假酸浆总生物碱的提取及分离研究
第27卷第2期2011年4月
哈尔滨商业大学学报（自然科学版）
Journal of Harbin University of Commerce （Natural Sciences Edition ）
Vol．27No．2Apr．2011
假酸浆总生物碱的提取及分离研究
王美玉，王
遂
（哈尔滨师范大学化学化工学院，哈尔滨150025）
摘
要：对假酸浆籽中的生物碱进行了提取条件的研究，通过正交试验优化了假酸浆籽生物碱的最佳
80%的乙醇做提取剂，pH 值为3，结果表明，温度50ħ ，时间3h．用薄层层析法进行了提取工艺条件，
初步分离，选出了两组较适宜的展开剂，二氯甲烷－乙酸乙酯（30ʒ 1）；二氯甲烷－丙酮（55ʒ 1），经观察可能存在五种生物碱．
关键词：假酸浆籽；生物碱；提取；薄层层析中图分类号：TS201
文献标识码：A
文章编号：1672－0946（2011）02－0235－03
Study on seperatation and extraction technology
of total alkaloids from fruit or seed of apple of peru
WANG Mei-yu ，WANG Sui
（School of Chemistry and Chemical Engineering ，Harbin Normal University ，Harbin 150025，China ）
Abstract ：Study on extraction technology of total alkaloids from fruit of apple of peru．The extraction technology of total alkaloids from fruit of apple of peru was optimized by orthogonal design ，results showed that the optimum extraction conditions were as follows ：80%alcohol as extraction solvent ，pH 3，temperature 50ħ ，and extraction time 3h．Total alkaloids was separated by two sets of developing solvents ：methylene dichloride －ethyl acetate （30ʒ 1）；methylene dichloride －acetone （55ʒ 1）．Total alkaloids are likely to contain five kinds of al-kaloids．
Key words ：fruit of apple of peru ；alkaloids ；extract ；TLC
假酸浆籽为茄科假酸浆（Nicandra physaloides
（L．）Gaertn．）的种子．假酸浆原产于秘鲁引入我国后主要在南方等省份大面积种植，近些年来在北方也有栽培．《贵州草药》记载治风湿性关节炎、风寒咳嗽．《云南中草药》记载治疮痈肿痛狂犬病、精神病、癫痛、风湿痛、疮疖、感冒．《广西植药名录》记载能止咳治痧气．近些年来其单方治疗慢性肾炎肾衰竭及在心脑血管疾病的治疗方面有新的应用，并引起广泛的关注
［1－2］
须的含氮化合物，如氨基酸﹑多肽﹑蛋白质和B
族维生素等的其他所有的含氮有机化合物，大多数含有氮杂环，并具显著的生理活性，是许多中草药的有效成分．近几年来对假酸浆籽化学成分的研究，其生物碱成分的分析及
应用方面的研究尚未见报道．本研究首次对假酸浆也仅限于果胶类物质
籽中的生物碱成分进行了提取、分析及初步的分
对寻找其药理活性成分、进一步开发利用假酸离，
浆有着重要的意义．
［3］
．目前相关报道也只是说明了
假酸浆籽的入药用途，但其药效成分尚未见报道．根据其药效分析其有效成分可能与生物碱类物质
有关．生物碱是存在于生物体内的除去生物体所必
收稿日期：2010－06－19．
（）：；1
1．1
材料与方法
材料与试剂
－
·236·哈尔滨商业大学学报（自然科学版）第27卷
假酸浆籽采购自贵州，无水乙醇、石油醚、三氯甲烷、氨水、溴甲酚绿、次硝酸铋、碘化钾、碘、浓硫酸、冰醋酸、醋酸钠、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯等均为分析纯，硅胶G 板（青岛海洋）. 1．2
仪器与设备
MP －200A 型电光分析天平上海第二天平仪器厂；KA －1000低速台式离心机上海安亭科学仪
点样：斑点直径0．4mm ；TLC 展开剂及体积比如下：二氯甲烷－丙酮（95ʒ 5），石油醚（30－60）－乙酸乙酯（1ʒ 1），二氯甲烷－甲醇（99ʒ 1），二氯甲
二氯甲烷－乙酸乙酯（30ʒ 1），烷－丙酮（85ʒ 15），
二氯甲烷－丙酮（55ʒ 1）展开方式：上行展开，展距
8cm ；显色剂：稀碘化铋钾试液；碘蒸汽.
