应用均匀设计优化中药复方冰茶栓 - 辽宁中医杂志

　

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应用均匀设计优化中药复方冰茶栓

姚广涛, 冯　燕, 魏雄辉

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(1. 北京大学化学与分子工程学院天然药物室, 北京100871; 2. 浙江中医学院药理教研室, 浙江杭州310053)

摘　要:目的:优化中药复方冰茶栓的组方。方法:采用均匀设计法, 以痛阈提高百分率为考察指标, 对冰茶栓中起

主要镇痛作用的江浙蝮蛇毒、茶叶提取物、冰片的组成进行研究, 以使处方得到进一步优化。结果:镇痛实验筛选优化所得的处方为蛇毒8mg, 茶咖啡碱80mg, 冰片56mg 。结论:江浙蝮蛇毒是冰茶栓中起镇痛作用的关键药物, 冰片和茶叶提取物起协同促进作用; 同时证明, 均匀设计法可行简便, 有助于考察复方药物组成规律, 从而充分发挥中药组方药效。

关键词:冰茶栓; 镇痛; 组方; 均匀设计中图分类号:R285. 6　　文献标识码:B 　　文章编号:1000-1719(2006) 05-0609-02　　复方中药戒毒制剂冰茶栓由江浙蝮蛇毒、茶叶提

取物、冰片等药物组成, 具有解毒止痛、开窍醒神之功效, 能显著控制以疼痛为主的海洛因成瘾戒断症状[1], 经临床验证, 患者在5～7天可完全脱离生理依赖, 并能明显降低复吸率[2]。表达谱基因芯片筛选实验表明, 冰茶栓可对猴脑纹状体中多种内源性阿片肽基因表达进行调节[3]。由于本品是复方制剂, 为考察其药物组成规律, 以便更好地开发利用, 本文采用均匀设计法, 对冰茶栓中起主要镇痛作用的江浙蝮蛇毒、茶叶提取物、冰片的组成进行了研究, 以期进一步优化处方, 揭示中药组方依据。1　材　料

动物:, , :003号。药物:halys (Pallas ) ]蛇; 天然茶咖啡碱由中国农业科学院茶叶研究所提供; 冰片购自贵州省罗甸制药厂。仪器:热板测痛仪, G J -8402型, 宁海白石电子医药仪器厂; 磁力恒温搅拌器, 78H W -1杭州电机厂; 电子天平, L ibr or Ael -160型, 上海天平仪器厂。统计工具:JYS J 软件包, 沈阳药科大学设计。2　方　法

采用均匀设计U 5(54) 表, 以药物为因素, 确定5个水平, 考察因素及水平标准见表1, 剂量配比见表2。预先将小鼠在(55±1) ℃的热板测痛仪上作热敏试验, 测定基础痛阈值, 筛选痛阈在5～30s 内的动物50

只, 随机分为5组, 每组10只, 分别腹腔注射I 、II 、III 、I V 、V 种配比药物混悬液, 每只0. 1mg /10g,给药前及给药后第0. 5、1、2、3、4、5、6、7、9、12h 测痛阈, 计算痛阈提高百分率。结果利用JYS J 软件包处理, 并进行组方优化。

痛阈提高百分率=(给药后痛阈值-基础痛阈值) /基础痛阀值×100%

表1　冰茶栓组方考察因素与水平

水平

12345

表2　冰茶栓各组分的剂量配比均匀设计表

试验号

ⅠⅡⅢⅣⅤ

蛇素(mg )

02468

冰片(mg )

5070060茶咖啡碱(mg )

[1**********]0

3　结　果

, 各组动物痛, 组作用最强, 给药后, 4～5h 达到峰值, 镇痛作用持8h 见图1。

配方优化取峰值附近(4h ) 时间点的痛阈提高百分率为基准, 利用JYS J 程序处理后, 可得到:Y =0. 8723-0. 0003A ×B +0. 0005A ×C, r =0. 9999, F =1158. 15, 对镇痛的作用贡献次序为:蛇毒>茶咖啡碱>冰片, 其中蛇毒起了决定作用。优化结果为A 5B 1C 2, 即蛇毒8mg, 茶咖啡碱80mg, 冰片56mg 。按上述优选处方重复试验结果表明, 镇痛提高百分率为98. 30%, 与理论值100127%比较接近, 实验结果在估计范围内, 且镇痛作用显著, 表明优化处方更为合理。

