新的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin止血作用的实验研究
#781#
中国临床药理学与治疗学
中国药理学会主办
CN34-1206PR,ISSN1009-2501
http:PPwww.DrugChina.net2005Jul;10(7):781-786
r
研究原著
r
新的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin止血作用的实验研究
唐松山,王晓华,张娟辉,杨志勇,刘菁,祁荣
广东药学院微生物与生化药学教研室,生物科学与生物制药学院,广州510006,广东
摘要 目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果。方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果。结果:静脉注射Agacutin0.01~
-1
0.05U#kg后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%~60.5%),给药后30min药效达高峰,药效持续24h。与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血粘度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致。试验结果显示,Agacutin对部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性、血小板体外聚集、优球蛋白凝固时间均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性。腹腔注射Agacutin0.5~2U#kg剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%~66%)。结论:Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白且不激活凝血因子II和XIII,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成血栓形成。
关键词 类凝血酶;止血剂;尖吻蝮蛇蛇毒;Agacutin中图分类号:R973.1文献标识码:A
文章编号:1009-2501(2005)07-0781-06
蛇毒含有许多蛋白和多肽,它们大多为特殊蛋白酶和活性多肽。这些酶可能作为支持物质参与消化,并且也是蛇毒神经毒和出血毒的主要原因。对尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶的研究,最早是1967年的ChengHC和OuyangC等,他们于1971年和1972年相继分离出两个类凝血酶组份,其中之一为Acu-tin,并经动物实验均有不同程度抗凝作用,与国内溶
2005-06-14收稿 2005-06-25修回
唐松山,通讯作者,男,博士,讲师,研究方向:生化药学。Tel:(0)[1**********]
E-mail:[email protected]
[1]
[2]
-1
栓药降纤酶相同。从1988年8月起,肖昌华等和1992年管锦华等
[6,7]
[3-5]
也多次做过尝试,从尖吻蝮
蛇蛇毒中分离具有凝血和溶栓活性的类凝血酶组
份,但因无法获得纯品,都未能准确定性和定量。国外相似的产品有Klobusitzky和Konig从Bothropsjara-raca蛇毒中部分纯化出一局部和非胃肠使用的安全止血剂Hemocoagulase。由米兰Ravizzo公司从Both-ropsjararaca蛇毒中部分纯化的、以商品名Bothropase和由BaslePentapharm公司从Bothropsatrox亚种蛇毒中提取的、以商品名Reptilase的制剂在欧美有售,其中仅有Reptilase品种在国内由深圳建安医药公司代理销售。自1983年引进中国以来,因其疗效确切、副作用小、临床适应症广、又优于其它止血药等特点,使用几乎囊括了所有的临床科室,总有效率达90%以上,于1996年进入中国国家基本药物。2004年Reptilase已被成功地在酵母中重组表达。近几年文献报道,从尖吻蝮蛇蛇毒中提取了以纤维蛋白原为底物的多种酶,如类凝血酶酶
[10]
[9]
[8]
,纤溶酶原激活
和纤维蛋白原溶酶
[11-13]
。
自1993年起,我们开始研究尖吻蝮蛇蛇毒中的类凝血酶组分。经12年的努力,获得了5个新的类凝血酶。以后的研究证实,至少有两个具有止血活性,其中之一取名Agacutin。其研究内容将陆续发表。本文详细报道了该酶对血液系统的药效学研究结果。
1 材料与方法
1.1 Agacutin制剂 1单位P瓶,冻干粉剂,内含1%微分子右旋糖酐敷料(敷料由中国药品鉴定所提供),由唐松山博士制备。Reptilase(立止血,批号:770604)市售,1单位P瓶,瑞士巴塞尔素高大药厂生产。两种冻干粉针临用前用灭菌注射用水注入瓶轻轻振摇,速溶。小白鼠,17~22g,雌雄兼有,动物合格证号:医动字第01-3049;新西兰白兔,2~3kg体
#782#
重,雌雄兼有,由南方医科大学动物中心提供,动物合格证号:DB11P019.1-92。由耳静脉给药,直接心脏取全血。
1.2 分组 小白鼠分正常对照组,Agacutin0.5、1.0、2.0U#kg
-1
ChinJClinPharmacolTher2005Jul;10(7)
