厌氧菌的微生物检验及临床意义

　　【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2013）12-0137-01 　　【摘要】目的：探讨厌氧菌的微生物检验方法及临床意义。方法：选80例厌氧菌感染的标本采集、送检、检验方法及常见厌氧菌的快速鉴定进行分析。结果：80例感染标本中厌氧菌培养阳性者24例，阳性率为30 %。其中单纯厌氧菌阳性者10例，占阳性标本的41.6 % ；厌氧菌和需氧菌混合感染14例。6例为两种厌氧菌感染。结论：60%的感染与厌氧菌有关，有些部位的感染80%以上是由厌氧菌感染所致。厌氧菌标本的采集与送检，直接关系到实验室培养的阳性率与准确性。对于厌氧菌感染，实验室诊断日益受到重视。 　　【关键词】厌氧菌；标本采集立；送检；检验方法 　　厌氧菌分布十分广泛是体内正常菌群的组成成员，正常情况下菌群之间保持着微生态平衡，厌氧菌代谢产生的乙酸、乳酸等能抑制病原菌生长。选取80例感染标本中厌氧菌检验进行分析。 　　1 临床资料 　　1.1 一般资料 本组为2012年3月～2013年3月住院患者感染标本80例，男性48例，女性32例，年龄15～73岁，平均年龄42岁。肺部感染20例，腹部水及腹腔引流液39例，胆汁14例，穿刺脓液7例。 　　1.2 方法 　　1.2.1标本采集与送检 标本采集后要立即送检，送检过程中也必须避免接触氧气。标本送到实验室后，应在20～30 min内处理完毕，最迟不超过2 h，以免其中的兼性厌氧菌过度生长而抑制厌氧菌的生长。若不能及时接种，可将标本置室温下保存，切不可冷藏，因在低温时氧气的溶解度较高，不利于厌氧菌的生长。 　　1.2.2厌氧菌的检验方法 　　1.2.2.1肉眼观察 每次接种前均应观察标本的性状，如是否为脓性、血性，有无黑色坏死组织或黑色分泌物，有无硫黄样颗粒，是否有恶臭等。 　　1.2.2.2直接镜检 除血液标本外，各种临床标本在接种前均须直接涂片，做革兰染色后镜检，以观察细菌的染色性、形态特征以及标本中的菌量，以供分离培养、判断结果时参考。 　　1.2.2.3分离培养 初代培养常用方法有厌氧罐法、气袋法和厌氧手套箱法等。前两种方法比较简便，不需特殊设备，适用于小型实验室，后一种方法设备较为复杂而昂贵，但效果最佳。尽量使用新鲜培养基，并在2～4 h内用完。使用前放入无氧环境，预还原处理24～48 h。可采用预还原灭菌法制作的培养基。若为液体培养基，在使用前必须煮沸10 min以驱除溶解氧，并迅速冷却后接种细菌。标本经48h初代培养后，用放大镜观察平板上的菌落性状。每个平板挑选5个不同性状菌落，每个菌落分别接种2～3个平板，每个平板划分4～6个区，分别作几个菌落的次代培养。然后分别放入有氧、无氧和含5%～10%二氧化碳环境中培养48h。如在有氧、无氧环境中均能生长为兼性厌氧菌；如在有氧、无氧环境中均不生长或生长不好，而在二氧化碳环境生长最好为需二氧化碳菌；如在有氧下生长而在无氧下不生长则为需氧菌；在有氧环境中不生长而仅在厌氧环境中生长即为专性厌氧菌。 　　2 结果 　　80例感染标本中厌氧菌培养阳性者24例，阳性率为30 %。其中单纯厌氧菌阳性者10例，占阳性标本的41.6 % ；厌氧菌和需氧菌混合感染14例。6例为两种厌氧菌感染。厌氧菌在某些特定条件下，可引起人体的内源性感染。