小麦籽粒蛋白组分测定方法
小麦籽粒蛋白质组分的测定步骤
一、实验原理
植物种子蛋白质的85 % ~ 90 %是储藏蛋白，只要分布在胚乳或子叶中。植物种子种的蛋白质根据其溶解特性划分四中类型，即清蛋白溶于水和稀盐溶液；球蛋白不溶于水，但溶于稀盐溶液；醇溶蛋白不溶于水，但溶于70 % ~ 80 %的乙醇中；谷蛋白不溶于水、醇中，但溶于稀酸、稀碱中。根据蛋白质组分在不同溶剂中的溶解性，可按顺序用蒸馏水、稀盐、乙醇、稀碱分别提取清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白，分别收集提取液，再用考马斯亮蓝G-250或其他方法测定各蛋白组分，本实验采用考马斯亮蓝G-250方法测定。
二、材料、仪器和试剂
小麦面粉，万分之一天平，离心机，玻璃棒，振荡器，10ml 离心管，50ml 容量瓶等；
考马斯亮蓝G-250，一级水，10 %NaCl溶液，70% CH3CH 2OH 溶液，0.2% NaOH 溶液。
三、蛋白质组分的提取
1
0.5g ，置于10ml 离心管中，加入一级水3ml ，用玻璃棒搅拌均匀，2ml 一级水冲洗玻璃杯，在水浴振荡器上220rpm 振荡30min ，4000rpm 离心15min ，取上清夜移入50的容量瓶。向离心管的沉淀中加入5ml 一级水搅拌，再离心和振荡。同一离心管的样品重复提取3次，每次离心的上清夜都移到同一容量瓶内，最后用一级水定容至50ml, 待测。
2
向离心管中的残渣加入3ml 10% NaCl溶液搅拌均匀，再用2ml 10%NaCl溶液冲洗玻棒，振荡和离心步骤同清蛋白。最后用10% NaCl 溶液定容至50ml ，待测。
3
向离心管中的残渣加入3ml 70% CH3CH 2OH 溶液搅拌均匀，再用2ml 70%CH3CH 2OH 溶液冲洗玻棒，220 rpm振荡1h ，4000rpml 离心15 min，上清液移入50ml 容量瓶，重复提取3次，最后用70% CH3CH 2OH 定容至50ml
，待测。
4向离心管中的残渣加入3ml 0.2% NaOH溶液搅拌均匀，再用2ml 0.2% NaOH溶液冲洗玻棒，220 rpm振荡1h ，4000rpml 离心15 min，上清液移入50ml 容量瓶，重复提取3次，最后用0.2% NaOH溶液定容至50ml ，待测。
四、标准曲线制备
考马斯亮蓝G-250：准确称取100 mg 考马斯亮蓝G-250，溶于
95 %CH3CH2OH溶液中，加入85 %的（W/V）磷酸100 ml，最后用一级水定容至1000 ml，过滤后于4℃冰箱保存备用。
牛血清蛋白标准液：准确称取牛血清蛋白100 mg，均匀溶于1L 一级水中，取此溶液5 ml加一级水稀释至50 ml，即为0.l mg/ml牛血清蛋白标准液，分别置于10 ml 具塞试管中，各加一级水至1 ml ，再加入5 ml 的考马斯亮蓝G-250溶液，将试管内的溶液混匀，室温下放置2 min ，以1 ml 一级水加5 ml 的考马斯亮蓝G-250溶液为空白，在595 nm 下测定溶液吸光度，每一浓度重复测定3次\，后按下表绘制标准曲线。
五、样品蛋白含量计算
样品蛋白质含量质量分数 (%)=（Y ×50×100）/（W ×6×106）
式中：
A ：样品测定液中蛋白质的含量，也就是标线中的Y ，ug ；
W ：样品重量，g ；