数。TXA2在37e下极不稳定,很快代谢为较稳定的代谢产物TXB2。本实验以测定TXB2含量代替TXA2含量。按放免法测定(具体操作参见北京北方生物技术公司说明书)。
1.6 血液流变学检测 取全血1ml加1%肝素
0.1ml抗凝后用血粘度计(VISCONICED型)测定在高切变率及低切变率下全血粘度。
1.7 统计学处理 全血凝固时间、纤维蛋白原浓度、APTT、血粘度等指标采用给药前后自身对照的t检验;血小板数量、释放活性、体外凝集和优球蛋白凝固和溶解时间指标采用组间t检验。
组,Reptilase0.5U#kg
-1
-1
组,每组10
-1
只。新西兰白兔分正常对照组,Agacutin0.05、0.025、0.01U#kg组,Reptilase0.025U#kg组,每
组7只。
1.3 凝血功能及小鼠出血时间测定 参照徐淑云等的方法测试凝血功能。小白鼠腹腔给药30min后,在鼠尾尖向上0.5cm处快速剪断尾部,定时以滤纸片吸取流出的血液,出血时间为从剪尾开始至无出血的时间。
1.4 血纤维蛋白原(FLB)含量测定 取全血1ml
-1
加入预先放入0.1ml3mmol#L枸橼酸钠溶液的试管中混匀,3000r#min
-1
[14]
2 结果
2.1 Agacutin对全血凝固时间的影响 静脉注射
-1
Agacutin0.05~0.01U#kg后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%~60.5%),其中Agacutin0.025U#kg组的全血凝固时间缩短持续24h,给药后30min,药效达高峰。相同剂量的Agacutin和Reptilase组,其效应强度与变化趋势基本平行(表1)。
-1
离心10min,取血浆后直接
用自动血凝检测仪(美国InstrumentationLaboratory,IL)测定。
1.5 血小板数量及释放活性测定 取20Ll全血放入盛有10ml细胞稀释液的小杯中,加盖后充分振摇。用自动血细胞记数仪(瑞典Medonic公司)计
表1 Agacutin静注对新西兰兔全血凝固时间(min)的影响(?s,n=7)
组别Agacutin组Agacutin组Agacutin组Reptilase组
剂量PU#kg-1
0.050.0250.010.025
用药前590?258600?200593?189620?149
0.17h382?83b 346?143b377?113b423?230b
0.5h294?203b342?103b412?244b365?174b
1h368?120b287?134b425?150b386?135b
3h369?133b411?104b293?249b546?162b
6h286?163b329?91b345?214b555?162
12h479?122351?121b455?165573?134
24h540?145413?100b580?179640?120
与用药前相比bP
2.2 Agacutin对出血时间的影响 腹腔注射Aga-cutin0.5~2.0U#kg及Reptilase0.5U#kg,各组小鼠剪尾出血时间具有不同程度的缩短(24%~66%),但只有Agacutin0.5U#kg组使小鼠出血时间缩短(P
表2 Agacutin腹腔注射对小鼠出血时间的影响(?s,n=10) 组别对照组Agacutin组Agacutin组Agacutin组Reptilase组
与对照组比较cP
-1
-1
-1
2.3 Agacutin对兔血纤维蛋白原(FLB)的影响 不同剂量的Agacutin静注新西兰白兔后,与给药前自身对照比较,各实验组在给药后纤维蛋白原有不同程度的降低,其中Agacutin0.05U#kg
-1
剂量组在
给药后3h内及Reptilase组在6h内,纤维蛋白原含量减少(P
2.4 Agacutin对活化部分凝血活酶时间(APTT)的影响 不同剂量的Agacutin静注新西兰白兔后,Agacutin各组和对照组与给药前自身相比无显著的统计学意义(表4)。
2.5 Agacutin对优球蛋白凝固(ECT)和溶解时间(ELT)的影响 不同剂量的Agacutin静注新西兰白兔后,各剂量组对优球蛋白凝固时间均无明显影响(表5),但可使某些组优球蛋白溶解时间明显缩短
剂量PU#kg-1
-0.51.02.00.5
出血时间Ph34.1?11.119.7?7.5c26.9?12.026.0?18.028.7?17.1
中国临床药理学与治疗学2005Jul;10(7)
#783#
Agacutin静注新西兰白兔后,Agacutin各组对兔血小板无明显影响(表7)。
(表6),这说明该类血酶具有较弱的纤溶活性。2.6 Agacutin对血小板数量的影响 不同剂量的
表3 Agacutin静注对新西兰白兔血纤维蛋白原(mg#dl-1)的影响(?s,n=7)
组别Agacutin组Agacutin组Agacutin组Reptilase组
剂量PU#kg-10.050.0250.010.025
用药前256?32222?47254?56265?35
0.17h188?22b211?44247?56220?31b
0.5h186?21b204?60219?107216?26b
1h174?27b207?54249?58221?24b
3h178?24b209?53218?43b222?38b
6h210?20219?59222?84212?25b
12h254?20300?38316?33245?22
24h412?23318?57371?43332?34
与用药前相比bP
