血清中钙离子测定
钙测定试剂盒说明书
（微板法）
一、测定原理
样本中钙离子在碱性溶液中与甲基百里香酚蓝（MTB ）结合，生成蓝色络合物；通
过比色与同样处理的钙标准进行比较，可计算出样本中钙的含量。 二、试剂盒组成（96T）
三、样本要求
1、按常规检验要求采集处理样本，样本可以使血清、血浆、组织匀浆及细胞、培养上清液。 2、样本2~8℃可稳定3~4天，-20℃一下可以稳定数月。 四、测定步骤
（一）血清（浆）操作步骤： 1、操作表：
混匀，静置5分钟后，波长610nm，酶标仪比色，测定个孔OD值。
注：实验前可先将96孔板用酶标仪读取并记录空板OD值，以保证实验的精确度。 2、计算公式：
血清（浆）中钙含量（
mmol/L)=
测定孔吸光度标准孔吸光度
-空白孔吸光度-空白孔吸光度
⨯标准品浓度（
1mmol/L)⨯样品测试前稀释倍数
五、注意事项
1、实验应避免钙污染，建议最好用一次性96孔板操作 2、严重溶血、黄疸或脂血对结果又影响。
3、制备组织匀浆时，应选用去离子水作为匀浆介质，避免钙污染。
钙标准曲线的制备
1、前处理：
用去离子水将2.5mmol/L 钙标准液稀释成不同浓度：0.0625mmol/L、0.125mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L、0.625mmol/L、1mmol/L、2mmol/L。
2、操作表：
混匀，静置5分钟后，波长610nm，酶标仪比色，测定个孔OD值。
注：实验前可先将96孔板用酶标仪读取并记录空板OD值，以保证实验的精确度。
3、测定结果：
4、绘图：
血清（浆）样本钙测定
一、实验准备：
1、实验器材：移液枪（100~1000ul、2~20ul）、1mlEP管、5mlEP管、酶标仪 2、实验药品：钙测定试剂盒、去离子水、NaCl、电子天平、称量纸
二、实验步骤： 1、生理盐水的配置：
称取9gNaCl置100ml烧杯，加入100ml蒸馏水，溶解即得。 2、工作液Ⅰ的配制：
试剂一：试剂二=1:2的比例进行配制，现用现配。（测血清（浆）） 3、 样品最佳取样浓度摸索：
用去离子水将2.5mmol/L 钙标准液稀释成不同浓度：0.0625mmol/L、、
0.125mmol/L、 0.25mmol/L、0.5mmol/L、0.625mmol/L、1mmol/L、2mmol/L。 将孔板固定于固定板，空白孔加10ul去离子水、标准孔分别加入10ul上述稀释钙标准液，样品孔加入10ul稀释好的血清10ul，再各加入250ul工作液Ⅰ，混匀，静置5分钟后，波长610nm，酶标仪比色，测定OD值，根据OD值画出标准曲线，再根据样品OD值，确定稀释倍数。
4、样品的测定：
将所需检测样品按确定的倍数稀释，各取10ul于板孔，加250ul工作液Ⅰ，混匀，静置5分钟后，波长610nm，酶标仪比色，测定OD值。 5、数据处理：
根据所给定公式计算血清钙离子含量。