反相高效液相色谱法同时测定桑叶提取物中芸香甙和槲皮素的含量
反相高效液相色谱法 同时测定 桑叶提取物中芸香甙和 槲皮素的含量 纹
贾之慎 邹建敏 唐孟成
( 浙江农 业大 学 杭州 302) 109 提要 用 P0 型高效液相色谱系统、L80 10 D - 色谱工作站、WGC 色谱柱 以甲醇 水 磷酸体系(0 0 0 Y -1 8 , -- 6:4: 04 VV V 为流动相分离并同时 ., / / ) 测定了桑叶 提取物中 芸香甙与槲皮素的 含量。 甙、 素含量与峰面积 芸香 槲皮 呈良 好的 线性关系。芸香甙的变异系数为 1 8 回收率为 140 槲皮素的变异系数为 98 回收率为 . %, 9 0.% . %,
1 03. 2% 。
关键词
反相 高效液相色谱法 芸香甙 槲皮素 桑叶 园标 本 区
1 前言
23 . 色谱 条件
桑 叶除养蚕外, 其疏 散风热、 肝明 目、 清 利关节 、 利尿 、 降血压 等药用作 用 自古以来就被 我 国人 民所
流动相: 甲醇:水:磷酸=6:4:04流速 0 0 .;
10 L mi 检 测波 长 27m 进 样量: 0L 柱 温 .m / n ; 5n ; 1 ; 2 ; 分 参 数: 音 门 槛 50 5 积 噪 .0V、 小 面 积 最
利 用[ 桑 叶 含 有 芸 香 甙 (ui) 槲 皮 素 1 rt 、 n (ur t)二氢山萘素(i doam rl等黄 gec i 、 en 捷 d yr e p o) h k f e
酮类化 合物及其衍 生物, 据报 道桑 叶的药用作 用和 这些黄酮类化合物 的抗氧 化作用有关 [ 高效液相 ] 色谱法在黄酮类化合物 的分析 中已得 到了广泛的应
500 0.0V・s最小峰高5.0v 、 00
24 品处理 . 样 桑 叶经风干 后, 用粉碎机 粉碎 准确 称取 试样
用[5但对桑叶中黄酮类化合物的分析尚无报道 3] ~,
本文报道 了用反相高效液相色谱法 同时测定桑叶提
4, g 加沸水( 或甲醇)0m , 10 L 回流3mi 减压过滤 0 n , 后用重蒸水( 或甲醇) 定容于10 0mL容量瓶中备用
进样前用 04 .5m滤膜过滤
取物中芸香甙和槲皮素的方法, 该法简便, 重现性 好, 准确度较高 实验采用国产高效液相色谱仪和色
谱柱, 结果 令人满意
3 结果与讨论
31 . 磷酸对分离的影响
以纯 甲醇为 流动相 时, 香甙和槲 皮素不 能达 芸
2 实验部分
2 1 器 . 仪
P0 10型高效液相色谱系统( 中国科学院大连化 学物理研究所制造)由P0 型高压恒流泵、 V 0 , 10 U 10 型可变波长检测器、 J0 G65型高压进样阀、L80 D -0 色谱工作站组成 色谱柱: WG 81 ,5m Y C (0m 20 m 1 ×46 m . 进样器配 1 .m i ) . d 0L
定量管
22 . 试剂 与样 品
到基线分离 以甲醇- 6:4) 水(0 0为流动相时, 两种 成分能分离, 但有拖尾现象 这是由于黄酮甙元的酚 羟基产生电离, 因而在固定相表面存在着双保留机 制 加入04 .%的磷酸, 调整流动相p H为25使酚 ., 羟基的电离被抑制, 峰保留的主要控制因素成为中 性分子在反相条件下的疏水缔合, 可使峰形改善( 见
图1 )
32 . 检测波长的选择
高效液相色谱法测定银杏 叶中芸 香甙和槲皮素 的检测波 长通常 为 24m[ ]对标准溶液的紫外吸 5n 6 , 7 收扫 描表 明, 二者最 大紫 外吸 收均在 27m 处, 5n 故 检测波长采用 27m 5n 33 . 线性关 系
重蒸水( 自制,.5m滤膜过滤)甲醇( 04 , 色谱 纯,.5m滤膜过滤)磷酸( R , 04 , A )芸香甙( 生化试 剂, 上海试剂二厂出品)槲皮素( , 色谱纯, l a Fu k C e iA hm G公司出品) 桑叶采自浙江农业大学桑 e
本文收稿 日期:95 7 8日 修回 日期:95年 1 19 年 月 19 2月 5日
用外标峰面积法测定标准曲线, 回归方程和相 关系数分别是 芸香甙 C= 160 1ˉR r .4 0 ,= 096 .97槲皮素 C=870 1ˉR r .98其 .3 0 ,=096(
中C为浓度(g L1 R为峰面积(V ), m・ ) , p ・s) 呈
良好 的线性关系
34 . 精密度的测定 取l OL桑叶提取液按上述色谱条件重复进样 8 测定方法的精密度, 次, 结果见表1 35 . 回收率测定
在 一定 量 的样 品 中加 入适 量 的芸 香甙 和槲 皮 素, 按上述 色谱条件测得回收率见表 2
36 . 样品的测定
对桑 叶样 品的测定 结果见表 3
表 1 精密度 的测定(=8 n )
表 2 回收率试验
表3 桑叶中 芸香甙、 槲皮素的 含量( gg m /)
参
考
文
献
1 中华人民共和国药典 . 北京 人民卫生出 版社,90 19:
2 67
2 中华药海 . 滨 哈尔 哈尔 滨出 版社,939 19:5
3 a e J Li d rmao r 9 8 1 ( ) 3 9 D glD .J l Cho tg,1 8; 12 : 0 ui
4 aiY ho aor h .19; 078:4 Kh v .C r t a i 903(1) 47 D m gp a
5 马齐民 . 化学 1 32()38 分析 ,9 ;1 :6 9 3 6 张晓琦, 颖怡 . ,941()32 陈 色谱 19;24:0 7 平, 庄向 虞杏英, 杨更生等 . 草药,922()1 中 19;33:2 2
Deemi t n R t a
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( h i g rutrl vr t Hag hu 30 2) Z e a A i l a U i s , n zo, 09 jn gc u n ei 1
Abtat a ta i rv r dp ae g p r r n e ud rmao rp i meh d s v lp d r s c Qu n i t e es -h s h h f ma c l i c o tga hc to wa d eoe f r t v e e i eo i q h e o te p rt n d tr n t n rt a d ect fo mub ry v e tat h isrme t ue h s aai a d emiai o u i n q r i rm l r l e rc.T e t e o n e o f n u e n e e a x n u ns d s wee 0 H L sse a d -0 rm o rp iwok ai .T e l nue wa YW G C 81 m, r P 0 C t 1 P y m D 8 c o a gah r s t n h c u n L h t s t o o m sd s -1 0 , 20 5mm 46 . mm d n e e t s OH- O- P s lt n 0 4 : 0 4 . g o l e r a i s i i .a d n wa Me . l u H2 H3O4 ui ( : 0 . ) A o d a rlt nhp o o 6 i n e o
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