表4 Agacutin静注对新西兰白兔凝血活酶时间(s)的影响(?s,n=7)
组别Agacutin组Agacutin组Agacutin组Reptilase组
剂量PU#kg-1
0.050.0250.010.025
用药前66?1884?1575?15 69?6
0.17h77?2278?1576?1679?16
0.5h77?2672?1779?1974?11
1h68?1872?1673?1379?16
3h82?1673?1256?1766?16
6h60?984?1257?1964?12
12h62?1667?1362?1271?13
24h68?1679?1461?1470?14
表5 Agacutin静注对新西兰白兔优球蛋白凝固时间(h)的影响(?s,n=7)
组别对照组Agacutin组Agacutin组Agacutin组Reptilase组
剂量PU#kg-1
-0.05
0.0250.010.025
0.17h42?1154?2536?2429?1513?7
c
0.5h40?2354?2432?2330?1240?22
1h37?5753?4039?17 31?8 39?13
3h36?4850?2120?1251?2637?17
6h39?4054?3336?24 32?8 38?8
12h41?2451?3239?1637?1441?21
24h38?1651?1435?10 33?8 39?14
与对照组相比cP
表6 Agacutin静注对新西兰白兔优球蛋白溶解时间(min)的影响(?s,n=7)
组别对照组Agacutin组Agacutin组Agacutin组Reptilase组
剂量PU#kg-1
-0.050.0250.010.025
0.17h246?8169?97134?7c85?28c211?86
0.5h235?6155?7b135?11b75?6c202?77
1h225?76156?4142?35b75?28c139?86
3h191?4151?4c235?8c136?7c286?90b
6h202?5160?6b168?12b121?6c233?46
12h198?14163?24b189?786?10c201?88
24h257?55178?6b246?35129?12c268?90
与对照组比较bP
表7 Agacutin静注对新西兰白兔血小板数量(@109L-1)的影响(?s,n=7)
组别对照组Agacutin组Agacutin组Agacutin组Reptilase组
剂量PU#kg-1
-0.050.0250.010.025
0.17h319?72272?78288?79339?88267?74
0.5h321?81260?68278?55335?84289?76
1h318?80226?46b255?60331?89306?81
3h237?90272?29233?13238?70269?62
6h303?77268?56257?50289?77281?70
12h288?86266?56268?47325?76278?69
24h301?67278?60278?66399?71270?80
与对照组比较bP
#784#
2.7 Agacutin对血小板生成TXA2的影响 不同剂量的Agacutin静注新西兰白兔后,Agacutin各剂量
ChinJClinPharmacolTher2005Jul;10(7)
组TXB2含量与对照组相比无统计学意义,说明对血小板释放TXA2的功能没有影响(表8)。
表8 Agacutin静注对新西兰兔TXB2含量(pg#ml-1)的影响(?s,n=7)
组别对照组Agacutin组Agacutin组Agacutin组Reptilase组
剂量PU#kg-1
-0.050.0250.010.025
0.17h320?139307?259330?271420?239260?123
0.5h317?140329?266320?268389?245289?120
1h282?266474?124414?238395?212334?140
3h430?245362?272694?293626?227462?194
6h323?177368?159457?250479?277291?170
12h390?187365?286368?247428?276298?168
24h341?267380?160380?265400?271370?180
2.8 Agacutin对体外血小板聚集功能的影响 不同剂量的Agacutin静注新西兰白兔后,Agacutin各剂
表9 Agacutin对体外血小板聚集率(%)的影响(?s,n=7)
组别对照组Agacutin组Agacutin组Agacutin组Reptilase组
剂量PU#kg-1
-0.050.0250.010.025
0.17h25?624?625?428?1619?12
0.5h28?832?728?925?1327?11
1h
量组与对照组相比,对体外血小板聚集无明显影响(表9)。
3h41?2924?640?1027?1438?12
6h32?1637?927?624?730?7
12h38?1835?936?628?628?11
24h35?737?1638?829?826?10
46?1836?2127?1122?1128?11
2.9 Agacutin对血液流变学的影响 不同剂量的Agacutin静注新西兰白兔后,与给药前比较,Agacutin和Reptilase各剂量组在静注后在不同切变率下,全
血粘度均稍有不同程度降低,在高切变率和高剂量给药条件下,这种变化明显增加。血粘度的变化与纤原浓度和凝血时间变化一致(表10)。
