丹红注射液中丹参水溶性成分的含量测定_董燕
时珍国医国药2013年第24卷第12期
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIAMEDICA ＲESEAＲCH2013VOL．24NO．12
丹红注射液中丹参水溶性成分的含量测定
董
燕
（河北省唐山市中医医院063000）
摘要：目的对丹红注射液中丹参素、原儿茶醛及丹酚酸B 三种丹参水溶性成分的含量进行测定。方法采取高效液相
色谱法(HPLC 法) 测定丹红注射液中的丹参素、原儿茶醛及丹酚酸B 三种丹参水溶性成分，色谱柱为Kromasil C 18; 流动
B 分别为水ʒ 二甲基甲酰胺ʒ 冰醋酸、相A 、甲醇; 梯度洗脱:流速为1ml /min，检测波长为283nm 。结果丹参素、原儿茶
99．16%，99．96%，ＲSD均＜0．96%，醛、丹酚酸B 平均回收率分别为98．60%，三个批号的样品中丹参素含量分别为8．18，8．43及8．35mg /ml; 原儿茶醛含量分别为1．27，1．40mg /ml及1．39mg /ml，6．47及6．42丹酚酸B 含量分别为6．43，
mg /ml。结论HPLC 法测定丹红注射液中丹参水溶性成分的含量不仅操作简单，而且准确度高，可作为丹红注射液的质量控制指标。
关键词：丹红注射液; 丹参素; 原儿茶醛; 丹酚酸B ; 含量测定DOI 标识：doi :10．3969/j．issn．1008-0805．2013．12．031
0805(2013) 12-2896-02中图分类号：Ｒ284．1文献标识码：A 文章编号：1008-丹红注射液以中药丹参和红花为主要药物成分，经现代制药
技术加工提炼制成，具有活血化瘀、通络止痛之效，可用于治疗冠
然后加入甲醇至所需刻度，轻轻摇晃至完全混匀。精确称取丹酚
酸B 对照品10．1mg ，放入容量为25ml 的量瓶内，然后加入甲醇至所需刻度，轻轻摇晃至完全混匀。分别精确吸取丹参素、原儿
［1］
心病、心绞痛及脑血管硬化等多种心脑血管疾病，可有效改善
胸中憋闷及心肌缺血症状。随着心血管疾病发病率的不断上升，茶醛以及丹酚酸B3种对照品溶液各5ml 作为混合对照品溶液，临床对丹红注射液的使用越来越广泛，由于中药制剂不良反应屡轻轻摇匀至充分混合。
原儿茶见报道，也引起了人们对丹红注射液安全性的重视。当前丹红注2．3丹参三种水溶性成分的梯度洗脱表丹参中丹参素、
也仅对其主要药物丹参所含的丹参素及
原儿茶醛进行了含量测定，而忽略了其中的有效成分丹酚酸B 的含量测定。为了更好地控制丹红注射液的药品质量，本文以芦丁作指标，采用高效液相色谱法（HPLC 法）同时对丹红注射液中丹参的三种主要水溶液成分丹参素、原儿茶醛以及丹参酚酸B 的含量进行了测定，现将实验方法及结果报道如下。1
器材及试药
本实验均采用Agellen 1200高效液相色谱仪（日本岛津公司
5μm ）；均使用SPD －生产）；Kromasil C 18柱（4．6mm ˑ 20mm ，
10AVP 紫外线检测器以及N2000数据处理系统；所使用的丹红20120915，20120926；所使注射液共3个批号，分别为20120908，
射液的质量控制标准
［2］
醛、丹参酚酸B 三种有效成分含量测定时采取的色谱条件为
Kromasil C 18色谱柱（4．6mm ˑ 20mm ，5μm ），B 分别为流动相A 、水ʒ 二甲基甲酰胺ʒ 冰醋酸（90ʒ 4ʒ 2）、甲醇；流速为1．0ml /min ；梯度洗脱，检测波长为280nm ；柱温为30ħ ，进样量为10μl 。
表1
时间（min ）
10153542
丹参三种有效成分的梯度洗脱表
甲醇（%）
1035358
0．1%冰醋酸（%）
90656592
2，用的丹参素对照品（批号：120638－201008），芦丁对照品（批号：2．4标准曲线配制方法精确吸取芦丁对照品溶液依次为1，
5ml ，12055－9908），分别放入容量为10ml 的量瓶内，各自加入50%的甲醇原儿茶醛对照品（批号：120725－200804），丹参酚4，
