黄芩苷含量测定方法研究进展
中药研究进展
黄芩苷含量测定方法研究进展
申去非, 张莉, 朱铁梁, 王晓辉, 陈莉
(武警医学院, 天津 300162)
摘 要:黄芩苷是中药黄芩的主要有效成分之一。许多含黄芩的中药制剂均采用黄芩苷作为质量控制指标, 但其含量测定方法各异。故将检测黄芩苷的紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法、毛细管电泳法和液相色谱-串联质谱法的适用范围和优缺点一一综述, 以期为黄芩苷的含量测定研究提供参考。
关键词:黄芩苷; 含量测定; 高效液相色谱法; 毛细管电泳法; 液相色谱-串联质谱法
中图分类号:R927. 21 文献标识码:A 文章编号:1002-2406(2009) 04-0014-03 黄芩苷(Ba ica li n ) 是由唇形科植物黄芩(Scutel 2laria baicalensis Georgi) 的干燥根中提取的一种黄酮类化合物, 属葡萄糖醛酸苷类, 水解后生成黄芩素和葡萄糖醛酸, 是黄芩的主要有效成分之一。许多含黄芩的中药制剂均采用黄芩苷作为质量控制指标, 但其含量测定方法各异, 且每种方法各有其适用范围和优缺点, 尤其是近年来国内外关于黄芩苷含量测定新方法的建立可以极大降低检测限, 为黄芩苷的体内分析和药动学研究奠定了基础。本文参阅了近年来国内外文献, 对黄芩苷含量测定方法进行综述。1 高效液相色谱法
高效液相色谱法是一种十分成熟的检测手段, 对于黄芩苷来说, 人们通常用C 18柱或ODS 柱作为固定相, 普遍采用甲醇-水-磷酸作为流动相, 用紫外检测器(276n m ~280nm ) 检测血清或药物当中的黄芩苷含量。李宁等
[1]
*
痤胶囊的质量控制标准采用高效液相色谱法对制剂中的黄芩苷的含量进行测定。理论塔板数以黄芩苷计算为3000, 样品中黄芩苷得到很好的分离。黄芩苷在012003~110006L g 范围内与峰面积呈良好的线性关系:平均加样回收率为98167%, RSD =1141%(n =6) 。刘萍等
[3]
等采用反相高效液相色谱法测定了不
同部位和不同炮制方法的枯芩与子芩中黄芩苷的含量。在其建立的液相条件下, 黄芩苷的保留时间为4195m i n 。线性范围为0101875~0115000mg 。平均回收率100132%, RS D 值为21059%。刘平等
[4]
采取乙
醇加热回流提取的方法提取有效成分, 以高效液相色谱法测定开光复明片中黄芩苷的含量, 避免了多种中药材成分的相互干扰, 理论塔板数按黄芩苷峰计算均大于2500; 分离度符合要求; 拖尾因子均在0195~1105之间。黄芩苷检测浓度线性范围在4195~4915L g #mL 。李运景等
-1
[5]
在前人文献基础上, 进行优化, 采用RP 用甲醇-01025mol #L
-1
-H PLC 法, 以苯甲酸为内标物测定家兔血浆中黄芩苷的含量。实验结果显示, 苯甲酸与供试品的分离度在115~210, 符合要求, 且在室温(15~30e ) 柱效及分离度不受干扰, 空白血浆中的内源性物质不干扰待测物黄芩苷及内标物的测定。张丽等
基金项目:武警医学院科研基金(WY200817)
作者简介:申去非(1979-), 男, 助教, 主要研究方向:新药技术研发。通讯作者:*张莉(1962-), 女, 教授, 硕士研究生导师, 主要研究方向:
新药技术研发。
收稿日期:2008-11-12修回日期:2009-01-13
[2]
磷酸溶液(60:40, v /v),用三乙胺调节P H 值(310? 011), 建立了H PLC 测定清肺合剂中黄芩苷含量的方法。外标法定量, 理论塔板数不低于3000。黄芩苷浓度线性范围在0116~1188L g #mL 。平均回收率为9515%, RS D 为0184%(n=5) 。笔者采用RP-HPL C 法测定柴黄颗粒中黄芩苷含量, 流动相组成为, 调整流速到018mL #m in , 柱温40e 。样品出峰时间为917m i n 。理论塔板数为8340。结果, 黄芩苷平均回收率为9816%。黄芩苷浓度在51051~72185L g #mL
