分析方法验证
验证、确认和转移的定义
USP分析方法的验证、确认和转移
一. 分析方法验证、确认和转移的定义 二. 分析方法验证 三. 分析方法确认 四. 分析方法转移 五. 总结
验证：
USP:分析方法验证是一个按照已建立的实验室研究来证 明方法的性能参数符合期望的分析应用要求的过程 ICH Q2(R1):分析方法验证的目标是阐明分析方法适用于它所期 望的应用目的 FDA 工业指南：方法验证是一个阐述分析方法适合于其使用目的 的过程 SFDA(验证)：证明任何操作规程(或方法)，生产工艺或系统能够 达到预期结果的一系列活动
验证、确认和转移的定义
确认： 转移：
验证、确认和转移的定义
:方法转移是一个文件化的过程，用于确定一个实验室(接 收方)有能力使用来源于另一个实验室(转移方)的分析方法，由 此保证接收方有知识和能力来应用该分析方法，以达到预期的 效果 将非法定方法从一个实验室转移至另一个实验室，即为分 析方法转移 通常不适用于法定方法，但可以参考
:USP-NF所收载方法的使用者不需要验证这些方法的准 确性和可靠性，但需要确认这些方法在实际使用条件下的适应性 :简而言之：是相关数据而不是重复验证过程 :确认包括所涉及方法的性能参数，如那些在本章节中描 述的 FDA：出现在USP中的方法被认为已验证，如果作为已批准的 ANDA的一部分，它们也被认为是验证过的 对于法定方法，厂家必须阐明该方法在实际使用情况下的状态
USP分析方法种类
类别Ⅰ—用于原料药中主要成分或药物制剂中 活性成分(包括防腐剂)定量测试 类别Ⅱ—用于原料药中杂质或制剂中降解成分 定量和限度测试 类别Ⅲ—用于性能参数测试 (如：溶出度、释 放度) 类别Ⅳ—鉴别测试
分析方法验证-------常规要求
USP：在验证开始阶段将待验证的目的清晰的 表述出来是十分必要的 ICH：分析方法的目标应能很清晰地被理解， 因为它将主导那些验证参数被评估
分析方法验证-------常规要求
Example： 1.原料药XXX的新生产工艺已被开发，本方法 是针对原料A色谱纯度测定的HPLC方法， 在供应商相关HPLC方法的基础上开发。本 HPLC方法验证按照ICH Q2B指南进行。 2.为验证原料A中残留溶剂(丙酮,二氯甲烷,甲 醇)检验方法的准确性和可靠性，依据ICH 指导原则，制定本方案。
分析方法验证-------常规要求
验证实施所需的条件应明确提出 Example：液相测定 仪器、设备 试剂 对照品 色谱条件
验证方案
验证方案包括： 使用目的和分析方法描述 涉及的性能参数列表 适当的接受标准 源于法规要求的复核和批准人签名
验证方案
起草一个适合的验证方案，应考虑： 分析方法的目的 性能参数列表的选择 基于以下方面考虑的适当的接受标准 ---使用目的(定性/定量) ---历史要求 ---来自研发部门针对QC/法定方法进行的 预验证数据
验证方案----性能参数
典型的性能参数包括：
●专属性 ●检测限 ●定量限 ●线性 ●范围 ●准确度 ●精密度(重复性、中间精密度、重现性) ●耐用性 ●系统适用性
性能参数----线性
线性方程：Y=a+kx a---Y轴截距：背景干扰(≤标准溶液响应值的n%) k---斜率 r2---线性相关系数 回归线的离均差平方和 SStotal=SSexplained+SSunexplained r2=SSexplained/SStotal
性能参数----线性
药物X中有关物质测定 目的：检测含量在0.05%—2%的各种杂质 样品：药物X用流动相配制成1mg/mL 对照溶液：药物X用流动相配制成 0.002mg/mL(0.2%) 接受标准：相关性r2≥0.999 Y轴截距≤标准溶液响应值的20%
性能参数----线性
药物X杂质水平的线性原始数据
杂质水平(%)浓度(ug/mL) 2.0 20.363 1.0 10.182 0.5 5.091 0.2 2.036 0.1 1.018 0.08 0.814 0.05 0.509 峰面积 21797 10340 4890 1863 885 633 261
性能参数----线性
性能参数----线性
线性数据是否达到预设标准？预设标准是否合 适？ 相关系数R² = 0.9994＞0.999 Y-截距：355.49＜（1863×20%=373）
性能参数----线性
杂质水平(%) 浓度(ug/mL) 峰面积 %VS standard 2.0 20.363 21797 117 1.0 10.182 10340 111 0.5 5.091 4890 105 0.2 2.036 1863 100 0.1 1.018 885 95 0.08 0.814 633 85 0.05 0.509 261 56 F值 F值RSD(%) 9.34E-04 9.85E-04 1.04E-03 1.09E-03 28.9 1.15E-03 1.29E-03 1.95E-03
性能参数----线性
线性/准确度---在0.5-2%范围，应在± n% 或F值RSD ≤n% 响应因子F对浓度 C作图
性能参数----系统适用性
相对标准偏差(RSD) 标准溶液的重复进样 系统重复性的评价 ---对于要求不超过2.0%的，测试物进样5次 ---对于要求大于2.0%的，测试物进样6次 ---对于主药成分在1.0—2.0% ---有关物质在5.0—15.0%
分析方法确认
USP: 验证：使用确定好的样品对分析方法进行挑战 确认：使用确定的方法对试验环境进行挑战，包 括以下因素： ----分析员 ----设备 ----试剂 ----其他因素 常规测试一般不需要确认(水分、重金属、炽灼残渣等)
