PeproTech细胞因子溶解注意事项
peprotech 细胞因子溶解操作方法及注意事项
我公司所供应的peprotech 细胞因子中不含载体蛋白（carrier protein）或其他添加剂（如bsa 、has 或蔗糖等），并且通常以最少量的盐来进行冻干处理，因此微量的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内，形成很薄或不可见的蛋白层。所以我们建议在收到产品后，务必在开盖前先离心，使粘在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底（此时能否见到白色沉淀均属正常现象）。
1．离心：高速离心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速离心 (2, 000 rpm) 5 分钟。
2．溶解（reconstitution ）：用去离子水或其它缓冲液（根据说明书要求进行选择）溶解至说明书要求的浓度 (一般为 0.1-1.0 mg/ml，如10ug 的产品，需用10ul-100ul 的去离子水或缓冲液溶解) 。溶解时不可振荡，避免因化学键的断裂造成蛋白失活，可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间，待细胞因子完全溶解后使用。溶剂的选择：
1）要求用去离子水溶解的产品，务必不可用盐溶液，避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出；
2) 要求用盐溶液溶解的产品，请依照说明书上的浓度，同样也是为了避免过高的盐浓度。
3．分装和贮存（aliquot ａnd storage）：蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液，稀释可用rpmi 1640、dmem 或pbs 等溶液，其中最好含有5-10%的fcs （小牛或胎牛血清）或0.5 %的bsa （牛血清白蛋白）来稳定蛋白。工作液在4℃可保存1周，如需长期保存，则需分装冻存于-20℃ （注意：不可冻存于-80℃）。分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量，以实现每次实验用完一只工作液，避免反复冻融引起蛋白活性的降低。