图1　均匀设计中不同组方的镇痛时效

因素

蛇毒(mg )

02468

冰片(mg )

050607080

茶咖啡碱(mg )

[1**********]0

收稿日期:2005-

12-02

基金项目:国家九五中医药科技攻关基金资助[96-106-10-01(02) ]作者简介:姚广涛(1969-) , 男, 河南开封人, 主管药师, 博士, 研究方

向:药理学与中药新药开发。

本文作者还有:俞丽霞2, 张冰冰2

4　讨　论

复方是中医药的一大特色, 具有很多治疗优势。但如何优化处方组成, 并在此基础上发现靶药物、靶成分, 是一个亟待解决的问题。中药复方的研究可概括为全方研究与拆方研究。前者符合中医“理法方药”原理, 比较能说明复方药效与临床治疗作用之间的相关性。但是, 由于复方药物的多靶点、多成分的特点, 为深入探讨复方制剂的组方依据或作用机理时还要进行拆方分析。常用的拆方研究方法大致有3种[4]:正交或均匀设计法、撤药分析法和简单拆方法。其中, 均匀设计是在正交设计基础上, 将数论与多元统计相结合的实验设计方法, 适用于多因素、多水平的实验研[5]

究。因其特点为“均匀分散”, 使试验点有较好的代表性, 其试验数日可以较正交设计大幅度地减少。同时, 试验结果可通过计算机进行多元统计处理, 求得一个适量的回归方程, 定量地预测优化条件[6]。

本文采用均匀设计法, 对冰茶栓中江浙蝮蛇毒、冰片和茶咖啡碱3因素5水平进行配比优化, 节省了时间、动物数和药品。实验结果发现江浙蝮蛇毒是冰茶

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HP LC 测定心舒通片中芍药苷的含量

王　颖

(大连市皮肤病防治所, 辽宁大连116021)

摘　要:目的:研究心舒通片中芍药苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法, 以芍药苷为对照品, 测定处方

中赤芍中所含芍药苷的含量。结果:重现性良好, 阴性无干扰。结论:方法可行。

关键词:高效液相色谱法; 心舒通片; 芍药苷; 含量中图分类号:R284. 1　　文献标识码:B 　　文章编号:1000-1719(2006) 05-0610-01　　心舒通片是临床上常用中成药, 为更好地控制药

品质量, 采用高效液相色谱法以方中主药赤芍中所含芍药苷为含量测定指标, 经反复实验, 认为该方法分离度好, 重现性良好, 阴性无干扰, 方法可行。1　仪器与试药

高效液相色谱仪(SP D -10A 岛津仪器苏州有限公司) 、电子天平(AL204, 梅特勒-托利多上海称重设备公司) 。色谱柱:Chr o manalysis ODS 柱(250mm ×

μm ) , 柱温20℃, 流速1mL /min 。甲醇为色谱416mm , 5

纯, 其余试剂为分析纯。芍药苷(供含量测定用, 110736-200321) , 中国药品生物制品检定所。检测波长为230n m 。2　方法与结果2. 1　色谱条件与系统适用性试验　键合硅胶为填充剂; 甲醇-水-冰醋酸(∶791012) 为流动相; 检测波长为m 苷峰计算应不低于2. 2　　压干燥36h 25mL 量瓶中, 加甲醇使溶解, , 摇匀, 精密量取1mL , 置10mL 量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得(每l m L

μg ) 。中含芍药苷40

2. 3　供试品溶液的制备　取片重差异项下的本品, 除去包衣, 研匀, 取014g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 加入70%乙醇50mL , 密塞, 放置过夜, 超声处理30m in, 摇匀, 滤过, 药渣及滤器用70%乙醇20mL 分数次洗涤, 洗液并入滤液中, 蒸至近干, 残渣加70%乙醇微热使溶解, 转移至25mL 量瓶中, 加70%乙醇至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