10 Agacutin静注对新西兰兔不同切变率(mPaS)的全血粘度的影响(?s,n=7)
组别Agacutin组
剂量PU#kg-0.05
1
切变率Ps200
3051
用药前3.0?1.04.1?1.49.1?4.217.5?7.32.8?1.03.9?1.47.4?2.718.2?6.72.8?0.63.7?0.57.0?0.816.8?1.62.8?0.33.9?0.47.4?0.818.2?2.5
0.17h2.8?1.33.5?0.47.7?3.315.2?4.22.6?1.04.1?1.78.1?3.521.0?9.82.6?0.33.7?0.56.8?1.518.6?2.62.1?0.33.6?0.46.8?1.315.9?2.9
0.5h2.5?0.23.9?1.88.6?4.217.5?7.82.7?1.13.9?1.67.9?3.820.7?112.7?0.43.4?0.45.7?1.113.3?4.72.6?0.33.0?0.45.8?0.614.6?1.7
1h2.7?1.33.8?2.08.2?4.217.7?111.9?0.2b2.8?0.45.6?1.014.5?3.42.6?0.33.5?0.56.2?1.618.4?7.62.6?0.73.6?0.87.1?2.418.7?7.3
3h2.2?0.5b3.3?0.68.2?5.416.4?3.72.1?0.63.0?0.86.2?2.014.4?3.92.2?0.23.1?0.35.9?0.514.8?1.72.4?0.93.4?1.36.1?2.214.6?5.0
6h2.4?0.73.5?0.98.2?2.618.2?4.71.8?0.4b2.7?0.65.9?1.616.5?5.52.3?0.23.2?0.36.1?0.714.9?2.41.9?0.5b2.8?0.65.3?0.813.3?1.2
12h2.0?0.4b2.9?0.57.4?2.516.4?6.51.7?0.2b2.7?0.65.8?2.616.3?112.1?0.23.1?0.76.7?2.418.4?9.21.9?0.4b2.7?0.45.1?0.612.7?1.8
24h2.3?0.4b3.3?0.56.4?0.816.0?1.91.9?0.2b2.8?0.35.6?1.014.4?3.42.1?0.23.0?0.45.7?0.814.8?2.81.9?0.4b2.7?0.55.0?0.812.3?2.0
Agacutin组0.025200305
Agacutin组0.01
12003051
Reptilase组0.0252003051
与用药前相比bP
中国临床药理学与治疗学2005Jul;10(7)
#785#
thrombin-likeprincipleAgkistrodonacutusvenomanditscom-parisonwithbovinethrombin[J].ThrombDiathHaemorrh,1971;26:224
2 OuyangC,TengCM.Purificationandpropertiesoftheanticoag-ulantprincipleofAgkistrodonacutusvenom[J].BiochemBio-physActa,1972;276:155
3 肖昌华,杨筠茹.尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus)蛇毒凝血酶样成分的研究I.分离,纯化及其理化特性的研究[J].动物学研究,1989;9:51-9
4 肖昌华,何丽芬,唐绍宗,杨筠茹.尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus)蛇毒凝血酶样成分的研究Ò.酶学与血液学活性的研究[J].动物学研究,1989;10:213-8
5 何丽芬,肖昌华,董馥明,杨连玺.尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus)蛇毒凝血酶样成分的研究III.蛇毒凝血酶止血效应的研究[J].动物学研究,1990;11:331-4
6 ZhangGP,GuanJX.Isolation,purificationandcharacteristicsofthrombin-likeenzymefromAgkistrodonacutusvenom[J].JGuangzhouMedColl,1991;19:9-15
7 黄绍龄,等.125I标记尖吻蝮蛇督促凝组分在小白鼠体内的分布[J].蛇志,1997;9:4288Weon-KyooY,Won-SeokC,You-SeokK,Hang-CheolS,Yang-sooJ,Kwang-HoeC.Functionalcharacterizationofrecombinantbatroxobin,asnakevenomthrombin-likeenzyme,expressedfrompichiapastoris[J].FEBSLetters,2004;57:167-729 HuangQQ,TengMK,NiuLW.Purificationandcharacteriza-tionoftwofibrinogen-clottingenzymesfromfive-pacesnake(Agkistrodonacutus)venom[J].Toxicon,1999;37:999-1013
