染色体标本的制作及组型观察

姓名：XX 系年级：20XX 级齐鲁医学班 学号：20130023XXXX 染色体标本的制备及组型观察

【实验目的】

1. 掌握染色体标本制作的基本方法；

2. 认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。

【制作染色体标本的意义】

了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图

【染色体组型图的应用】

① 生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；人46条；马64条

② 临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断和研究：

21三体综合症：是21对常染色体多一条，此种人“先天愚型”，或称“伸舌样白痴”

卵巢退化症：45 XO，外貌表现为女性，卵巢发育不全或无，1.5米以下，不能生育。

睾丸退化症：47 XXY ，外貌为男性，比一般男性高，睾丸发育不全，有女性样乳房，

智力低下或超常，不能生育，发声尖高。

因此，染色组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽羊水做组型）

【染色体标本制作的原理】

选择活跃的组织：胸腺，骨髓，睾丸，小肠

施加药物使细胞分裂：PHA

设法得到大量的分裂中期细胞：秋水仙素

1. PHA ：促进细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变成淋巴母细胞。

2. 秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停在分裂中期。

3. 空气干燥：使细胞与染色体展开。

4. 低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离变大，易于染色体分散开。

5. 固定：用Camoy ’s solution, 作用使蛋白变性，对染色体内的组蛋白讲，变形后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。

姓名：XX 系年级：20XX 级齐鲁医学班 学号：20130023XXXX 【实验用品】

1. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯

2. 实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素

3. 实验材料：小鼠

【实验步骤】

1. 取雄性小鼠，以每克体重4微克注射秋水仙素（约1mL ），14-16h 后，用断头法处死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9% NaCl溶液）洗去血污，置于解剖盘中。

2. 将睾丸放入装有1mL 0.3% KCl溶液的小烧杯中剪碎（液体呈乳白色）。

3. 用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3% KCl溶液至4mL 。

4. 37℃静置30mins ，进行低渗处理。

5. 以800-1000r/min离心8分钟。

6. 弃上清液，加入2mL 甲醇·冰醋酸固定液。用吸管至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8mins 。

7. 再以800-1000r/min离心8分钟。

8. 弃上清液，加入1mL 甲醇·冰醋酸固定液，再制成细胞悬液，固定5mins 。

9. 取去洁净的低温预冷载片，距载片10-15cm 的高度滴下2-3滴细胞悬液，从载片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。

10. 用滤纸擦去载片上的多余液体，空气干燥或文火干燥。

11. 用染液染色20——30分钟，细水冲洗玻片背面，去除多余染液，气干。

12. 镜检：低倍镜下寻找分散良好，染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观察染色体形态并计数。

【实验结果】

姓名：XX 系年级：20XX 级齐鲁医学班 学号：20130023XXXX

精子头部

分裂中期染色体

【实验结果分析】

1. 显微镜下可看到蓝紫色的染色体。还有很多未破碎的细胞。因为本实验采用的是小鼠的睾丸进行实验，所以视野中可见大量的精子，它们有一个比较圆的头部和鞭毛。

2. 我观察到的细胞处在分裂中期，显微镜下大致可观察到32条染色体，这可能是因为部分染色体在实验过程中丢失；分析丢失原因如下：

（1）. 摔碎细胞时可能高度有点过高，导致细胞被摔碎后，其中的染色体也被一同摔

了出去。

姓名：XX 系年级：20XX 级齐鲁医学班 学号：20130023XXXX （2）. 因为染色时间过长，玻片在染液中浸泡时间太久，染色体丢失在染液中。

3. 有同学在显微镜下观察到20条染色体，这部分细胞为单倍体细胞，处于减数第二次分裂中期。

4. 实验结果所得到的染色体大多数棒状而不是V 型，这是因为吹气时染色体未展平好。

5. 实验中观察到的大多数细胞未破碎，分析原因可能如下：

（1）. 摔细胞时高度不够，细胞未完全摔碎；

（2）. 在剪碎组织时没有剪好，大量细胞聚集在一起，滴片时采用的高度很难摔碎；

（3）. 低渗不完全，细胞膨胀不完全，很难摔碎；

（4）. 敲打细胞时力度不够，导致细胞还是聚集在一起。

【注意事项】

1. 吹散细胞：应该轻轻地吹细胞，如果太用力会导致细胞破裂。

2. 铜网过滤：利用铜网进行过滤操作的时候，应尽量将组织剪碎，并且让滤液慢慢流下，不能人为破坏铜网以加快速度。

3. 剪碎组织时，应尽量将组织剪碎，若烧杯中或者过滤完铜网上还有较大块的组织，应在烧杯中继续加入0.3% KCl溶液，继续剪。

4. 本实验采用倒置染色法，目的：1）. 可以节省染料；2）. 可以避免染液快速挥发；3）. 可以防止染色颗粒沉淀，影响观察。

5. 在染色时应注意，多个样品同时染色应摆放紧密，不要有间隙；滴染液时应尽量慢，不要有气泡，以免部分染色体不被着色。

6. 染色：染色之后应冲去染液并晾干，注意使用小水流并从背面冲洗，这样可以避免冲去细胞。

7. 摔碎细胞：摔碎细胞时应注意滴管与载玻片的距离，如果距离太小，则细胞很难摔碎，不会观察到染色体；但如果距离太大，会使细胞完全的碎开，染色体飞出或者染色体布满视野，给计数造成一定难度。

【实验反思】

本次试验，虽然成功的在显微镜下找到了染色体，但染色体未伸展完全，并且我做的玻片上面细胞太多，找染色体时有一定的难度，这是因为滴片的时候加入的液体稍多。并且染色体条数也不符合规律，主要是因为实验操作过程中不是太仔细，造成了染色体的丢失，日后必须提高。