实验五水中细菌总数的测定
实验五 水中细菌总数的测定
实验目的
l.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2.了解水源水的平板菌落计数的原则。
基本原理
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
实验器材
l.培养基 肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。
2.仪器或其他用具 灭菌三角烧瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管等。 操作步骤
l.自来水水样的采取：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
2.自来水细菌总数测定
①用灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。
②分别倾注约15mL己溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
③另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL作空自对照。 ④培养基凝固后，倒置于37℃ 温箱中，培养24h，进行菌落计数。 ⑤两个平板的平均菌落数即为lml水样的细菌总数。
实验报告
2.思考题：从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？
实验六 酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
目的要求
1、观察酵母菌的形态及出芽方式，学会区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
实验原理
酵母菌是不运动的单细胞真核型微生物，其大小通常比细菌大。大多数酵母菌以出芽的方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性的燃料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。
实验器材
1、菌种 酿酒酵母培养约2d的麦芽汁（或豆芽汁）斜面培养物。
2、溶液或试剂 0.1％碱性美兰蓝染色液。
3、仪器及其它用具 显微镜、载玻片、盖玻片等。
操作步骤
1、在载玻片中央加一滴0.1％碱性美兰蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌苔放载染液中，混合均匀。
染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。
2、用镊子取一块盖玻片，先将一端与菌液接触，然后慢慢把盖玻片放下使其盖在菌液上。
盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。
3、将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
4、染色约半个小时后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。
实验报告
1、结果
绘图说明所观察到的酵母菌的形态特征。怎样鉴别死活细胞？分析出现这种结果的原因？
2、思考题
比较酵母菌和细菌的形态、构造和繁殖方式？