血凝和血凝抑制试验中制备红细胞悬液的几点体会_李丽
2015年第45卷·第06期
zongshuzhuanlu
综述专论
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血凝和血凝抑制试验中制备红细胞悬液的几点体会
李丽
(甘肃省崇信县畜牧兽医局,甘肃崇信744200)
在血凝和血凝抑制试验中由于操作不当而造成制备的红细胞悬液因不符合实验要求,容易造成实验结果失摘要:
败。通过在实验室的实际操作和分析总结,提出了以下操作注意事项。红细胞悬液;制备;体会关键词:
中图分类号:S131+.3文献标识码:A文章编号:1006-799X(2015)06-25-02DOI:10.15979/j.cnki.cn62-1064/s.2015.06.022
血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)又称为红细胞凝集和红细胞凝集抑制试验(以下以高致病性禽流感为例),主要是指不同种红细胞的凝集或抑制,而血凝主要是某些病毒或病毒的血凝素,能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集的现象。当病毒的悬液中先加入特异性的抗体(含该病毒抗体的血清),且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素(抗原与抗体完全结合)时,红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触,这时红细胞的凝集现象就被抑制,则为红细胞凝集抑制试验。在该试验中,以红细胞作为载体来进行凝集反应,由于试验结果的判定直接依赖于红细胞的凝集状态,因此,制备红细胞悬液是该试验操作的一项重要环节。通过在实验室的不断操作,并经过不断的分析和总结,得出了以下制备红细胞悬液的几点操作体会。
抗体测定,效价差异很大,不同浓度的红细胞对抗体测定也有影响,导致试验结果有偏差。
2采血前的准备
采血前鸡只应供给充足饮水,特别是气温较高时,由于鸡脱水导致血液粘稠,极易在采血过程中使血液发生凝结,不利于红细胞的洗涤。
冬季采血时,要保证室内温度不宜过低,防止冻结,以免溶血,不利于红细胞的洗涤。
采血器械一般选用带有小号针头的一次性注射器,采血前应先向注射器内吸取至少与采血量等体积的阿氏液。相关资料介绍仅吸取阿氏液1mL,采血2~3mL,经过试验,易出现由于阿氏液不能将进入注射器的血液及时混匀稀释,特别是采血过程操作时间较长时,血液在注射器内易发生凝结,造成采集的血液最终不能使用。
1采血鸡的选择
血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)中的鸡要求为SPF鸡,SPF鸡是指无特定病原体的鸡,也就是没有目前国际、国内流行的鸡疫病感染史,也没有携带这些疫病病原和抗体的鸡。由于不同来源、不同浓度的红细胞会使结果差异很大,所以红细胞来源一定要相同,实际工作中,由于试验条件受限,一般选用3只未经疫苗免疫、无新城疫和禽流感抗体的健康公鸡来提供红细胞,将3只公鸡的红细胞混合在一起,也可由1只公鸡来提供红细胞,但必须经临床多次使用证明是可行的。有抗体鸡提供的红细胞需要多次洗涤,但要注意有时不同的公鸡提供的红细胞对禽流感H5亚型
3采血
3.1采血环境对采集的血液的影响
一般适宜在阴凉的环境下进行,如阳光直射或环境温度较高,血液的采集过程中也容易发生凝结,导致采集的血液不能进行洗涤。
3.2一般多选用翅静脉采血
采血部位选取翅根部位静脉,此处由于血管较粗,容易进针,采血成功率高。采血过程中注射器活塞后拉幅度不宜过大,以免注射器内负压过大,对红细胞造成破坏。
3.3采血完成后应立即持注射器上下轻轻颠倒
将血液与阿氏液充分混匀,然后拔掉注射器针头,
(下转第28页)
作者简介:李丽(1988-),女,甘肃崇信人,助理兽医师,主要从事动物疫病预防控制方面的工作。
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综述专论
