寄生虫常见检测方法

摘要：原虫体积微小，基本结构包括表膜、胞质及胞核。原虫的运动细胞器有伪足、鞭毛及纤毛三种，运动方式有伪足运动、鞭毛运动和纤毛运动。胞核多为泡状核，少数为实质核，原虫的营养期大多只含一个核，少数可有两个或更多。经染色后胞核的形态特征是鉴别医学原虫的重要依据。寄生原虫的生殖方式分无性生殖（二分裂，多分裂和出芽生殖）和有性生殖（接合生殖和配子生殖）。原虫病呈世界性分布，以热带和亚热带地区尤为多见。一般根据虫体寄生的部位, 将原虫病分为： 肠道原虫感染；肝脏及胆道原虫感染；血液及淋巴系统原虫感染；神经系统原虫病染；皮肤和肌肉原虫感染；肺部原虫感染；眼部原虫感染；泌尿生殖系原虫感染。主要包括以下四点：①虫体大量增殖，破坏寄主细胞和组织，并影响其功能。如果不及时治疗，不终止原虫的繁殖，最终将导致寄主病情的恶化，以至死亡；原虫的代谢产物和崩溃的虫体所产生的毒性、溶解和致敏作用；③感染原虫后寄主会产生一定的免疫力，虫体通过抗原的变异或其他途径而设法逃避这种免疫力的作用，从而使寄主与虫体保持暂时的平衡。当寄主全身或局部抵抗力下降时，则可使隐性感染转变为临床发作。此外，在寄主对原虫产生体液和细胞免疫反应的同时，也可出现变态反应，引起自身免疫性病理损害；④原虫的致病作用常与同时存在的病原微生物有协同作用。

原虫的主要检查方法

一、活滋养体检查：

涂片应较薄，方法同查蠕虫卵。气温愈接近体温，滋养体的活动愈明显。必要时可用保温台保持温度。

二、包囊的碘液染色检查：

直接涂片方法同上，以一滴碘液代替生理盐水，粪便涂抹方法同上。若同时需检查活滋养体，可在玻片另一侧滴一滴生理盐水。同上法涂抹粪便标本，再盖上盖片。片中滴碘液的一侧查包囊；另一侧查活滋养体。

碘液配方：碘化钾4g ，碘2g ，蒸馏水100ml 。

三、隐孢子虫卵囊染色检查：

目前最佳的方法为金安-酚改良抗酸染色法。其次为金胺酚染色法和改良抗酸染色法。对于新鲜粪便或经10%福尔马林固定保存（4℃1个月内）的含卵囊粪便都可用这三种方法染色。染色过程是先用金胺-酚染色，再用改良抗酸染色法复染。方法步骤如下：

金胺－酚（auramine-phenol ）染色法：

1）染液配制：1g/l金胺—酚染色液（第一液）：金胺0.1g ，石炭酸5.0g ，蒸馏水100ml ；3%盐酸酒精（第二液）：盐酸3ml ，95%酒精100ml ；5g/l高锰酸钾液（第三液）：高锰酸钾0.5g ，蒸馏水100ml 。

2）染色步骤：滴加第一液于晾干的粪膜上，10～15分钟后水洗；滴加第二液，1分钟后水洗；滴加第三液，1分钟后水洗，待干；置荧光显微镜检查。低倍荧光镜下，可见卵囊为一圆形小亮点，发出乳白色荧光。高倍镜下卵囊呈乳白或略带绿色，卵囊壁为一薄层，多数卵囊周围深染，中央淡染，呈环状，核深染结构偏位，有些卵囊全部为深染。但有些标本可出现非特异的荧光颗粒，应注意鉴别。

改良抗酸（modified acid-fast method）染色法：

1）染色液配制：石炭酸复红染色液（第一液）：碱性复红4g ，95%，酒精20ml ，石炭酸8ml ，蒸馏水100ml ；10%硫酸溶液（第二液）：纯硫酸10ml ，蒸馏水90ml （边搅拌边将硫酸徐徐倾入水中）；20g/l孔雀绿液（第三液）：20g/l孔雀绿原液1ml ，蒸馏水10ml 。

