100Hz电针刺激对脑组织和脾脏乙酰胆碱酯酶活性的影响
第35卷第1期2015年2月赣南医学院学报
JOUＲNALOF GANNAN MEDICAL UNIVEＲSITYVol ．35NO ．1FEB ．2015
100Hz 电针刺激对脑组织和脾脏乙酰胆碱酯酶活性的影响
121
欧阳娟，林乐迎，邹晓琴，黄
*
诚
1，3
（赣南医学院1．生理学教研室；2．人体解剖学教研室；3．江西省脑血管药理重点实验室，江西摘
赣州341000）
要：目的：观察100Hz 电针刺激对脑组织和脾脏乙酰胆碱酯酶活性影响，初步探讨电针的免疫功能调节作用
机制。方法：将昆明小鼠24只随机分成对照组、插针不电组和电针组。给予小鼠电针4天后处死，分别检测小鼠100Hz 电针刺激可显著降低小鼠延髓、下丘脑和脾脏中乙酰胆碱酯酶（AChE ）活性。结果：与对照组比较，血清、
血清、延髓、下丘脑和脾脏中乙酰胆碱酯酶（AChE ）活性（P ＜0．05）。结论：胆碱能抗炎通路可能参与了100Hz 电针调节免疫功能的作用。
关键词：电针；免疫调节；乙酰胆碱酯酶；胆碱系统中图分类号：Ｒ245
文献标志码：A
文章编号：1001－5779（2015）01－0018－03
DOI ：10．3969/j．issn．1001－5779．2015．01．005
Effect of 100Hz Electroacupuncture on the Activities
of Acetycholinesterase in Brain Tissue and Spleen of Mice
3
OU YANG Juan 1，LIN Le-ying 2，ZOU Xiao-qin 1，HUANG Cheng 1，
（1．Dept．of Physiology ；2．Dept．of Anatomy ，Gannan Medical University ，Ganzhou ，Jiangxi 341000；3．Provincial Key Laboratory of Cerebral Vascular Pharmacology in Jiangxi province ，Ganzhou ，Jiangxi 341000）Abstract ：Objective ：To observe the effect of 100Hz electroacupuncture on the activities of AChE in brain tissue and spleen and to investigate the immunoregulation effect and mechanism of electroacupuncture treatment．Methods ：24male non-electro acupuncture group ，and electro-acupuncture group KM mice were randomly divided into normal control group ，
with 8in each group．On the fourth day of electroacupuncture ，the mice were sacrificed and the specimen of serum ，me-dulla ，hypothalamus and spleen were harvested to evaluate the activities of AChE．Ｒesult：Compared with the normal group ，the activity of AChE in serum ，medulla ，hypothalamus and spleen in electroacupuncture group decreased obvious-ly （P ＜0．05）．Conclusion ：100Hz electroacupuncture may regulate immune function via cholinergic anti-inflammatory pathway．
Key words ：electroacupuncture ；immunoregulation ；acetycholinesterase （AChE ）；cholinergic sestem
由针灸发展而来的电针作为一种辅助治疗方法
已广泛应用于临床，电针在调节免疫功能方面发挥了重要作用，电针可使小鼠脾组织中IFN-γ的含量
IL-1和IL-6）含升高与致炎性的细胞因子（如TNF 、
［1］
量降低，提高小鼠NK 细胞活性。针刺大鼠足三
［2］
里可以提高术后TPK 活性使其与正常水平接近。
作用
，而阿片受体阻断剂纳络酮能部分阻断电针
的这种作用。现报道100Hz 电针调节免疫功能中
［4］
的作用对乙酰胆碱酯酶活性的影响，探讨电针调节免疫功能作用的机制。
1
1．1
材料与方法
材料动物
李晔提出因化疗所导致的NK 细胞活性降低，巨噬
［3］
细胞吞噬功能减弱，都可以用针刺明显改善。不同频率的电针可通过释放阿片肽来发挥镇痛和抗炎
1．1．1
SPF 级昆明小鼠，体重20 22g ，雄
性，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。
*基金项目：国家自然科学基金项目（31060144）和江西省自然科学基金项目（2008GZY0067）资助mail ：huangc6a2013@163．com 通讯作者：黄诚，男，博士，教授，硕士生导师。E-
—18—
1期1．1．2
欧阳娟，等100Hz 电针刺激对脑组织和脾脏乙酰胆碱酯酶活性的影响
仪器与试剂HANS 治疗仪（北京卫华产业MIKＲ022型台式冷冻离心机（Ger-开发公司生产）、
80-2型离心机（上海手术器械厂）、Moae1550many ）、
ＲAD公司）、Ultra-spec2100紫型酶标仪（美国BIO-KD-200AW 制冰机（德外分光光度计、电动匀浆机、