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装配套和推广应用。对新发展的养羊场、户从圈舍建造、品种改良、饲草料储备、疫病防控、动物保健、饲养管理和市场营销等方面加强培训,做好跟踪指导全程技术服务,提高科技在肉羊生产中的贡献率。
生态环境、人类健康条件的安全和全面改善。量、
3.7加快畜禽交易市场的建设进度,提升品牌效应
抓好甘肃文峰活畜暨畜产品交易市场建设,建成覆盖陇中地区集活畜交易、屠宰冷藏、物流配送、畜产品展销、电子商务、市场信息服务为一体活畜及畜产品交易中心,发挥市场带动作用,促进肉羊产业的快速发展。要把打造地方品牌作为工作的抓手,把精深提高产品附加值以及扩大产加工作为延伸产业链条、
业影响力的重要举措,在甘肃仁寿农产品开发有限公司的带动下,抓好陇西百草药膳羊的品牌推广,加快无公害、绿色、有机食品认证步伐,提高陇西县羊肉市场竞争力。
3.6加强动物疫病防控,保障肉羊生产安全
在规模养羊由于饲养密度较高、容易造成应激,结合春秋两季动物疫病防控工作的开展,认真做好重大动物疫病强制免疫的前提下,加强羊痘、羊肺疫、羊肠毒血症、羊疥癣等传染病的防治工作,同时要加大引进种羊的疫病监测力度,防止小反刍兽疫等新病病源引入,要加强对肉羊畜屠宰、兽药饲料经营铺的管理,全面开展羊肉产品质量安全专项检查,确保产品质
(上接第23页)
防疫员在技术层面上不好确认,给信息登记工作带来困难。有些村级防疫员责任意识不强,不愿走进圈舍查看确认,存在补贴对象不准确、数据不真实的现象。此外,耳标登记、建档立卡工作量大面广,加之耳标自耳标号磨损不清,家畜流动频繁等然脱落,人为损坏、客观因素的影响,为下一年度新增能繁母畜的确认登记和管理工作,带来不便。
新增可循,遇事敢于承担,确保在能繁母畜基数认定、确认、畜主申报、数据核实、张榜公示、建档立卡、审核审定、兑现补贴、能繁母畜管理等各个环节,不出纰漏,让工作做实做好,切实服务于民,让该项惠农政策走的更好更远。
最后,强化监督、确保数据准确。县乡工作领导小暗箱操作、虚报组,要及时进行督查,对发现优亲厚友、数据、套取资金等问题,及时责令整改,坚决制止,使得补贴工作做到更加公开、公平、公正。
和政县农牧部门和乡镇政府应成立能繁母畜补贴工作领导小组,并设立咨询办公室和公布举报电话号码,及时答复群众咨询,对工作人员和养殖户遇到的问题给予现场解决,把矛盾解决在萌芽状态,不让矛盾激化和任其发展,使得县农牧部门和乡镇政府干部的思想进一步提高,工作作风得到进一步转变,干群关系得到进一步密切,为民务实清廉的形象得到进一步树立。
4对策
首先,政策宣传、要及时到位。通过电视、发放宣传举办培训班等方式,做到政策公开,家喻户晓;做到单、
操作公正,群众满意;做到程序透明,接受群众和社会监督。其次,深入调研、制定实施方案,在制定实施方倾听养案的过程中,一定要深入基层,了解养殖情况、殖户的心声,征求乡(镇)、村和乡畜牧站工作人员的意见,求同存异,群策群力,使得该方案更加便于操作,更加科学合理。再次,强化责任意识、明确职责。加强组织领导,细化分工,靠实责任,严格要求,做到有章
(上接第25页)
将采集的血液轻轻推入装有PBS液的试管中。
期不宜超过3d。
41%的鸡红细胞悬液的制备
将采集的至少3只公鸡的血液置于离心管内混合,加生理盐水,置离心机以1000r/min离心10min,弃去上清液,吸去红细胞上层的白膜,然后加本试验要求pH7.2,0.01mol/L的PBS液,用大拇指垫纸缓慢颠倒3 ̄4次,以混匀沉淀的红细胞。用同样的方法离心洗涤3次,待最后一次离心完成后,弃去上清液,用移液器吸取红细胞泥1mL,加入到99mL的PBS液中,即制得1%的红细胞悬液,4℃保存备用,一般保存
5结果分析
红细胞悬液在制备过程中要尽量避免血液发生凝结和造成血球破裂,否则,制得的红细胞悬液将不能使用或造成检测结果发生误差或错误。一般情况下红细胞悬液在静置后应沉集于瓶底,上清液清凉透明,无悬浮物,轻轻晃动锥形瓶,红细胞似砂粒状均匀波动,如有血丝状物甚至团状物存在,则制备的红细胞悬液不能使用,最终还要经红细胞对照成立后才能确定制备的红细胞能否用于试验。
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