10PanH,DuXY,YangGZ,ZhouYC,WuXF.cDNAcloningandexpressionofacutin,athrombin-likeenzymefromAgkistro-donacutus[J].BiochemBiophysResCommun,1999;255:412-5
11ZhuZ,GongP,TengM,NiuL.Purification,N-terminalse-quencing,partialcharacterization,crystallizationandprelim-inarycrystallographicanalysisoftwoglycosylatedserineprotein-asesfromAgkistrodonacutusvenom[J].ActaCrystallogrDBiolCrystallogr,2003;59:547-50
12ChengX,QianY,LiuQD,LiXYB,ZhangMW,LiuJ.Pur-i
fication,CharacterizationandcDNACloningofaNewFibrino-genlyticVenomProtein,Agkisacutacin,fromAgkistrodonacutusVenom[J].BiochemBiophysResCommun,1999;265:530-513LianXX,ChenJS,ZhouYN,QiuPX,YanGM,PurificationandbiochemicalcharacterizationofFIIa,afibrinolyticenzymefromAgkistrodonacutusvenom[J].Toxicon,2001;39:1133-9
14XuSY,BianRL,ChengX.Hemostaticdrugs[A].In:Exper-imentalMethodologyinPharmacology[M].Beijing:People.sHealthyPress,1994:179-207
15ReidHA,ChanKE,TheanPC.Prolongedcoagulationdefeat(defibrinationsyndrome)inmalayanviperbite[J].Lancet,1963;1:62
16NolanC,HallLS,BarlowGH.Acrod,thecoagulatingenzymefromMalayanpitviper(Agkistrodonrhodostoma)venom[A].InMethodsinEnzymology[M].NewYork:AcademicPress,1976:205
3 讨论
自20世纪70年代以来,许多蛇毒类凝血酶,如[15、16][17][18][19]
Ancrod、Batroxobin、Crotalase、Reptilase已经发展成临床药物,它们在血液和心血管疾病的治疗中扮演着重要角色。因该类凝血酶没有特异的检测方法,我们通过SDS-PAGE和兔凝血时间的变化等方法,尝试自尖吻蝮蛇蛇毒中分离具有止血活性的类凝血酶。在分离过程中,许多相同活性、分子量和等电点相近的、以纤维蛋白原为底物的酶,长时间地干扰了分离工作(这也是目前多家实验室无法纯化的原因)。2001年3月获得了Agacutin,并按国际标准制定了质量控制标准。这样解决了长期以来无标准和酶蛋白不易提纯的难题。目前该类凝血酶已申请专利,并已完成临床前的实验研究。在临床前的研究中,总体的药效和毒性都优于Reptilase,不失为Reptilase的潜在取代品。
生物化学研究显示,Agacutin是由14和16kDa两条肽链构成的异二聚体。该酶不被EDTA、肝素和碘乙酰胺抑制,但能被较高浓度的NaCl抑制或被2+
Ca激活。因此,Agacutin是多亚基结构的、金属非依赖性或非丝氨酸蛋白酶,其降解纤原的机理类似Reptilase,而不同于凝血酶。Agacutin引起的全血凝
-1
块可迅速再溶解在3mol#L尿素溶液中,显示Aga-cutin不激活凝血因子XIII,不会催化可溶性的纤维蛋白交联成不溶性纤维蛋白凝块。药效研究结果显示,Agacutin能明显缩短凝血时间和出血时间,能较长时间维持血管内较低的纤维蛋白原浓度,即产生较高的可溶性纤维蛋白,当血管有伤口时,可讯速启动伤口的止血。对照组Reptilase使新西兰白兔凝血时间缩短时间持续9h,而Agacutin可使血凝时间缩短24h,显示Agacutin有较长的药效半衰期(以后的药代研究也得到验证)。Agacutin对新西兰白兔APTT、血小板数量和释放活性、血小板体外聚集和优球蛋白凝固时间无明显影响,这表明,Agacutin像Reptilase一样,不活化凝血因子II。在实验中亦可见,优球蛋白溶解时间缩短,显示具有较弱的纤溶活性。该类凝血酶可使新西兰白兔血粘度出现不同程度的降低,在高切变率时,这种变化较明显。这种血粘度变化与全血凝固时间和血纤维蛋白浓度变化相平行。所有的实验结果均显示,Agacutin是一个潜在的体内外止血药。
参考文献
1 OuyangC,HongJS,TengCM.Purificationandpropertiesofthe
#786#
17StockerK.Defibrinogenationwiththrombin-likesnakevenom
enzymes[A].In:FibrinolyticsandAntifirinolytics[M].Ed.MarkwardtF.Berlin:Springer-VerlagPress,1978:p451
18MarklandFS,DamusPS.Purificationofpropertiesofathrom-bin-likeenzymefromthevenomofCrotalusadamanteus[J].J