九十六孔培养板（costar 公司）、蛋白国FOCUSUN ）、
定量试剂盒（北京天根生化科技有限公司）、乙酰胆
碱酯酶（TChE ）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。1．2方法
*P ＜0．05；与对照组比较，与对照组比较，△P ＞0．05
图1
各实验组小鼠血清AChE
活性比较
将昆明小鼠24只随机分成对照组、插
针不电组、电针组。对照组：将小鼠置于特制塑料圆
4d ；插针不筒内，尾部与后肢暴露在筒外30min ，
取两侧“足三里、三阴交”电组：以同样的方法固定，
两穴位，分别插入一对不锈钢针（长3mm ，直径
0．3mm ），30min ，4d ；但不与HANS 电刺激仪连接，电针组：以同样的方法固定，取两侧“足三里、三阴
HANS 电刺激交”两穴位，分别插入一对不锈钢针，强度为0．5mA 10min ，强度为仪频率为100Hz ，
1mA 20min ，4d ，共电针30min ，以小鼠后肢轻微抖不抗凝血通过动为宜。电针第4天小鼠眼球取血，
－1
高速离心机（2000 3000转·min ）离心10min ，取上层血清，测时将血清用生理盐水1ʒ 9稀释；取
下丘脑、脾脏称重，并充分研磨成10%的组织延髓、
匀浆（此项操作在碎冰上进行），通过高速离心机（2000 3000转·min －1）离心10min 。仔细收集上清用于血清与组织乙酰胆碱酯酶的测定与蛋白的测定（具体检测方法按试剂盒操作说明书）。1．3
统计方法用SPSS 13．0统计软件进行数据所有数据用均数ʃ 标准差表示，组间数据比处理，
P ＜0．05认为有统计学意义。较用单因素方差分析，
2．3
*P ＜0．05；与对照组比较，与对照组比较，△P ＞0．05
图2
各实验组小鼠延髓AChE 活性比较
100Hz 电针对小鼠下丘脑中乙酰胆碱酯酶
（AChE ）活性的影响结果显示：与对照组比较，电差异有统计学针组小鼠下丘脑中AChE 活性降低，
意义（P ＜0．05）；提示100Hz 电针刺激小鼠足三里与三阴交，可降低下丘脑AChE 活性（见图3）
。
2
2．1
结果
100Hz 电针对小鼠血清中乙酰胆碱酯酶
（AChE ）活性的影响结果显示：与对照组比较，电针组小鼠血清中AChE 活性降低，差异有统计学意义（P ＜0．05）；提示100Hz 电针刺激小鼠足三里与
*P ＜0．05；与对照组比较，与对照组比较，△P ＞0．05
图3
各实验组小鼠下丘脑AChE 活性比较
三阴交，可降低血清中AChE 活性（见图1）。
2．2100Hz 电针对小鼠延髓中乙酰胆碱酯酶（AChE ）活性的影响
结果显示：与对照组比较，电
针组小鼠延髓中AChE 活性降低，差异有统计学意义（P ＜0．05）；提示100Hz 电针刺激小鼠足三里与三阴交，可降低延髓中AChE 活性（见图2）
。
2．4
100Hz 电针对小鼠脾脏中乙酰胆碱酯酶
（AChE ）活性的影响结果显示：与对照组比较，电
针组小鼠脾脏中AChE 活性降低，差异有统计学意义（P ＜0．05）；提示100Hz 电针刺激小鼠足三里与三阴交，可降低脾脏中AChE 活性（见图4）。
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赣南医学院学报2015年
乙酰胆碱酯酶（AChE ）主要存在突触间隙，能迅速水解乙酰胆碱为胆碱与乙酸。乙酰胆碱酯酶活性下降说明乙酰胆碱（ACh ）降解减少，乙酰胆碱与相应的α7nAChＲ结合抑制巨噬细胞合成与释放促炎细胞因子
［10］
。基于此我们提出胆碱能抗炎通路可能
参与了100Hz 电针调节免疫功能的作用。
参考文献：
*P ＜0．05；与对照组比较，与对照组比较，△P ＞0．05
图4
各实验组小鼠脾脏AChE 活性比较
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（收稿日期：2015－01－16）（责任编辑：敖慧斌）
3讨论
针灸在调节免疫功能方面发挥了重要作用，针
［5］
灸在免疫调节发挥双向调节的作用，治疗消化系统的炎症疾病时常采用针刺、艾灸等治疗方法；另外一方面肠蠕动功能亢进的患者，可以通过同样的治疗方法抑制其功能，而使肠蠕动恢复正常。陈德成等研究穴位注射对慢性萎缩性胃炎发现穴位治疗后可使有幽门螺杆菌感染者的免疫球蛋白与补体
［7］
下降到正常范围。
胆碱能系统包括神经元胆碱能系统和非神经元胆碱能系统，主要组成是乙酰胆碱（acetycholine ，ACh ）、CHT ）、胆碱转运体（choline transporter ，毒蕈
mAChＲs）、乙酰胆碱受体（muscarinic ACh receptors ，
烟碱能乙酰胆碱受体（nicotinic ACh receptors ，
nAChＲs）［8］，乙酰胆碱酯酶（acetycholinesterase ，AChE ）和胆碱乙酰转移酶（choline acetyltransferase ，ChAT ）。非神经元胆碱能系统指非神经细胞支配的并且这些细细胞有ChAT 的表达以及ACh 的存在，
胞可以合成与释放乙酰胆碱，后者在与相应受体结合，或者直接利用细胞内的信号分子来发挥生物学
［9］
效应胆碱能抗炎通路是在2000年由Borovikor 提出的，有联系神经-内分泌-免疫的作用。作用机制
IL-1和IL-6释放，是通过抑制TNF-α、但抗炎细胞10的产生与释放不受抑制。胆碱能抗炎因子IL-通路调控脓毒症，刺激迷走神经降低致死性内毒素血症小鼠循环血中TNF-α水平，抑制外周血［11］
HMGB1产生，提高动物的生存率。本实验证明100Hz 电针刺激均可降低小鼠血清、延髓、下丘脑、脾脏中乙酰胆碱酯酶（AChE ）活性。
［10］
［6］
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