-1
-1
-1
为了建立消
范围内线性关系良好, 最低检出浓度为015L g #mL 。笔者认为, 此方法简便、准确, 可以用于柴黄颗粒等中
-1
药制剂中黄芩苷的含量测定(另文发表) 。
刘延军等
[6]
并且解决随浓度不同使本底值漂移、吸收峰不对称等给定量分析带来的困难。王晓琴等
[10]
考虑到环保问题因而考察了乙醇做流
-1
建立以水作溶
动相的可能性。用流动相Ñ:乙醇-012mol #L 磷酸二氢钠(25:75, 磷酸调P H 值217), 45e , 1218MP ; Ò:甲醇-012mol #L , 磷酸二氢钠(45:55, 磷酸调P H 值217), 35e , 1218MP 。两种色谱系统均达到基线分离, 测得含量基本一致, 乙醇系统与甲醇系统相比, 测定相对偏差
剂的水系三波长-紫外分光光度法, 用于测定水提物中黄芩苷的含量, 使之与水煎煮法提取黄芩苷工艺的溶剂体系相溶。本实验中黄芩苷的三个测定波长分别为27515nm 、25010nm 、29810nm 。水溶黄芩苷标准溶液在015~1210L g #mL 范围内, 浓度与吸光度呈良好的线性关系, 线性回归方程:$A =0103277C -0100908, 相关系数r=0199708, 三组样品测得的相对-1
用乙醇代替甲醇, 不但无毒, 而且有机溶剂的用量明显减少, 有利于实验室环境的保护。
梯度洗脱用于分析复方中药制剂中的黄芩苷含量, 可以使其很好分离。采用流动相组成为A :水-磷酸(53:012), B :乙腈(88:12) 进行梯度洗脱, 同时测定4种中药制剂中黄芩苷的含量, 结果黄芩苷的线性范围分别为10158~423L g #mL -1
, 平均回收率为10016%
[8]
。
Ak ira 等人[8]
运用HPL C-E D (电化学检测) 法检测
大鼠血浆中黄芩苷的含量。采用Capce ll Pak C 18UG120微孔O DS 柱(150@110mm i 1d 1, 3L m, Shiseido , Tokyo , Japan) 。015L L 样品溶液或者标准的黄芩苷溶液注入微孔ODS 柱中保持温度45e 。正磷酸-甲醇-水混合物(015:60:40, v/v/v)作为流动相, 流速为25L L #m in -1
。监控黄芩苷的监测电位调整为相对于Ag /AgCl+016V , 己烯雌酚作为内标物。黄芩苷的峰高和注入量成线性关系。线性范围从212pg 到415ng(r=01997) 检测限(信噪比=3) 0189pg 。该方法是检测的灵敏度提高了近1000倍, 完全满足微量检测的要求。2 紫外分光光度法
渠莉等
[9]
用H P-8453紫外分光光度计于220~
400nm 测定复方黄芩凝胶剂中黄芩苷的含量。采用零阶导数光谱及一阶导数光谱测定供试品溶液(复方黄芩凝胶剂的甲醇提取液) 。由一阶导数光谱看出, 样品和黄芩苷在262nm 及291nm 处有最大及最小吸收。空白液在240~400nm 范围内与基线重合, 对测定无干扰, 所以选择262n m 处的振幅作为定量信息。三波长-紫外分光光度法是计算机辅助含量测定方法。其在干扰组分的吸收光谱上具有线性吸收的三个波长处对被测组分的吸光度进行测量, 然后通过计算而求得被测组分的含量。此法能消除某些干扰组分的影响、溶液混浊、吸收池不洁净或不完全配对所引起的误差,
标准偏差RS D
李梦等
[11]
使用硅胶GF254薄层板测定清喉咽合
