丁香油放置过程中丁香酚含量变化及抗菌作用的研究
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陕・ 西中 ２医０ １ ３第 年 ４３第卷３ 期
方 药横纵 ・
丁香 油 放 置程过 丁 香酚中 量 变含 及 抗茵化 作 用的 研 究
巧李如 巧归 娣 西陕人 民医省院 （西 ７安１ ０ ６８
摘 ）要 目 ： 的 讨探丁 香 于油 度温２ ±５ ￣２Ｃ， 相 对 湿 ６ Ｏ度 ±１ ０放置 ０ 、 １ 、２、 ３ 、 、６１ ２个 月 ， 及温 ４ 度０ ±２ ，
℃
相 对 湿度 ７５ ±５ 放置 １ 、 、２３ 个 月后丁 香酚 含 量变化 及 抗菌作 的 用化 变。方 法 ： 用 采高效液 相
色谱
法测定香丁油 中丁香含酚；量 采用 微琼脂量稀 法释 定其 对测 黄 金色葡球萄菌 等７ 致病种 菌 抗的 茵度 强（Ｍ Ｉ Ｃ ） 结果 ： 丁。 油香在检 时 测里 间丁酚含 量香及其 菌抗作用 变 不化显。结明论： 丁
香油 在 度温２ ５±２ ℃ 放置 １个 ２月及４ ０ ２±℃ 放 置 ３ 个 内月丁香酚 含量相 对 较稳 定。
主 题 词 谱色法 ， 高 效 液 丁 香相 油 丁 香 酚含量 定测
【图中分 类号 】 Ｒ９ １ ７ 文献【标识码】 Ａ 【 章文编 １号 １ ０ ００— ３ ７ ６ （９ ０２ １３ ） ０ — ３０３ ６ ２ — ０２ 丁香 油 是金 娘桃 植科物 香 Ｓ丁ｙ ｚ ｙ ｉｇｕ ｍ ｒ ａ ｍｏ ｔ ａ ｉ —
ｃＬ ｍｌ Ｍ ｅｒ ｒ ． Ｐｅ ｒｒ ｙ （ Ｅｕ ｇｅ ｉａ ｃ ａ ｒ ｙ ｐｏｈ ｉ Ｌａ ｔ ａ ｈ ｕ Ｔｂ ．ｍ 的） 干
１
． 培４ 养
基
氏培 养沙基 ， 号批 ２ １０ ０ １４ ０ ６； Ｍ— Ｈ
琼 培脂 养 基，批 号 ２０ １ １０ １ ０８ ； — Ｍ Ｈ汤肉培 基养， 批 号
０ ２ １１０ ２ ２ ， ９均系 杭 微州 物生 试 剂有 公限 产司品 ， ０加．
燥
花 蕾，经 水蒸 蒸 气馏得 到的 发挥 油。 其中所 化含 成分学 以丁 酚 香为主占 （５ ～８７５ ） 、竹石烯 （１ ４ ． ０４ ８ ） 、 香 丁酚 乙酸 （ 酯１７ ． ９ ３ ０ ）＿ ＿ １］ 。香 丁对油金黄 色葡球萄 菌 大肠、杆 、菌 贺痢志疾 杆 菌、 铜 绿假单 孢菌 杆、 肠沙 炎门 氏 菌 、枯 杆 草菌 、 酸 产克雷伯 菌、 表 葡皮萄球 菌 及
部 ３的琼 制 成半 固体脂 培养 基
。 ２ 方与 结法果取 丁香 油置 个４ 磨口 色棕 瓶中，
瓶 ｌ Ｏ每ｍ Ｉ ，每２个 分别置 温 于度 ２ ℃±５ ２℃，相 对 湿 度 ６ Ｏ ±ｌ ０ 及 度 ４温 ０℃ ２±℃， 相对 度 ７ 湿５ ±％ ５ 下 保存， 用高效 相 法 液 定放测置 ０ 、 １ 、 ２ ３、 、６ 、１ 个２