再各自加入0．3ml 的5%亚硝酸钠溶液，轻轻摇晃直至酸B 对照品（120806－200704，含量以98．5%计。上述试药除了至5ml ，丹参素对照品由上海医科大学药学院提供外，对照品均来源于中
国药品生物制品研究所，所使用的甲醇为色谱纯，水为重双蒸馏水，二甲基甲酰胺、磷酸、冰醋酸等其它实验所用试剂均为分析纯。22．12．2
方法
供试品溶液的配制精确取丹红注射液5ml ，放入容量为20ml 的量瓶中，加蒸馏水稀释，至所需刻度，轻轻摇匀即成，备用。
混匀，静置5min 后，再分别加入0．3ml 的10%硝酸铝溶液，再次
轻轻摇晃至混匀，静置5min 后，分别加入4ml 氢氧化钠试液，再加入50%甲醇至所需要的刻度，再次混匀，静置15min ，采用相应溶液作空白对照。按照HPLC 法，于500nm 波长处检测吸收度，并以纵坐标表示吸收度、横坐标表示浓度，准确绘制标准曲
r =0．9991，线。结果显示：Y =1．0534X －0．0016，芦丁在11．0 55．0ug ·ml －1范围内，浓度与吸收度呈现出良好的线性关系，4，6，8，10，12μl ，精确吸取对照品溶液，依次吸取2，再分别进样，
进行含量测定，并以纵坐标表示各标准品的峰面积，以横坐标表
对照品溶液的配制精确称取芦丁对照品5．5mg ，放入容量
为50ml 的量瓶内，然后加入70%乙醇至所需刻度，轻轻摇匀至
准确绘制标准曲线。结果显示：Y 丹参素=743X 完全溶解。精确称量丹参素对照品12．5mg ，放入容积为25ml 示对照品含量，
r =0．9999，范围：0．3329 1．9999μg ；Y 原儿茶醛=的量瓶内，然后加入甲醇至所需刻度，轻轻摇晃直至完全混匀。－0．475，
r =l ，范围：0．394 2．357μg ；Y 丹酚酸B =精确称量原儿茶醛对照品4．1mg ，放入容积为10ml 的量瓶内，4364．3X +0．67，
09-07; 收稿日期：2012-作者简介：董
02-17修订日期：2013-
329．97X －2．74，t =0．9999，范围：丹参酚酸B 在0．268 1．597
μg ，三种水溶性成分的峰面积值与进样量均呈良好的线性关系。2．5
精密度试验精确吸取5份1ml 的供试品液（同批次），以标准曲线进行操作，各样品吸收度依次显色良好，吸光度（ＲSD）可
) ，燕(1977-女(汉族) ，河北唐山人，现任河北省唐山市中
医医院主管中药师，主要从事中药制剂、中药鉴定研究工作．
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时珍国医国药2013年第24卷第12期
丹参中丹参素、原儿茶醛及丹参酚酸B 三种水溶性成分的达0．92%。显色后的同一样品以同样方法连续测定6次ＲSD，
［5］
ＲSD为0．32%，可见有良好的精密度。再取同一份丹参水溶性极性有很大的区别，以往采用等度洗脱的方法进行分析，所需对照品溶液，连续5次进样次，测出峰面积值，结果表明，丹参素时间较长，因此本实验中为了能同时获得三种水溶性成分的含量ＲSD为0．19%，原儿茶醛ＲSD为0．23%，丹参酚酸B ＲSD为0．34%，均表现出良好的精密度。2．6
测定结果，并提高分析效率，缩短分析时间，采用了梯度洗脱
丹参中的活性物质以丹参酚的方法来进行测定。现代研究证实，
［6］
重现性试验采取同一批号的丹红注射液，精确吸取5份，酸类为主，具有很强的水溶性，其中又以丹酚酸B 含量最高，约
［7］
适量，同前述制备供试液、进样及测定方法，结果丹参素ＲSD为在2% 8%之间，因此其活性也明显高于丹参素及原儿茶醛，
［8］
0．23%，原儿茶醛ＲSD为0．26%，丹参酚酸B ＲSD为0．59%，表丹参酚酸B 在高热的环境作用下，易发生分解，其分解成分包明本试验方法有较好的重现性。
2．7稳定性试验精确吸取0．2ml 供试品液，以标准曲线进行操作，对待供试品溶液显色后，连续测量5次ＲSD，每间隔15min 测量1次，结果ＲSD为1．61%，说明测定样品在60min 内处于稳定的状态。同法再对同一份的供试品及对照品溶液进行测定，连续测定5次，每间隔2h 测量1次，结果显示ＲSD最低0．57%，最高0．95%，均＜0．96%，表明丹参对照品以及丹红注射液供试品溶液在8h 内均处于比较稳定的状态。
