常规考马斯亮蓝染色液
常规考马斯亮蓝染色液
简介:
考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的常规染色或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。采用常规染色方法需至少1h,采用快速染色方法一般数分钟即可。本染色液经过改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性气味的乙酸。
操作步骤(仅供参考):
(一)常规染色脱色方法
1、PAGE电泳结束后取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。染色小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。
3、倒出染色液。染色液可以回收重复使用次。
4、加入适量脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。Leagene推荐脱色液的配方是:40%乙醇,10%乙酸,50%蒸馏水。
5、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色。期间更换脱色液2~4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1~2h后即可出现。
6、完成脱色后把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
(二)快速染色脱色方法
1、PAGE电泳结束后取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
2、随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动。
3、倒出染色液。染色液可以回收重复使用2~3次。
4、加入适量脱色液,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
5、微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
6、随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
8、完成脱色后,把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
注意事项:
1、染色时,如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。但加热时宜尽量避免沸腾,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。
2、脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附在吸水纸上,加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
3、如果希望染色的背景更低,希望获得更加清晰的蛋白条带,可以加入适量的室温蒸馏水进行洗涤。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。
4、常规染色脱色方法耗时较长,但检测灵敏度更高,染色效果更加稳定
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。