防治烟草立枯病杀菌剂的室内筛选10-01-25

烟草立枯病杀菌剂的室内筛选

陈志敏1，张绍升2

1湖南省烟草公司张家界市公司，湖南 张家界市永定区崇文路20号 427000； 2福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福建 福州金山 350001 关键词：烟草立枯病；立枯丝核菌；杀菌剂

摘要：采用生长速率法测定了世高、 瑞毒脱、 咪鲜胺锰盐和三唑酮等4种杀菌剂对烟草立枯丝核菌的抑制作用，并在此基础上进行了药剂复配筛选。结果表明，10%世高EC和12.5%瑞毒脱EC对烟草立枯丝核菌具有较强的抑制作用，EC50分别为0.56µg/mL和0.8µg/mL；由瑞毒脱和世高以有效浓度4：1混配的12%复配剂EC对病原菌抑制效果最佳，EC50为1.02µg/mL，共毒系数（CTC）为155.3，增效作用明显；盆栽试验结果表明，12%复配剂1500倍液防治效果最佳，相对防效达96%。

中图分类号：S435.72 文献标识码： 文章编号:

烟草立枯病是由烟草立枯丝核菌(Rhizoctonia solani kÜhn) 引起的烟草苗期病害，虽然在生产上为害较轻，若苗床管理不当、防治不及时，可导致烟苗萎蔫发黄而死[1]。因此，加强苗期管理，及时施药防治，对于培育健壮烟苗、减少苗期及大田生产损失具有重要意义。本试验筛选了对Rhizoctonia solani kÜhn具有良好抑制效果的化学药剂，研究药剂间的最佳复配比例，旨在提高杀菌剂对烟草立枯病的防治效果，避免长期单一施用化学药剂而导致病原菌产生抗药性，并降低防治成本。 1材料与方法 1.1病原菌分离

采用常规组织分离法对发病烟株的病原菌进行分离、纯化。 1.2致病性测定

从培养3d的病原菌菌落边缘切取1×1cm大小的菌丝块贴于4～6叶期烟苗的根茎部，用沾有灭菌水的脱脂棉保湿，置于26℃室内培养，以贴PSA培养基的烟苗为对照，每处理5株烟苗，3次重复。3d后检查发病情况，并对发病植株进行再分离，以明确供试菌株的致病性。 1.3病原菌鉴定

作者简介：陈志敏（1982—），男，硕士，研究方向：植物病原生物学。E-mail:[email protected]。联系电话：[1**********]

收稿日期： 09-10-12 责任编辑：董志坚 E-mail: [email protected] 电话：0371-67672650

参考张敬泽[2]、黄江华等[3]的方法，将病原菌在PSA培养基平板上25℃条件下暗培养，同时进行菌落形态观察、菌落生长速度测定、菌核产生特点检查、挑取菌丝显微计测、菌核的解剖学检查以及菌丝细胞核数目的染色检查等。鉴定工作按Sneh[4出的程序和标准进行。 1.4防治药剂的筛选 1.4.1供试药剂

10%世高EC（中国科学院植保所廊坊农药中试厂）, 12.5%瑞毒脱EC（山东省联合农药工业有限公司）, 50%咪鲜胺锰盐WP（上海迪拜农药有限公司）, 20%三唑酮WP（英国LK作物科学有限公司）。 1.4.2单剂室内毒力测定

将各供试药剂用灭菌水充分溶解，配制成有效浓度为10mg/mL的母液，并用细菌过滤器过滤除菌，置于4℃冰箱保存备用。

药剂毒力测定参考蒋家珍等[7]的方法。通过菌丝生长抑制概率值和药剂浓度对数值之间的线性回归分析，求出各药剂对病原菌的有效抑制中浓度（EC50值）。 1.4.3复配剂室内毒力测定

根据单剂室内毒力测定的结果，按―比例混合法‖[8]，将10%世高EC与12.5%瑞毒脱EC按有效浓度5:0、4:1、3:2、2:3、1:4、0:5比例混合，配成复配剂。药效测定参照1.4.2节的方法，求得各复配剂的EC50，并按照孙云沛[9]的方法求得各混剂的共毒系数（CTC），根据共毒系数的大小, 评价复配剂的增效作用。CTC≥120表明具有增效作用；80﹤CTC﹤120为相加作用；CTC≤80为拮抗作用；并考虑药剂成本确定最佳配比。 1.5盆栽防治试验 1.5.1菌土制备