剂中黄芩苷的含量。分别吸取供试品溶液(清喉咽合剂的甲醇溶液) 及黄芩苷对照品溶液各3L L , 交叉点于同一GF254薄层板上, 以正戊醇-甲醇-甲酸-水(7:1:1:1) 展开, 取出, 晾干, 置254nm 荧光灯下观察色点。在薄层板上覆盖一同样大小的玻璃板, 周围用胶布固定。双波长反射法锯齿扫描, 测定波长290n m, 参比波长350nm, 狭缝1125mm @1125mm , 线性化系数Sx=3。根据峰面积积分值计算黄芩苷的含量。实验结果为:平均回收率为98136%, RSD =1124%(n =6) 。采用薄层扫描法测定黄芩苷的含量具有直接点样, 简便、灵敏、快速等优点, 且重现性好, 结果准确。4 高效毛细管电泳法(HPCE)
潘细贵等
[12]
采用高效毛细管电泳法, 以苯甲酸钠
为内标, 建立了消炎抗菌胶囊中黄芩苷的含量测定法。毛细管规格为60c m (有效长度为45c m) @75L m, 检测波长为215n m, 电压为21kV , 电解缓冲液为10mmol #L -1
硼砂且P H 值为910, 柱温为20e 。黄芩苷在96~768L g #mL -1
范围内线性关系良好, 加样回收率为98182%, RSD 为2132%。该法快捷、灵敏、准确, 适用于该制剂的快速含量分析。5 液相色谱/串联质谱法(LC-MS /M S)
Young 等人
[13]
采用液相色谱串联质谱法建立了
大鼠血浆中黄芩苷浓度的测定方法, 流动相采用甲醇和011%甲酸(60/40, v/v),流速为012mL #m i n -1
, 柱温50e 。电喷射离子化串联质谱检测器, 黄芩苷的最适电弧锥部电压为28V 。用2-(3, 4-二甲氧基-苯) -5, 7-二羟基-1-苯并吡喃-4-酮(DPDC) 作
为内标物, 洗脱时间为7m i n 。黄芩苷浓度线性范围为5~5000ng #mL 。黄芩苷的批内、批间相对标准偏差和相对误差分别为116%~411%和117%~117%, 黄芩苷回收率为7111%~7619%。此方法快速、灵敏、选择性好, 非常适于血浆中黄芩苷的药物代谢动力学研究。
综上所述, 目前国内外常用的五种检测中药材、中药制剂或者血浆中黄芩苷含量的方法中, HPL C 法仍然是最常用的方法, 国内外报道也比较多。HPLC 具-1
总之, 各种分析方法各有其优势。在实际检测中, 应根据检测的要求, 采取适宜的方法, 达到快速、准确、灵敏的分析目的。参考文献:
[1] 李宁, 杜延琪1RP-H PLC 法测定兔血浆中黄芩苷的含量[J].广
东药学院学报, 2007, 23(3):269-2711
[2] 张丽, 王凡, 刘航. 消痤胶囊的质量控制[J].陕西中医, 2007, 28
(10):1406-14071
[3] 刘萍, 古今, 周文斌1RP-HPLC 法考察枯芩与子芩不同部位中黄
芩苷含量和不同炮制方法的影响[J].中国药物应用与监测, 有高速、高效、高灵敏度、高度自动化等特点。运用此法的关键在于根据被测物的物理性质选定适宜的色谱柱, 配制适宜的流动相、调整适宜的色谱条件, 使黄芩苷和其它成分达到良好的分离, 此法可以作为制剂的含量测定和质量控制的手段。而常规紫外分光光度法是最简便的一种检测方法, 自20世纪50年代初导数技术引入紫外可见分光光度分析后, 导数分光光度法(derivative speetrophoto metry) 的应用范围迅速拓展。尤其在对多组分的同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰和复杂光谱的辨析等方面均体现出常规分光光度法无法比拟的优越性
[14]
。薄层扫描法方便快捷, 操作
简单, 点样是造成定量误差的主要来源, 采用自动点样装置, 可明显提高点样的准确度。H PCE 在现今的药物分析中, 与H PLC 相比, 具有柱效高、分析速度快、进样体积小、易清洗等优点, 而且HPCE 更适合于直接分析水溶液及未经纯化的样品, 不需要消耗大量的高纯有机试剂, 容易冲冼再生。目前, HPCE 法已成为中药指纹图谱研究的重要方法。但是H PCE 的稳定性、重现性稍差, 因此, 在用H PCE 进行定量分析时, 常加入内标以提高其稳定性和重现性
[15, 16]
。高效液相色谱
