大蒜素对黏液表皮样癌细胞株抑制作用的研究
・987・
・实验研究・
大蒜素对黏液表皮样癌细胞株抑制作用的研究*
吴发印1
陈琼1
周鹤峰2黄进2
[摘要]目的:观察大蒜素对人涎腺黏液表皮样癌MEC-1细胞株的抑制作用,初步探讨其抗癌机制。方法:
MTT法观察大蒜素不同浓度及不同作用时间对人涎腺MEC-1细胞的影响,流式细胞术分析大蒜素不同浓度及不同作用时间对人涎腺MEC一1细胞周期变化的影响。结果:MTT实验显示不同浓度的大蒜素对涎腺MEC一1细
胞均有抑制作用,随着浓度和作用时间的增加而呈上升趋势;流式细胞仪检测显示大蒜素对涎腺MEC一1细胞周期的影响表现为Go/G。期的细胞比例下降,S期无明显变化,而处于Gz/M期的细胞增加,即细胞阻断在M期,
随浓度增大、作用时间延长明显增强。结论:大蒜素可有效抑制人涎腺MEC-1细胞的生长。
[关键词]黏液表皮样癌,大蒜素;抑制作用[中图分类号]R739.6
[文献标志码]A
[文章编号]
1001—1781(2010)21—0987—03
Study
on
inhibitoryeffectsofallicininmucoepidermoid
carcinomacells
Ⅳ【,FayinlCHENQion91ZHOUHPfeng
2
HUANGJin
2
(1DepartmentofStomatology,theFifithAffiliatedHospital,ZunyiMedicalCollege,Zhuhai,519100,China;2DepartmentofBiotechnology,ZunyiMedicalCollegeZhuhaiCampus)Corresponding
Abstract
cin
on
author:WUFayin(Email:wfy660505@sina.corn)
MEC-1.Method:CellproliferationweremeasuredbyMTT
assayat
Objective:Toobservetheanticancermechanismofallicinbyobservingtheinhibitoryeffectofalli—
humansalivaryglandcarcinomacellline
differentdosesanddifferenthours.Inthemeantime,cellcyclewasdetectedviaflowcytometryafterdifferentdoseincubationwithdifferentincreasedin
a
hours.Result:MTTresultsshowedthattheinhibitory
ratesof
MEC-Iproliferationswere
percent-age
concentration-andtime-dependentmanner.Flowcytometryanalysisshowed
ofMEC-1
ceilsdecreasedinmainlyblockedin
Go/G1phaseandincreasedinG2/M.ButtherewasMphase,andtheinhibitoryeffectoftheallicin
can
on
no
evidentchangeinSphase.Thecellswere
MEC一1ceilsincreasedwiththeincreasingofMEC-1cellsinvitrodramatically.
concentrationandtime.Conclusion:Allicin
Keywords
inhibitthegrowthof
mucoepidermoidcarcinoma;allicintinhibition
大蒜素具有抗细菌、抗真菌、降血压、降血脂、抗癌变等多方面的药理作用。随着人们对大蒜素研究的日益深入,特别是其良好的抗癌、防癌作用更成为人们关注的热点。大蒜素对胃癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、膀胱癌、舌鳞状细胞癌等多种肿瘤均有明显抑制作用,但在口腔涎腺方面未见研究。发生于涎腺的恶性肿瘤以黏液表皮样癌为多见H3。笔者通过细胞培养及MTT实验、流式细胞术,观察不同浓度大蒜素对人涎腺黏液表皮样癌MEC一1细胞体外增殖影响,初步探讨大蒜素对人涎腺MEC_1细胞的抗癌机制。
I材料与方法
I.I材料
人涎腺MEC-1细胞由第四军医大学口腔医学院提供,大蒜素注射液由山东鲁抗辰欣药业有限公司生产,5-FU由上海旭东海普药业有限公司生产,碘化丙啶(PI)为Fluka公司生产,流式细胞仪型号