BoilChem,1971;246:6460-73
19StockerK.Reptilasetest[J].ThrombRes,1983;31:765-6
Experimentalstudyonhemostaticeffectsofagacutin,anovelthrombin-likeenzymefromAgkistrodonacutus
TANGSong-shan,WANGXiao-hua,ZHANGJuan-hui,ZHANGYuan,LEITian-luo,BUXiu-yun
DepartmentofMicrobiologicalandBiochemicalPharmacy,BioscienceandBiopharmaceuticalCollege,GuangdongPhar-maceuticalCollege,Guangzhou510224,Guangdong,ChinaABSTRACT AIM:Tostudythehemostaticeffectsofagacutininvivo.METHODS:Afteragacutinwasad-ministrated,theindexesonbloodcoagulationandfibrino-genlysissystemwereassayedandthehemostaticeffectwasobtainedbyobservingthemousetailbleedingtime.RE-SULTS:Theintravenousinjectionof0.01-0.05
-1
U#kgmarkedlyshortened44.9%-60.5%oftherab-bitbloodcoagulationtime.Afteradministration,thepeakeffectappearedin30minandtheeffectdelayedfor24h.Therabbitbloodfibrinogenconcentrationandbloodvis-cosityweredecreased,whichcoincidedwiththeeffectofshorteningofbloodcoagulationtime.Agacutinhadnoin-fluenceonAPTT,theplateletcount,plateletreleasing
activity,plateletinvitroaggregation,andeuglobulinco-agulationtime(ECT),butagacutinhadaweakfibrino-lyticactivity.Invivo,theipadministrationof0.5-2.0
-1
U#kgshortened24%-66%ofthemousetailbleedingtime.CONCLUSION:Agacutincausesahigherconcen-trationofsolublefibrinlevelinvesselanditdoesnotact-ivateprothrombin(IIfactor)andXIIIfactor.Thehemo-staticfunctionispromotedatthewound.Innormalves-sel,thesolublefibrindoesnotforminsolublefibrinclotwhichresultedinthrombosisinvivo.KEYWORDS thrombin-likeenzyme;coagulant;agkistrodonacutussnakevenom;agacutin;pharmacody-namics
5中国药品标准6杂志2006年征订启事
5中国药理学通报6是国家级核心期刊和权威的文献源期刊,主5中国药品标准6杂志是经国家科学技术部批准、国家食品
药品监督管理局主管、由国家药典委员会主办的我国第一部在药品标准领域进行报道和交流的学术性期刊,5中国药品标准6杂志的出版发行,将为进一步贯彻实施国家药品标准法制化发挥积极作用。该刊于2000年4月18日创刊。
刊号为:CN11-4422PR,双月刊,80页,国内外公开发行,邮发代码:2-509。5中国药品标准6杂志2006年起正文改为80页码(原64页),全年定价72元。欢迎单位和个人在当地邮局或中国药品标准杂志社订阅。编辑部尚存有部分2000年-2001年合定本、2002年、2003年、2004年合定本及2005年全套期刊,欢迎补购。
邮局汇款:北京市崇文区法华南里11号楼 中国药品标准杂志社 邮编:100061联系电话:(010)67157647传真:(010)67157648
5中国药物滥用防治杂志62006年征订启事
5中国药理学通报6是国家级核心期刊和权威的文献源期刊,主5中国药物滥用防治杂志6是经国家科学技术部批准、由卫生部主管、中国药物滥用防治学会、宁波戒毒研究中心主办的我国在药物滥用防治领域进行报道和交流的学术性期刊。5中国药物滥用防治杂志6的出版发行,将为进一步推动我国药物滥用防治工作及对药物滥用的预防、宣传、教育发挥积极作用。该刊于1995年创刊,刊号为:CN11-3742PR,双月刊,大16开本,64页,国内外公开发行,邮发代号:82-768。
5中国药物滥用防治杂志62006年全年定价48元。欢迎单位和个人在当地邮局或中国药物滥用防治杂志社订阅。邮局汇款:北京市崇文区法华南里11号楼 中国药品标准杂志社 邮编:100061联系电话:(010)67157647传真:(010)67157648