菌土制备参考李艳琼等[10]的方法。 1.5.2药液配制

A．10%世高EC 1500倍；B．12.5%瑞毒脱EC 2000倍；C．12%复配剂EC 1500倍；D．12%复配剂EC 2000倍。 1.5.3盆栽处理

将3～4叶期健康烟苗移栽于装有灭菌土的花盆（20cm×20cm）中，每盆10株，缓苗备用。接种时，在每株烟苗的根部周围盖上约7 g菌土，同时浇灌各供试药剂，每盆200mL，以浇灌等量清水为对照。每处理10株烟苗，3次重复。接种6 d后观察、记载其发病情况,

，5]

和巴尼特H.L[6]等提

病害分级参考Lipps等[11]的标准。 2结果与分析 2.1病原菌的鉴定

观察发现, 病原菌菌落初期为白色，绝大部分菌丝匍匐生长，气生菌丝很少。菌落生长速度较快，在25℃下培养1d菌落平均直径为4.2cm，培养2d菌落平均直径为8.4cm。菌丝蛛网状，有横隔，见图1(A），初期无色，培养3d后菌丝呈浅色至黄褐色，顶端菌丝直径4.6～8.5（6.3）µm，主干匍匐菌丝直径5.7～9.2 ( 8) µm，分枝呈钝角或几乎成直角，分枝与主干处有缢缩，附近形成隔膜。培养5d后，在菌落表面形成白色气生菌丝团，7d后生成浅褐色至黑褐色的小菌核，菌核无一定形状，一般扁平，常彼此相连，松散地分布在菌丝体中，见图1(B）。菌核由疏丝组织连结而成，外层和内层细胞均是褐色或黑褐色，即内、外细胞的形态、大小和色泽无明显差异，见图1(C）。经番红O-KOH染色后，菌丝细胞核呈现深红色，背景为模糊的橙红色。菌丝顶端细胞内有4～9（6）个细胞核，见图1(D），确定该菌属多核丝核菌组。

根据菌落形态、顶端菌丝和主干菌丝形态与大小、菌丝顶端细胞核数目、菌核内外层细胞大小和颜色等特征，与Sneh[4-5]和巴尼特H.L[6]等在丝核菌属分类专著中描述比较，可确定病原菌为立枯丝核菌。

细胞核

A

B C

D

A．菌丝 B．菌核 C．菌核切片 D．细胞核

图1 立枯丝核菌形态特征

Fig.1 Morphological characteristic of Rhizoctonia solani KÜhn

2.2致病性测定

接种后2d，可见接种部位出现水渍状圆形斑点，随后变为褐色斑点，随着病害的发展，斑点迅速扩大成褐色椭圆形凹陷病斑，边缘明显，继续扩大环绕茎一周并向上扩展，在病部上可见白色气生菌丝团，随后变成深灰色粒状的小菌核；病苗下部叶片首先黄化萎蔫，病部干枯缢缩，最终烟苗死亡，但不倒伏，症状见图2(A）, 与田间自然发病症状相同，见图2(B)。

A

A．接种病株 B．田间自然病株

图2 立枯丝核菌致病性测定

Fig.2 Pathogenicity test of Rhizoctonia solani KÜhn

B

2.3烟草立枯病高效杀菌剂的筛选 2.3.1单剂室内毒力测定

各单剂毒力回归方程、EC50和相关系数测定结果见表1。10%世高EC的EC50为0.56µg/mL，是供试药剂中EC50较小的，说明其对烟草立枯丝核菌抑制效果最好；12.5%瑞毒脱EC的EC50为0.8µg/mL，其抑制效果次之；20%三唑酮WP和50%咪鲜胺锰盐WP的 EC50分别为59.9µg/mL和656.8µg/mL，说明这两种药剂抑菌效果较差。由此可见，10%世高EC和12.5%瑞毒脱EC对烟草立枯病菌具有较好的抑制效果，可作为进行药剂复配的药剂。

表1 4种杀菌剂对烟草立枯丝核菌的毒力测定 Tab. 1 Toxicity test of four fungicides to Rhizoctonia solani KÜhn

药剂种类 10%世高EC 12.5%瑞毒脱EC 20%三唑酮WP 50%咪鲜胺锰盐WP

毒力回归方程 y = 0.55x + 5.14 y = 1.22x + 5.11 y = 1.09x + 3.07 y = 0.89x + 2.47

EC50（µg/mL）

0.56 0.8 59.9 656.8

相关系数 0.98 0.75 0.98 0.96

2.2.2复配剂室内毒力测定

综合考虑各供试药剂的EC50及其作用方式，选择10%世高EC和12.5%瑞毒脱EC进行复配，并测定复配剂的抑菌效果，见表2。结果表明，瑞毒脱与世高按不同比例复配后，除2:3混配剂为拮抗作用外，其它混配剂均具有显著的增效作用，CTC2:3