为FACScan(B.DUSA)。
1.2方法
细胞培养:将人涎腺MEC—l细胞接种在50
ml
的培养瓶中,用含10%小牛血清的RPMll640培养液,37℃,含50ml/LCO:培养箱内培养,细胞贴壁80%时传代,1周2---3次。
MTT法实验:取对数生长期的人涎腺MEC-1
。基金项目:广东省珠海市科学技术局[2009153
1遵义医学院第五附属(珠海)医院口腔科(广东珠海,
519100)
细胞用EDTA一胰酶混合液消化,调整细胞密度至
1×108/L,以100I|l接种于96孔培养板,孵育12h后按0.1、1.0、10.0、100.0mg/L浓度梯度分别加
2遵叉医学院珠海校区生物工程系
通信作者:吴发印(Email:wfy660505@sina.corn)
入大蒜素、5-FU,每一浓度重复3孔,每孔100弘l,
・988・
JClinOtorhinolaryngolHeadNeckSurg(China),Nov2010,Vol
24,No21
对照组加等量PBS,孵育48h,每孔加入MTT
(5
期的细胞增加,即细胞阻断在M期,随浓度增大、作用时间延长明显增强,见表2。
3
g/L)继续孵育4h,倾去所有上清,每孔150肛l
以酶联免疫仪测定各孔A。。。值。消化对数生长期的
人涎腺MEC-1细胞,调整细胞密度至5×107/L,以
讨论
大蒜含复杂的化学成分,主要包括大蒜素、蒜氨酸、微量元素等。现代药物化学研究证明,大蒜素中所特有的有机含硫化合物对许多革兰氏阴性茵和革兰氏阳性菌以及真菌有很强的杀菌作用,已广泛应用于抗真菌、抗细菌、降血脂、降血压、防治动脉粥样硬化等心血管疾病,而且还有良好的抗癌、防癌作用汜q3。王海燕等唧在观察大蒜素对胃癌细胞株及移植瘤的作用中,发现不同质量浓度的大蒜素对SGC一7901和MGC一803胃腺癌细胞均有一定的杀伤作用,瘤体组织切片中可见大片肿瘤组织坏死,得出大蒜素可以直接杀伤胃癌细胞的结论。Wu等¨3报道,大蒜素诱导人非小细胞肺癌A549细胞的凋亡,并将细胞周期阻滞于G。/M期,且呈时间和剂量依赖关系。江永青等吖3发现大蒜素可使乳腺癌MDA—MB-231细胞的增殖受到抑制,并促进肿瘤细胞凋亡。Sengupta等∞3报道了大蒜素能抑制鼠结肠癌增生并诱导凋亡。Riggs等。3发现大蒜提取液浓度为31.3g/L时,对膀胱癌MBT-2肿瘤细胞的抑制率为29.9%;当浓度为
62.5
100扯l接种于96孔培养板,孵育12h,然后分别加
入终浓度为20mg/L的大蒜素、5-FU,每孔
100“l,重复3孔,对照组加等量PBS,每天更换含药液的培养液.分别在12、24、48、72h时间终止。测定各孔A。。。值。
流式细胞术分析:分别将人涎腺MEC_1细胞以2×106个接种于50ml培养瓶。孵育12h加入终质量浓度为1、5、10mg/I。的大蒜素。加药后分
别于4h、8h终止培养,EDTA-胰酶混合液消化,
PBS洗涤2遍。离心弃上清,重悬于1ml冰盐水中,置试管于振荡器上,加入750ml/L冰乙醇1
ml
固定。离心弃固定液,用PBS洗涤2次。将细胞悬浮于1ml预处理液中,37℃水浴10rain,离心弃
上清,加入0.05g/L碘化丙啶1ml,调整细胞密度
为1.0×109/L,在4℃下避光静置15布。相同实验重复3次。
2结果
rain,60gm
的尼龙网过滤。应用流式细胞仪分析细胞周期分
2.1大蒜素抑制人涎腺MEC-1细胞的MTT实
验
g/L或高于此时,对膀胱癌肿瘤细胞有明显
直接细胞毒活性(抑制率为98%)。Sigounas等n∞
大蒜素对人涎腺MEC-1细胞的抑制作用在
研究成熟大蒜提取物中的有机硫化物对红白血病细胞系HEL和OCIM一1的抗增生作用中,得出结论:其能有效抑制HEL和OCIM一1细胞增生,并诱导凋亡。唐瞻贵等¨¨对大鼠硬腭后份黏膜涂大蒜注射液,对其腭黏膜上皮标本进行光镜和透射电镜观察,发现其能有效抑制4NQO诱发的口腔癌前病变和口腔癌。Balasenthil等n约通过大蒜对雄性大鼠4NQO诱导的舌鳞状细胞癌发生的抑制作用,发现大蒜通过调节脂质过氧化反应和增强
h时才与5-FU相当,大蒜素对人涎腺MEC一1
48
细胞的抑制作用,随着浓度和作用时间的增加而呈
上升趋势,48h达到高峰,随后有所下降,见表1。
2.2大蒜素对人涎腺MEC一1细胞周期变化
人涎腺MEC-1细胞在浓度为l、5、10mg/L的大蒜素诱导后分别于4
h、8
h收集,流式细胞仪
检测。结果显示细胞周期发生明显变化,G。/G。期的细胞比例下降,S期无明显变化,而处于Gz/M