μL , 供试2. 4　测定法　分别精密吸取对照品溶液10

μL , 注入液相色谱仪, 测定, 即得。品溶液10～20

2. 5　芍药苷含量测定线性关系试验　取芍药苷对照品14101mg, 置10mL 量瓶中, 加水使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取2mL , 置50mL 量瓶中, 摇匀, 精密量取015、1、2、4、8mL , 置10mL 量瓶中, 加水稀释至刻

μL , 分别注入液相色谱仪, 测度, 摇匀。精密量取各20

定峰面积。以峰面积(Y ) 对进样量(X, μg ) 进行线性回归, 回归方程为Y =946386X -323913, 相关系数R =019995。结果表明, 芍药苷进样量在01056～

μg 范围内, 峰面积与进样量线性关系良好。018966

2. 6　色谱峰绘制及阴性干扰实验　精密吸取对照品

μL , 注入液相色谱仪溶液、供试品溶液及阴性液各10

中, 按前述色谱条件测定, 绘制液相色谱图, 由色谱图栓中起镇痛作用的关键药物, 冰片利茶咖啡碱起协同促进作用, 提示江浙蝮蛇毒中具有较强的镇痛组分, 通过对其进行分离提取, 并配伍冰片和茶咖啡碱将有希望制备一种成分明确的镇痛新制剂。

参考文献:[1]　俞丽霞, 匡唐洪, 叶勇, 等. 冰茶栓对动物的脱毒药效学评价[J ].收稿日期:2006-01-17

作者简介:王颖(1965-) , 女, 辽宁盖州人, 副主任药师, 学士, 从事中药

制剂及质量研究。

可知, 在与对照品色谱相应的位置上, 供试品溶液具有相同的保留时间的色谱峰出现, 而阴性液在此峰位无干扰。在规定的色谱条件下, 芍药苷与其他组分色谱峰分离度良好。2. 7　精密度试验　取线性关系试验项下的3号溶液,

μL , 连续测定6次, 平均值为212651, RS D 精密量取20

为1111%。本法精密度良好。2. 8　稳定性试验　精密吸取供试品(批号050701) 溶

μL , 每隔2h 进样测定1次, 共测定8h, RS D 为液10

0152%, 结果表明, 8h 内基本稳定。2. 9　　(批号050701) , 按, 分别测定含量, 01D 156%, 表明重现性2. 　取芍药苷对照品10145mg, 置, 加水使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为加。供试品溶液的制备:精密称取已知含量的样品(批号050701芍药苷含量01104%) 012g, 加入芍药苷对照品溶液(011045mg/mL) 1mL , 按质量标准[含量测定]项下方法操作, 测定回收率, 结果平均回收率为99151%, RS D 为1182%, 结果见表1。

实测值-样品中含量

回收率×100%

对照品加入量

表1　加样回收率的测定结果

样品中含量

编号供试品取样量(g ) (mg )

[***********][***********][***********][1**********]加入量

(mg ) [***********][1**********]5测得量回收率(%) (mg )

[***********][***********][***********]62. 11　含量测定　制定含量限度, 制备供试品5批, 按上述测定方法测定5批样品中芍药苷的含量, 结果分别为0133、0135、0137、0134、0135mg /片。

根据上述测定结果, 并参照中国药典2005年版有关品种的含量规定, 暂定本品每片含芍药苷不得少于0. 3mg 。3　讨　论

芍药苷为赤芍的主要成份之一, 本法能较好地定量测定心舒通片中赤芍的含量, 方法简便、准确, 可行作为心舒通片的控制质量指标。

　　浙江中医学院学报, 2002, 26(4) :54[2]　王泽时, 郭勇, 陈震. 神农戒毒栓治疗海洛因成瘾28例疗效观察

[J ].浙江中医学院学报, 1999, 23(4) :23[3]　叶勇, 俞丽霞, 王泽时. 冰茶栓对猴大脑内源性阿片肽基因表达的

影响[J ].中医药学刊, 2003, (1) :38[4]　王泽时, 俞丽霞, 李范珠. 复方中药研究的思路与体会[J ].浙江中

医学院学报, 2000, 24(1) :83[5]　曾昭钧. 均匀设计及其应用[M].沈阳:辽宁人民出版社, 1994. 5[6]　林程涛. 应用均匀设计筛选补阳还五汤处方[J ].中药材, 1997, 20

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