2．8加样回收试验精确吸取6份同一批的供试品溶液，适量，
括丹参素、原儿茶醛及丹参酚酸等，尤其是丹参酚酸B 的峰面积
［9］
下降很快，如果丹红注射液的储存环境温度较高，也就是说，
［10］则药物就有发生分解的可能，致使药效降低，因此，丹红注射
［11］
液应在干燥、阴凉的环境中保存。因此我们提倡，对丹红注射
液的质量标准中，在测定丹参素及原儿茶醛的同时，应同时增加
［12］
对丹参酚酸B 的含量测定。HPLC 法测定丹红注射液中丹参水溶性成分的含量不仅操作简单，而且准确度高，可作为丹红注射液的质量控制指标。
加蒸馏水进行稀释，以前述方法进行供试液的制备并对峰面积进行测定，计算出3种水溶性成分的含量回收率。结果显示，加样［1］李文晶，．人民军医，王勇，姚世芳．丹参药用成分研究进展［J ］回收率最低98．60%，最高100．20%，丹参素平均回收率为2008，51（3）：180．
2002：98．51%，原儿茶醛平均回收率为99．16%，丹参酚酸B 平均回收［2］国家药典委员会．国家中成药标准汇编［S ］．内科心系分册，
278．率为99．96%，均在含量测定的范围以内。
．北京：化学工业出版社，一部［S ］2．9样品的测定分别取3个不同批号的丹红注射液，以前述操［3］中国药典委员会．中国药典，2010：333．作方法进行测定，结果显示：丹红注射液中丹参素、原儿茶醛以及
［4］袁鲜云，庞晓斌．丹红注射液中总黄酮、丹参素、原儿茶醛、丹酚酸
1．35，6．44mg /ml，丹参酚酸B 的平均含量分别为8．32，详见表
参考文献：
2。
表2
3批丹红注射液样品水溶性成分的测定结果
mg ·ml －1
批号20120908
[**************]6平均值
含量
丹参素8．188．438．358．32
原儿茶醛1．271．401．391．35
丹酚酸B 6．436．476．426．44
B 含量测定［J ］．陕西中医学院学报，2011，34（5）：88．．时珍国医国药，2007，18（5）：1186．的比较研究［J ］
［5］刘敏彦，赵韶华，盖潇桦，等．丹参不同提取方法中水溶性成分含量［6］张文生，李德坤，叶正良．丹参提取物丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B
2003，23（6）：475．的含量测定［J ］．药物分析杂志，
［7］张
昀，刘
路，李
．中钦．丹参中丹酚酸B 的提取工艺研究［J ］
2007，38（8）：1193．草药，
［8］周陆怡，鲁澄宇．有关丹参及其主要有效成分丹参素的研究概况
［J ］．中外医疗，2009，28（25）：153．
［9］孙
梁棣，刘文英，
彩．HPLC 法同时测定丹参片中4种有效成分
．中国药科大学学报，2007，38（1）：51．的含量［J ］
3讨论
10］王书梅．高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参水溶性成分的含
本试验方法以芦丁为对照品，以5%亚硝酸钠及10%硝酸铝［
J ］．时珍国医国药，2006，17（6）：989．量［
作为显色剂，同时进行丹红注射液中丹参三种水溶液成分丹参
素、原儿茶醛与丹参酚酸B 含量的测定，其色谱条件以2012年
［3］
《中国药典》取测定波长286nm ，其结果表明，在规定为标准，梯度洗脱下，丹参三种水溶性成分均获得成功分离，与袁鲜云［4］
等研究结果一致，该试验方法操作简单，准确度高，具有一定的灵敏度。
［11］马忠伟，王秋玲．HPLC 法测定丹红注射液中丹参酮ⅡA 的含量
［J ］．中国老年保健医学，2010，8（4）：40．
冰，徐丽华．HPLC 法测定丹红注射液中4种水溶性成
［12］尤慧莲，汪
．中国药事，2012，26（7）：745．分的含量［J ］
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