表1
大蒜素和5-FU对人涎腺MEC-I细胞的A一值
A值,j士s
0.217±0.0500.207士0.0140.181士0.0280.158士0.0080.i52士0.032
0.204±0.0250.171±0.0190.146±0.0120.137±0.0250.128士0.015
0.182士0.0330.154±0.010
0.176士0.034
0.181土0.0310.178士0.020
0.215士0.0360.197士0.032
0.186±0.025
0.186±0.0240.157±0.018
0.145土0.023
0.151土0.022
0.134±0.030
0.155士0.0190.151±0.0230.156±0.0130.127土0.0260.146±0.025
0.119士0.020
0.135土0.006
0.127±0.018
0.123士0.026
堕述璺差堕壁叁堡丛整壁查!!!!至!!旦筮!!鲞星!!塑
・989・
GSH、GPX和GST水平来发挥其化学预防作用。
本研究通过对人涎腺MEC-1细胞进行细胞培养及MTT法实验发现,大蒜素对人涎腺MEC-1细胞明显抑制作用,在高浓度时可与5-FU相当,大蒜素有对人涎腺MEC一1细胞的抑制作用随着浓度和作用时间的增加而呈上升趋势;流式细胞仪检测发现大蒜素对人涎腺MEC-1细胞周期的影响为G。/G,期的细胞比率下降,而Gz/M期的细胞增加,S期无明显变化,即细胞阻断在M期,且随浓度增大、作用时间延长明显增强。说明大蒜素可有效
抑制人涎腺MEC-1细胞的生长。
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wu
x
论文中表格的使用规范
表应具有“自明性”,表的内容不可与文字、插图重复。表应随正文,一般先见文字后见表。表一律用阿拉伯数字依序连续编排序号,统一从1开始,只有一个表则应标明“表1”。文中应按表序排列。一般采用“三线表”,即除上下表线(正线)外,加排表头横线(反线)。必要的合计应在其上方加一横线(反线)。表应按统计学的制表原则设计,力求结构简洁,主、谓位置合理,主语一般置表的左侧,谓语一般置表的右侧。
每一表应有简短确切的表题,表的各栏应标明标目词,参数栏的标目词一般为量或测试项目及单位符号。如表中所有参数的单位相同,可标注在表的右上方。平均值±标准差(z±s)应标在表的右上方“单位”后。若各栏参数单位不同,则应采用“物理量名称/单位符号形式”[如:BP/mmHg,TC/(mmol・L-1)]标注在各栏标目词后。表格中的计量单位一律使用外文符号,而不用中文名称。表中的量、单位、符号、缩略语等必须与正文一致。
表内小数点后位数要统一。表内不宜用“同上”、“同左”等类似词,一律填入具体数字或文字。表内“一”或“…”(因“一”可能与代表阴性反应相混)代表未测或无此项,“o”代表实测结果为零。
表中不设“备注”栏,如有需说明的事项(例如P值等),可在表内有关内容的右上角用小号阿拉伯数字并加半圆括号(如¨、∞、3’)标注(不宜用星号“*”,以免与数学上共轭和物质转移的符号相混),在表下用简练的文字注释。P值应按P<o.05、P>o.01、P<o.01顺序排列,一般情况下P>o.05可不标注。
需要转页的表,应在续表的右上角或左上角注明“续表”。
大蒜素对黏液表皮样癌细胞株抑制作用的研究
作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):被引用次数:
吴发印, 陈琼, 周鹤峰, 黄进, WU Fayin, CHEN Qiong, ZHOU Hefeng, HUANG Jin吴发印,陈琼,WU Fayin,CHEN Qiong(遵义医学院第五附属(珠海)医院口腔科,广东珠海,519100) , 周鹤峰,黄进,ZHOU Hefeng,HUANG Jin(遵义医学院珠海校区生物工程系)临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
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引用本文格式:吴发印. 陈琼. 周鹤峰. 黄进. WU Fayin. CHEN Qiong. ZHOU Hefeng. HUANG Jin 大蒜素对黏液表皮样癌细胞株抑制作用的研究[期刊论文]-临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2010(21)