CTC4:1，4:1复配剂的CTC最大，确定瑞毒脱:世高（4:1）为最佳配比。

表2 世高与瑞毒脱复配对烟草立枯丝核菌的联合毒力测定

Tab.2 Co-toxicity test of the mixed preparations of difenoconazole and myclobutanil to Rhizoctonia solani

瑞毒脱:世高

0:5 1:4 2:3 3:2 4:1 5:0

毒力回归方程 y = 0.78x + 5.06 y = 1.04x + 5.12 y = 2.29x + 4.22 y = 1.37x + 5.08 y = 1.46x + 4.99 y = 1.76x + 4.45

EC50

（µg/mL）

实际毒力指数

ATI 100 107.8 37.9 95.4 81.4 40.5

理论毒力指数

TTI — 88.1 76.2 64.3 52.4 —

共毒系数CTC — 122.4 49.7 148.4 155.3 —

0.83 0.77 2.19 0.87 1.02 2.05

2.2.3盆栽防治试验

盆栽防治试验结果见表3 。表3表明，供试的4种药剂对烟草立枯病均具有一定的防效。药后6d，12%复配剂EC 1500倍药液对烟草立枯病的相对防效为96%，防效最为显著；世高1500倍液次之，相对防效为94.3%；其次是12%复配剂EC 2000倍药液，相对防效为90.3%；瑞毒脱2000倍液的防治效果较差，为55.6%。经Duncar新复极差法检验，12%复配剂EC 1500倍与世高1500倍药剂处理间差异不显著，防治效果较好。若生产上烟草种植密度为18000株/ hm2，发病期每株烟灌药500mL，则用世高1500倍的防治成本为1800元/hm2；同理，用12%复配剂1500倍的防治成本为840元/hm2。可见，成本比单独施用防效相当的世高药剂节省近1/2。因此，综合防治效果和药剂成本，确定12%复配剂EC 1500倍药剂为最佳防治药剂。

表3烟草立枯病盆栽防治试验

Tab.3 Pot experiment of fungicides on Tobacco sore shin

药剂种类及浓度 10%世高EC1500倍 12.5%瑞毒脱EC2000倍 12%复配剂1500倍 12%复配剂2000倍 CK（清水）

发病率（%） 病情指数 相对防效（%） —

注: 表中数据后不同小写字母表示差异达显著水平（ P﹤0.05 ）。

3小结与讨论

烟草立枯病是一种低温型病害，我国各烟区的育苗时节大多逢12月～3月的低温气候，有利于该病害的发生。目前生产上普遍采用漂浮育苗，在育苗过程中未采集到烟草立枯病害标本，病原菌是从移栽大田后的烟草病株上分离得到，因此,本试验是针对移栽大田后的病株进行防治药剂的筛选,有关漂浮育苗下的防病试验有待进一步研究。

结果表明，世高和瑞毒脱对Rhizoctonia solani KÜhn具有较强的抑制作用，其复配剂的最佳配比为瑞毒脱：世高（4：1），共毒系数最大，增效作用最显著；盆栽试验显示，该复配剂1500倍药液对烟草立枯病防效最佳，且成本比单独施用防效相当的世高药剂节省近1/2 。

本试验结果为室内平板和盆栽试验，由于生态环境对药剂的药效具有显著的影响，对于筛选出的药剂及复配剂的大田防效还有待于进一步开展田间试验。

参考文献

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1574-1577．

Screening of fungicides against Tobacco sore shin in laboratory

CHEN Zhi-min1, ZHANG Shao-sheng2

1.Zhangjiajie Branch of Hunan Tobacco Company, Zhangjiajie 427000, Hunan, China

2.Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology (Fujian Agriculture and Forestry University),

Ministry of Education, Fuzhou 350002, Fujian, China

Keywords: Tobacco sore shin; Rhizoctonia solani kÜhn; Fungicedes

Abstract: The toxicity of 4 kinds of fungicides were measured against Rhizoctonia solani KÜhn by mycelium growth rate test, and screening compounded agent against Rhizoctonia solani KÜhn on the based. As the results indicated that EC50 values of 10% difenoconazole EC was 0.56µg/mL and 12.5% myclobutanil EC was 0.8µg/mL, suggesting that the two fungicides tested all have good inhibition effect on the fungus; 12% compounded agent EC was prepared by mixture 12.5% myclobutanil EC with 10% Difenoconazole EC（ the ratio of effective concentration was 4:1 ）that had good inhibition effect on Rhizoctonia solani KÜhn, EC50 values was 1.02µg/mL，CTC was 155.3，had significant additive effect. As the results of pot test indicated that 1500-fold of 12% compounded gagent EC had good control effect of Tobacco sore shin, relative control effect reached 96%.