60%的感染与厌氧菌有关，有些部位的感染80%以上是由厌氧菌感染所致。 　　3 讨论 　　对厌氧菌的感染，常规细菌培养方法不能检出，常用抗菌药物也多无效果，是临床上许多疑难杂症，如“无菌性感染或脓肿”、“原因不明的发热”，以及某些感染性疾病迁延不愈和反复发作的重要原因之一。在发生菌群失调或机体免疫力下降或细菌进入非正常寄居部位时，这些厌氧菌即可作为条件致病菌而导致内源性感染。厌氧菌标本的采集与送检，直接关系到实验室培养的阳性率与准确性。 　　标本的采集与运送是否适当，对厌氧菌培养能否成功至关重要。厌氧菌的标本采集的原则是要求标本绝对不能被正常菌群所污染，采集时尽量避免接触空气。临床在进行厌氧菌培养前还应与实验室联系，以便实验室做好接种培养的准备[1]。标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，用特殊技术或方法采取的标本，必须通过用于厌氧菌正常栖居地才能取到的标本，如痰、支气管镜采样（无特殊保护套）、咽拭子、排出的尿及阴道拭子不能做厌氧菌培养；粪便标本厌氧菌培养，只能做难辨梭菌及内毒杆菌的培养。最好是床边接种，如无条件床边采样时，尽快将空针中的气体排尽，用消毒空针抽取厌氧培养标本，将针头插入无菌橡皮塞。或将标本插入运送培养基中送细菌室培养。标本送到实验室后，应在20～30 min内处理完毕，最迟不超过2 h，以免其中兼性厌氧菌过度生长而抑制厌氧菌的生长。如果一时来不及接种，可将标本置室温下保存。标本不宜冷藏，因冷藏对某些厌氧菌有害，而且在低温时氧的溶解度较高。每次标本接种前均应观察标本的性状，包括标本的气味、是否脓性、带血或腐败物质等，对厌氧菌的鉴定很重要。 　　肺部和胸腔的厌氧菌感染，吸入性肺炎多发生于老年人及婴幼儿。局限性肺炎和支气管肺炎主要是慢性复发性局限性肺炎和支气管炎，病理学上以间质性和肺泡内浸润为特征，缺少明显的组织坏死和临床症状。坏死性肺炎厌氧菌感染率100%[2]。本病特点是形成许多直径在2 cm以下的小脓肿和坏死灶。严重者，形成肺坏疽。病人情况严重，体温在39℃以上，常侵犯两肺叶。部分病人有恶臭的痰及脓胸，病死率较高。肺脓肿与脓胸由吸入性肺炎引起，1～2周后开始有空洞或出现气液平面。病人长时期体温高、热期长，部分病人白细胞明显增多，还有部分病人体重明显下降。肺部出现脓性分泌物。 　　腹膜及腹腔内脏器的厌氧菌感染，腹膜炎细菌通过腹腔脏器的各种炎症、手术、外伤和穿孔等，进入腹腔所引起的继发性感染。肝脓肿及其他腹腔脓肿，临床表现和诊断与需氧菌引起的肝脓肿相同，即发热、寒战、贫血、恶心、食欲不振、肝区疼痛、肝脏肿大和体重减轻等症状。胆道系统感染，正常胆囊壁及胆汁中无菌，或仅有极少数细菌[3]。在胆囊炎或胆石症时肠道的菌群沿胆管上行，或经淋巴管进入胆囊壁。阑尾炎和阑尾脓肿多为需氧菌与厌氧菌的混合感染，且阑尾炎症越严重，厌氧菌培养阳性率也增高。 　　参考文献 　　[1]周贵民.厌氧菌血培养是值得重视的问题.中华医学检验杂志，2005，28：979-980. 　　[2]张璞玉，陈升杰. 临床标本厌氧菌培养结果分析J . 中华医学检验杂志，2002 ，253（1） ：141 . 　　[3]吴多荣氧净（OxyplatesTM）厌氧菌培养法的实验室应用[J]中国热带医学，2004，4：617～619