串联质谱(HPL C-MS /M S) 是一种集高效分离和多组分定性、定量于一体的系统, 对高沸点、不挥发和热不稳定化合物的分离和鉴定具有独特优势, 成为近年来分析化学中发展非常快的一种新技术。在过去10多年的时间里, 随着电喷雾电离(ESI) 和大气压化学电离(APCI) 技术的发展, L C -MS/MS的应用领域迅速扩展。通过选择监测一级质量分析器(MS1)和二级质量分析器(MS2),可以有效降低本底噪音的干扰, 在很大程度上提高检测灵敏度, 是衡量检测的优选方法
[17]
。
2007, 4(2):23-251
[4] 刘平, 王艳君1H PLC 法测定开光复明片中黄芩苷的含量[J].中
国药房, 2007, 18(27):2130-21311
[5] 李运景, 陈钧茂, 张锦兴, 等1HPLC 测定清肺合剂中黄芩苷的含
量[J].药品评价, 2007, 4(4):313-3141
[6] 刘延君1用乙醇作为流动相测定黄芩中有效成分-黄芩苷[J].
齐鲁药事, 2006, 25(9):536-5371
[7] 李伟佳, 王强1HPLC 测定4种中药制剂中栀子苷和黄芩苷的含
量[J].中成药, 2007, 29(8):1177-11791
[8] Ak ira Kotan, i Satos h iKoji m a , H i dek iH aka m at a , et al 1HPLC w it h elec 2
troc h e m ical detecti on t o exa m i ne the phar macok i netics of bai cali n and baicalei n i n rat plas ma after oral ad m i n i strati on of a K a mpo med ici ne [J].AnalyticalBioche m i stry , 2006, 350(1):99-1041
[9] 渠莉, 胡茗, 李景云1复方黄芩凝胶剂的研制及临床观察[J].天
津医科大学学报, 2005, 11(4):614-6171
[10] 王晓琴, 赵瑛, 支德娟, 等. 水提物中黄芩苷含量的测定方法[J].
时珍国医国药, 2006, 17(10):1898-18991
[11] 李梦, 孟蕾蕾1薄层扫描法测定清喉咽合剂中黄芩苷含量[J].
中国中药杂志, 2002, 21(8):495-4961
[12] 潘细贵, 阮晓琪, 汪洋1高效毛细管电泳法测定消炎抗菌胶囊中
黄芩苷的含量[J].中国中医药科技, 2007, 14(4):275-2761[13] Y oungH oon K i m , DongW on Jeong , In Bok Paek , et a l 1Liqu i d ch ro 2
m at ography w i th tande m m ass spectro m etry f or t he s i m u ltaneous de 2ter m i nati on of bai cal ei n, bai cali n , oroxyli n A and wogon i n i n rat p l as 2m a [J].Journ al ofChro m atography B , 2006, 844(2):261-2671
[14] 罗小敏, 陈建真. 黄芩及其制剂中黄芩苷定量方法研究进展[J].
世界科学技术, 2006, 8(5):76-791
[15] 晏媛, 刘世霆, 许重远, 等. 高效液相色谱法同时测定蒲公英中咖
啡酸和阿魏酸的含量[J].中国现代应用药学杂志, 2006, 23(3):229-2311
[16] 曹秀明, 郑蔚红, 苑树俐. 高效毛细管电泳在中药鉴别中的应用
[J].时珍国医国药, 2005, 16(3):223-2241
[17] 应永飞, 陈慧华, 吴平谷1高效液相色谱-串联质谱在兽药残留
分析中的应用[J].分析科学学报, 2008, 24(3):359-3661