2）染色步骤：滴加第一液于晾干的粪膜上，1.5～10分钟后水洗；滴加第二液，1～10 分钟

后水洗；滴加第三液，1分钟后水洗，待干；置显微镜下观察。经染色后，卵囊呈玫瑰红色，圆形或椭圆形，背景为绿色。如染色（1.5分钟）和脱色（2分钟）时间短，卵囊内子孢子边界不明显；如染色时间长（5～10分钟）脱色时间需相应延长，子孢子边界明显。卵囊内子孢子均染为玫瑰红色，子孢子呈月牙形，共4个。其他非特异颗粒则染成蓝黑色，容易与卵囊区分。

不具备荧光镜的实验室，亦可用本方法先染色，然后在光镜低、高倍下过筛检查。如发现小红点再用油镜观察的效果好，可提高检出速度和准确性。

金胺－酚染色－改良抗酸复染法

用本法可克服上述染色法的缺点。具体方法是：先用金胺酚染色后，再用改良抗酸染色法复染。再用光学显微镜观察，卵囊同抗酸染色法所见，但非特异性颗粒被染成兰黑色，两者颜色截然不同，极易鉴别，使检出率和准确性大大提高。

四、汞碘醛离心沉淀法：

本法既可浓集，又可固定和染色，适用于原虫包囊：取粪便1g ，加适量（约10ml ）汞碘醛液，充分调匀，用2层脱脂纱布过滤，再加入乙醚4ml ，摇2分钟，离心（2000rpm/min）1～2分钟，即分成乙醚、粪渣、汞碘醛及沉淀物4层。吸弃上面3层，取沉渣镜检。 汞碘醛配制：

1）汞醛（MF ）液：1/1000硫柳汞酊200ml ，甲醛（40%）25ml ，甘油50ml ，蒸 馏水200ml 。

2）卢戈氏液：碘5g ，碘化钾10g ，蒸馏水100ml 。检查时取汞醛液2.35ml 及5%卢戈氏液0.15ml 混合备用。但混合液保存8小时后即变质，不应再用；碘液亦不宜于1周后再用。

五、醛醚沉淀法（formalin-ether sedimentation）：

取粪便1～2g 置于小容器内，加水10～20ml 调匀，将粪便混悬液经2层纱布（或100目金属筛网）过滤，离心（200rpm/min）2分钟；倒去上层粪液，保留沉渣，加水10ml 混匀，离心2分钟；倒去上液，加10%甲醛7ml 。5分钟后加乙醚3ml ，塞紧管口并充分摇匀，取下管口塞，离心2分钟；即可见管内自上而下分为4层。取管底沉渣涂片镜检。

本法不仅浓集效果好，而且不损伤包囊和虫卵的形态，易于观察和鉴定。对于含脂肪较多的粪便，本法效果优于硫酸锌漂浮法。

六、硫酸锌离心浮聚法：

此法适用于检查原虫包囊、球虫卵囊、线虫卵和微小膜壳绦虫卵。取粪便约1g ，加10—15倍的水，充分搅碎，按离心沉淀法过滤，反复离心3—4次，至清水为止，最后倒去上清液，在沉渣中加入比重1.18的硫酸锌液（33%的溶液），调匀后再加硫酸锌溶液至距管口约1cm 处，离心1分钟。用金属环钩取表面的粪液置于载玻片上，加碘液一滴（查包囊），镜检。钩取标本时，用金属环轻轻接触液面即可，切勿搅动。离心后应立即取标本镜检，如若放置时间超过1小以上，会因包囊或虫卵变形而影响观察效果。

七、蔗糖离心浮聚法：

此法适用于检查粪便中隐孢子虫的卵囊。取粪便约5g ，加水15-20ml ，以260目尼龙袋或4层纱布过滤。取滤液离心5-10分钟，吸弃上清液，加蔗糖溶液（蔗糖500g ，蒸馏水320ml ，石炭酸6.5ml ）再离心，然后如同饱和盐水浮聚法，取其表面膜镜检（高倍或油镜）。卵囊透明无色，囊壁光滑，内含一小暗点和发出蛋黄色的子孢子。隐孢子虫的卵囊在漂浮液中浮力较大，常紧贴于盖片之下，鉴于1小时后卵囊脱水变形不易辨认，故应立即镜检。也可用饱和硫酸锌溶液或饱和盐水替代蔗糖容液。