针对原料药和辅料进行确认的数据要求 (包括但不限于以下项目)
方法种类 HPLC/GC Spectro.or colorimet Titration TLC Gel Electro 类别I P P P ----类别Ⅱ 定量 P,S,LOQ P,LOQ P S,LOQ S,LOQ 限度 S,LOD S,LOD --S,LOD S,LOD 类别Ⅲ ----------类别Ⅳ S S --S S
针对制剂产品进行确认的数据要求 (包括但不限于以下项目)
方法种类 HPLC/GC Spectro.or colorimet Titration TLC Gel Electro 类别I P,S,L P,L P,L ----类别Ⅱ 定量 P,S,LOQ P,LOQ P S,LOQ S,LOQ 限度 S,LOD S,LOD --S,LOD S,LOD 类别Ⅲ P P ------类别Ⅳ S S --S S
P-Precision；S-Specificity；L-Linearity；LOD-检测限；LOQ-定量限 精密度 专属性 线性
P-Precision；S-Specificity；L-Linearity；LOD-检测限；LOQ-定量限 精密度 专属性 线性
确认过程
没有通用的确认方案
确认
分析方法转移
什么时候需要进行方法转移？ ---研发实验室至QC实验室 ---A场地至B场地(同一公司内部或不同公司之间) ---QC实验室至合同实验室 ---A仪器至B仪器 到目前为止还没有官方发布的关于分析方法转移 的指导原则
按所写的进 行测试
全验证
转移方式
方法转移
比较测试
---目的：表明验证过的方法在两个或更多实验室 使用的一致性 ---比较测试是最常用的方法转移方式 ---用已验证过的方法进行 ---不需要挑战所有验证参数；是比较性研究 ---两个实验室检测相同的样品(集)：
1.选择有良好批均匀性的样品 2.确保样品在所有实验室都在预定的时间范围内得到检验 3.对于用于降解研究的方法，使用含有在定量限或更高水平杂质的样品
比较测试
共同验证
验证/重验 证
转移免除
比较测试---数据评估
---观察所有产生的数据： 确保数据符合可接受标准 确保在各实验室之间的偏差和平均值相符并和 以往的经验符合 确保没有偏移
比较测试---数据评估
---常用的用于设定可接收标准的统计学参数： T-test F-test ANOVA(单因素方差分析) f2(溶出度) RSD
共同验证
---接收方作为验证团队的一员，参加转移方的实 验室间共同验证 ---当方法未被完全验证时 ---通则法定方法验证提供了指导，以说 明哪些参数适合用于验证测试 ---接收方实验室的验证数据将包含在方法验证报 告中作为方法转移的证据
重验证
---接收方重复部分或全部验证试验来挑战适用的 验证性能参数 ---这种方式更费时，更难发现存在于两个不同实 验室、操作人员及仪器间的差异 ---不能保证实验室间测试方法的等效性
转移免除
接收方实验室能在不进行跨实验室比较测试的情 况下使用检测方法 何时使用： ---新产品配方与现有产品类似，且接收方已有这 样的分析经验 ---转移的方法与现在已使用的方法相同或类似 ---负责产品开发、验证或日常分析的转移方人员 调职于接收方
方法转移
总结：转移
已验 证？ NO
Yes
能转移免 除吗？
Yes 转移免除
NO Yes 能用比较 测试吗？ NO
有接收方 吗？
比较测试
Yes 共同验证
重验证
方法转移要素
---培训 ---方案 ---检验规程 ---设施和仪器 ---样品和标准品 ---转移报告
培训
---转移方应对接收方提供培训，或者接收方须在 转移方案批准前进行预实验来发现可能需要解 决的问题 ---培训依据开发的阶段、方法的复杂程度以及对 于相关仪器的经验 ---涵盖尽可能多的检验程序相关的技术项目包括 安全事项和方法的注意事项 ---对培训和分析员的确认进行记录
方案
---在分析方法转移执行前应讨论、商定并起草精 心设计的方案 ---方案至少应包括以下内容： 1.范围 2.转移方和接收方的职责与责任 3.检验规程 4.实验设计和接受标准
检验规程
---检验规程应包含充分的细节及明确的指导，使 得经过培训的分析员能够毫无困难的执行 ---应由明确规定重复次数以及进样顺序 ---如果有完整或者部分验证数据，此信息应提供 给接收方，包括任何检测相关的技术细节
设施和仪器
---接收方应确保设施和仪器经过恰当的校验和确 认，并确认实验室系统符合相关的法规和内部 实验室通则的要求 ---一个经过精心设计的系统适用性测试能帮助发 现仪器的问题
样品和标准品
---尽量使用法定标准品 ---当涉及的实验室处于不同地理区域，标准品尤 其关键
转移报告
当分析方法转移完成后，接收方应起草方法转移 报告，报告要包含获得结果和可接收标准的对比 以及确认接收方是否适合来运行此方法的结论
---两个实验室的数据应一致 ---两组数据应同方案中的可接受标准进行比较 ---包含任何对于方案的修正和偏差，以及这些变化发生的原因和影响 ---应由转移方和接收方共同批准
方法转移的程序
差异分析
如果不能符合可接受标准，应启动调查来确定失 败的原因
Summary
分析方法验证：分析方法用于非药典物 质或使用替代方法测试药典物质 分析方法确认：第一次使用USP方法测 定药典物质需进行方法确认 分析方法转移：将非法定方法从一个实 验室转移至另一个试验室
Summary
执行一个新方法
验证？
NO
验证
Yes
是否药典方 法？
Yes
NO
转移
确认
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