首先在365nm 紫外灯下观察斑点，然后再用显色剂分别显色，再次观察斑点，比较斑点的数量及位置．
器厂；SWQ －IA 智能数字恒温控制器南京桑力
电子设备厂；FW 80型高速万能粉碎机天津市泰斯特仪器有限公司；722型可见分光光度计上海光谱仪器有限公司；PHJS －3F 型酸度计上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂. 1．31．3．1
实验方法
假酸浆生物碱的提取及测定
1）生物碱的提取粉碎假酸浆籽，准确称取20g 粉末加入到250mL 锥形瓶中，加入150mL 已经调好pH 值的溶恒温提取一定时间，过滤得提取液，减压回收溶液，
剂得酸水液，过滤酸水液除去杂质，石油醚萃取脱酸水液用氨水调节pH 值为10 11，氯仿萃取脂，
［4－6］
．碱水液，常压回收溶剂，浓缩物定容至50mL
2）生物碱最大吸收波长的确定
2
2．1
结果与分析
假酸浆生物碱的提取及测定结果分析生物碱最大吸收波长扫描曲线由图1可知，假酸浆籽中的生物碱经酸性染料
2．1．1
显色后在415nm 处有最大吸收，因此本实验选择测定波长为415nm．
精密吸取提取液2mL ，氯仿定容至10mL 容量瓶，加入5mL pH 值为4．5的醋酸－醋酸钠缓冲2mL 溴甲酚绿指示剂，振摇2min 倒入分液漏液，
1200r /斗中静置分层，分取氯仿层放入离心机，min 离心10min．取氯仿层，在分光光度计上扫描
以未加生物碱的氯仿萃取液作为随行其吸收曲线，
空白，确定假酸浆籽中生物碱的最大吸收波长．
3）生物碱质量浓度的测定采用酸性染料比色法
精密称取总生物碱14．7mg 用氯仿超声溶解定容于50mL 容量瓶中，得到0．294mg /mL的标3、4、5、6、7、8mL 对照品溶液，准液．分别吸取2、定容10mL 容量瓶中．其余操作按测定最大吸收波长方法．在415nm 波长下分别测量吸光度，以生物碱质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲
［7－8］
．线
1．3．2假酸浆生物碱的薄层层析
供试液的制备：取假酸浆籽粉末10g ，加70
图1总碱显色后吸收光谱图
2．1．2
标准曲线
Y =2．336X +0．01589，R =0．9998溶液质量浓度在0．0588 0．2352mg /mL范围内符合比尔定律，见图2.
图2生物碱测定标准曲线
mL ，pH 值为3、乙醇质量分数为80%的溶液，提取3h ，过滤得提取液，减压回收溶剂得酸水液，过滤酸水液除去杂质，石油醚萃取脱脂，酸水液用氨水
［9－10．溶剂使成作为供试品溶液
2．1．3正交试验结果分析
1）提取条件的选择
根据提取过程中的影响因为了优化提取工艺，
素，在单因素试验的基础上考虑到提取温度，提取
第2期王美玉，等：假酸浆总生物碱的提取及分离研究·237·
L 9（34）正交试验．按照正交设计方案进行L 9（34）
，正交试验，按照1．3．1方法测定吸光度，试验设计见表1．
表1
水
123素
A 温度/ħ405060
因素水平表
B pH 值123
C 时间/h135
D 乙醇质量分数/%
607080
2）正交试验结果分析
见表2. 根据表中数值可知A 的极差R 值最B 的R 值最小，大，即温度为最重要的影响因素，提pH 值的影响再次为乙醇的质量分数，取时间次之，
最小．最佳提取工艺参数为A 2B 3C 2D 3，即假酸浆籽中的总生物碱最佳提取工艺为：温度50ħ ，提取液pH 值为3，提取时间3h ，乙醇质量分数80%．
表2
序号123456789K 1K 2K 3R
A 1112223330．2540．3740．2880．120
样品假酸浆籽总碱
图3表3
显色的薄层色谱
假酸浆生物碱TLC 分析结果
R f 值
0．10
0．15
0．45
0．57
