用碘显色法测定烟叶中的淀粉含量

用碘显色法测定烟叶中的淀粉含量

一、实验原理：

直链淀粉遇碘呈蓝色, 支链淀粉遇碘呈紫红色。直链淀粉能吸附碘, 使碘吸收的可见光的波长向短的波长方向移动, 而显蓝色；碘和淀粉的显色除吸附的原因外, 主要是由于生成“淀粉——碘包合物”的缘故。该包合物改变了吸收光的性能而变色, 能均匀吸收除蓝光以外波长范围为400—750nm 的可见光, 淀粉液即呈现出蓝色。同理, 支链淀粉和糊精也能吸附碘，但由于吸附的程度不同, 因此呈现的颜色不同。淀粉遇碘究竟显什么颜色, 取决于该淀粉中直链淀粉与支链淀粉的比例。该反应灵敏度高, 所以常用来检验淀粉含量或碘的存在。

二、显色条件的确定：

1.PH ：淀粉与碘反应出现蓝色的环境可以是中性, 也可以是酸性, 但不能是碱性。实验表明在不同的值溶液中淀粉与碘呈现颜色反应的显色情况是不同的, 在PH=3—5的弱酸性溶液中淀粉与碘的蓝色反应最灵敏, 在弱碱性溶液中次之；在强酸性溶液中, 反应呈现蓝紫色, 在强碱性溶液中不显色。因此, 实验在遇到难以避免的碱性条件, 用碘无法检验淀粉时, 可先将碱性条件下的淀粉液加酸中和后再滴加碘液进行检验。

2. 温度：对比实验表明, 在70℃以上时, 淀粉液遇碘不变蓝或变蓝, 但瞬间颜色消失；50℃—60℃时, 变蓝, 颜色消失也很快；只有在45℃以下时, 淀粉液遇碘变蓝后蓝色不消失；在常温下将碘液加入淀粉液中显蓝色, 但加热至50℃时蓝色也会褪掉。因此, 实验用碘测定淀粉时, 要注意控制好加碘液时的温度, 待检测的样品温度降到40℃以下时再滴加碘液检测。

3. 时间：配好的淀粉溶液不宜放置时间过长, 淀粉溶液越新鲜, 与碘作用呈蓝色反应越明显, 淀粉液存放时间越长, 部分淀粉液会缓慢地水解为糊精等, 降低反应的灵敏度, 反应呈蓝紫色, 甚至紫红色。因此, 实验所用淀粉液最好临时配制以保持其新鲜程度。

三、试剂：

(1) 碘—碘化钾溶液。称取2.6g 碘和5.0g 碘化钾, 由于碘呈颗粒状，需先

放入研钵中研磨，之后与碘化钾一起放入小烧杯中, 加蒸馏水不断搅拌溶解, 时间较长，应耐心搅拌直至完全溶解为止。之后转移至1000mL 容量瓶中, 烧杯、玻璃棒用蒸馏水润洗两次，最后用蒸馏水定容, 摇匀。放棕色瓶保存。

(2) 1mg/ml淀粉标准液。称取0.1g 可溶性淀粉, 先用5ml 蒸馏水悬浮，慢慢倒入60ml 沸腾的蒸馏水中, 搅拌下加热至沸, 保持5min, 冷却至室温后转入100mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容、摇匀。溶液放4度冰箱里储存，放置超过一个星期要重配。

四、吸收波长的确定：

取1mg/mL淀粉标准溶液1ml, 用蒸馏水定容至10ml ，加入0.5ml 碘-碘化钾溶液显色后, 以空白（蒸馏水）为参比, 测定光谱，仪器上显示在580nm 处有最大吸收峰，但是为了排除干扰，并根据文献上所给参考，决定将测定波长选择在600nm 处。

五、标准曲线：

准确吸取1mg/mL淀粉标准溶液各0、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.0mL, 与蒸馏水分别配制10mL 溶液。加入0.5ml 碘—碘化钾溶液，于600nm 处测定各淀粉标准溶液的吸光度，每个浓度测定三次吸光度以取平均值，以吸光度均值对淀粉浓度作图, 得淀粉工作曲线, 得出线性回归方程及相关系数。

六、烟样中淀粉含量的测定：

（1）随机剪取一片烟叶的不同部位，总共称量0.1g 。在研钵中剪碎后待用。 （2）先往研钵中加入5ml 热蒸馏水，将烟叶进行初步研磨；再加入5ml 热蒸馏水，冲洗研钵壁上剩余的残渣，继续研磨一段时间直至研磨液无明显块状物。

（3）将研磨液转移至玻璃匀浆器，仔细研磨匀浆，直至匀浆器壁上无看到任何明显的丝状或块状物；之后用5ml 热蒸馏水洗研钵两次，洗脱液也转移到匀浆器中进行研磨，合并匀浆液于100ml 烧杯中。可适当补充蒸馏水至体积足够研磨超声波变幅杆。

（4）用超声波细胞破碎仪400W ，超声时间5s 、间歇时间5s ，破碎处理5min, 此时发现容易产生大量的热。

（5）加热水至烧杯70—80ml 刻度处，置电炉上不断搅拌加热5min 。 （6）趁热进行抽滤。残渣用热蒸馏水洗涤5mL ×3, 弃去残渣, 合并滤液。滤液再加热至沸腾, 保持10 min,冷却至室温, 转入100mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容、摇匀。

（7）取10mL 烟样淀粉样品液（样品原液体积可根据烟叶的淀粉含量而定）, 加入0.5mL 碘—碘化钾溶液, 以空白(10mL蒸馏水+0.5mL碘—碘化钾溶液) 为参比, 于600nm 处测定样品液的吸光度, 根据标准曲线计算烟样的淀粉含量。

七、重要注意事项：

（1）研磨、匀浆全程保持热处理。由于淀粉主要存在于胞浆当中，并且以颗粒形式存在，用热水处理能使淀粉颗粒吸水、吸热而膨胀破裂，之后释放出来的淀粉能溶于热水形成胶体。

（2）匀浆时要仔细，尽量研磨到用肉眼看不到壁上的残渣。

（3）第一次加热时要保持不断地搅拌，使淀粉能够充分释放并且均匀分布形成胶体。

（4）抽滤洗涤时，先将真空泵关闭，待热水浸没残渣后再次开启。 （5）鲜烟叶及烘烤1天的样品，原液取用5ml ，用蒸馏水补充体积至10ml 。 （6）由于样品在比色时褪色速度较快，所以在用仪器对样品的淀粉含量进行测定之前才加入碘液；加入碘液后倒入比色皿的操作速度要较快，尽量测得最大的吸光值，准确率较高。

八、计算公式：

淀粉含量（

mg /g ）=

c ⨯V t ⨯V 1V 2⨯W

干重烟叶淀粉含量（mg/g）=淀粉含量÷G

式中：

C ——标准曲线上测得的样品淀粉浓度(mg／m1) ； V t ——样品定容后总体积（ml ）；

V 1——测定试管不加碘液前的总体积（ml ）； V 2——加入样品原液的体积（ml ）； W ——样品质量（g ）； G ——水分校正系数；

水分校正系数查阅表：