的位置、宽度与颜色深浅，尤其注意两条胡萝卜素的色带。
【注意事项】
1、研磨红辣椒皮要快而充分。
2、石油醚提取液中的乙醇必须洗净，否则吸附不好，色素的色带弥散不清。
3、装柱要均匀、无断层、柱表面要水平（边装柱边振动）。
4、辣椒皮、层析柱、研钵、带塞试管应充分干燥
5、氧化铝（Al 2O 3）应充分干燥
6、同一组两个同学注意分工合作
7、在加入洗脱液时应沿管壁均匀加入，使层析结果平直。
8、滤纸片大小应合适。
【思考题】
1、本实验中的固定相和流动相各是什么？
2、层析时能否用水冲洗，为什么？