0．82
展开剂二氯甲烷－乙酸乙酯（30ʒ 1）
L 9（34）正交试验方案及结果
B 1231231230．3030．2950．3180．023
C 1232313120．2740．3600．2820．086
D 1233122310．3100．2770．3290．052
吸光度0．2250．2710．2670．4500．3450．3260．2350．2700．360
3结论
1）建立了假酸浆籽总生物碱的检测方法即酸
性染料比色法，此法具有操作简便，设备要求低，检测快速等优点．
2）通过4个因素的实验结果优选出假酸浆籽中生物碱的最佳提取条件即温度50ħ ，提取液pH 值为3，提取时间3h ，乙醇质量分数为80%．3）通过二氯甲烷－乙酸乙酯（30ʒ 1），二氯甲烷－丙酮（55ʒ 1）；这两组展开剂初步分离了假酸浆籽中的生物碱，稀碘化铋钾溶液，碘都可以作为显色剂．经观察可能存在五种生物碱．参考文献：
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2．2初步分离结果分析
生物碱通过系列展开剂的比较试验，二氯甲烷
－乙酸乙酯（30ʒ 1）；二氯甲烷－丙酮（55ʒ 1）；溶剂系统为展开剂得到的斑点圆整扩散小见，经其余几种溶剂展开后斑点拖尾现象严重，斑点之间无法分开，因此二氯甲烷－乙酸乙酯（30ʒ 1），二氯甲烷－丙酮（55ʒ
1）；是比较理想的展开剂．展开后的薄层板分别经紫外灯观察，稀碘化铋钾溶液、碘蒸汽显色，斑点位置一致数量相同见图3，经稀碘化铋钾溶液显色的薄层板斑点为橘黄色，背景浅黄色，清晰持久，碘蒸汽显色斑点不持久．经观察可能存在5种生物碱，结果见表3．
·240·哈尔滨商业大学学报（自然科学版）第27卷
2．3
模板剂脱除方式对粉体比表面积的影响
表1是采用不同方法去除模板剂后TiO 2粉体
力增强，光催化反应驱动力增加，故粉体的光催化
［6－8］
．活性较高
的比表面数据．由表1可知：模板剂的去除方式对
于样品的比表面积影响很大．对于同一个样品来说，采取溶剂回流方式的比表面积最大，微波消解的次之，焙烧最小．
表1
采用不同方法去除模板剂后TiO 2
粉体的比表面积
模板剂脱除方式比表面积/（m 2·g －1）
溶剂回流120h 焙烧：（350ħ ）/4h微波消解320．03
216．20
243．26
3结语
以有机分子β环糊精（β－CD ）为模板剂，采用
水热法制备TiO 2纳米粉体．研究了模板剂添加量对粉体晶型、粒径、光催化性能的影响以及模板剂脱除方式对粉体比表面积的影响．结果表明：TiO 2粉体的都呈现锐钛矿结构，晶型没有受到模板剂添加量的影响；采取溶剂回流方式的比表面积最大，
2
其比表面积高达320. 03m /g；当ωt （β－CD /TiO2）为60%时，其粒径最小为3. 78nm ，粉体具有较好
2．4
二氧化钛粉体的光催化性能评价
图4是不同模板剂添加量条件下制备的二氧
的光催化效果；光催化评价结果与粒径测试结果基本一致，即粉体的粒径越小，其光催化性能越好．参考文献：
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化钛粉体对罗丹明碧染料（RhB ）的光催化降解率．
从图中可以看到，随着模板剂添加量的增加，粉体光催化性能逐渐增大，当ωt （β－CD /TiO2）为60%时，光催化效果最好；然后，光催化活性随着β－CD /TiO2质量分数的增加呈现逐渐减小的趋势．这与前面所述TiO 2粉体的粒径变化规律基本一致．即粉体的粒径越小，其光催化性能越好．由于纳米粒子的量子尺寸效应导致粉体的能隙增宽，
氧化能
图4不同模板剂添加量条件下二氧化钛
对罗丹明碧染料（RhB ）的光催化降解率
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