后各 丁月香 的酚量 ； 含用 微量琼 脂 释法稀测 定 其对 金 色葡黄球萄 等菌 ７致种 病菌 的菌抗 度 （强ＭＩ Ｃ ） 。 ２ １． 丁香 酚 的含 量 测定 ２ ．１ ．１ 色 条件 ：谱Ｉ ｎ —
分 深部 真 菌有皆明显 的抑 和制 灭 作杀 ］用 但。丁 香
油性 质不 定 ，稳 着 随放 置 时间 ， 颜色变黄，其 中香丁 酚
含
量变 化 何如 及其以抗 菌 作 用有 何 变 ，化未 见文献
道报，本 就丁文油于温香度 ５ ２± ２℃， 对湿相度 ６ ０± ｌＯ 放置 、 ０ｌ、 ２ ３ 、 、６ 、 １个２月 ， 及 温 度 ４０ ２ ￣±Ｃ ，相 对
ｅｒ ｔ ｓｉ ｌ Ｏ ＤＳ Ｃ色柱 谱；流 相动： Ａ 为 腈 乙 ，为 Ｂ Ｏ． １ 磷 酸溶 液， 行进 梯度 脱洗 ０，～ ３ ａ０ｉ ｎ ｒ ，Ａ ４ ５：— ７０ ； ３ ０ ～
湿度 ５７ ± ５ 放 置１ 、 、２ ３月个后各 丁 酚 香含量 的 变 及 化其 对 金 黄色葡 萄 菌 等球７ 种 病 致 的抗菌菌 强 度 （ ＭＩＣ 变 化进行 ）究研， 结 果报道 如 下 。
３
５ ａ ｒ ｎｉ ，：Ａ ７Ｏ 一９ ５ ３ ； ５ ～５ Ｏ ｉａｒ ， ｎ：９Ａ ５％； ５ ０～
５ ５ ａ
ｒ ｉｎ ， Ａ ： ９ ５４— ５检。测波 长２ ３ ０ ｎ； ｍ温柱３ ０ ℃ ；
速 １ 流ｉｍ ・ ｒａｉ ｎ 。
～ ｌ仪 器试 药与 １． １ 仪 器津岛 １０ Ａ — ｖｐ效 高液相 色
谱仪 ： 包括 Ｓ Ｐ Ｄ Ｍ— ｌ ＯＡ ｖ二 ｐ 管极阵 列 检测 器 、 Ｓ ｉｈ ａ ｄｍｚ ｕ Ｃ Ｌ Ａ Ｓ Ｓ Ｖ色 谱 工作Ｐ站 。 Ｉ ｎ ｅ ｒ ｓｔｉ ｌ ０Ｄ Ｓ ｌ ８Ｃ
２ ．
１ ． 对２照 品液 溶的制 ： 备精 密取 吸丁香酚 对 照 品 ．５ ｌ０ｍ ｇ至２ ５ ｍＬ量 瓶容 中 加 ，醇甲 至 刻 度， 摇 ， 匀再 从 中精 密取 吸ｌｍ Ｉ 至 ｌ ＯＩｍ 容 量瓶 中 ，加 甲醇 至 度刻， 摇匀 ，得 即 ， 浓度 为 终２ ０ ．０４ Ｆ ｇ／ｍ Ｉ 。 ２ ． １ ． ３ 供试 品溶 液 的制 备： 精 密 吸 丁取 香 油 ５ ．
ＯＯ ｍ 至 ｇ２５ ｍＬ 容 量 中瓶 加 甲， 醇 至 刻 ， 度匀 摇，再 从
谱色 柱 ２ ５ （ ０ ｍｌ ｌ ×４ Ｔ ６． ａ， ｒ ｍ ／５ａ ｍ） （ ｔ 本株式Ｅ 会社） 。
电子平天 Ｅ（ｔ 本 式株会 社 ） 。 恒温水浴 锅 北 （ 京长安 科 学 器仪 厂 ）， 真 空 燥 箱 （ 干天市津北 真空仪津器 厂 ）， ｌ Ｏ Ｏ ｔ￣Ｌ 量加微样 器（ 上 海求 生 化仪精器 厂 ， ９ ）孔 ６培
养板。
中精
密吸 取１ｍＬ 至 １Ｏ
ａｌ容 瓶量中 ， ｒ 加甲醇 至 刻度 ，
匀 ， 摇得即。
１
． ２ 试 药 香 油 丁制 自。香 酚 丁 照对 品 批（号： ７ ２ ５— ２ ０ ０ ０ ８０） 购 于 中药国品 生物 制 品 检 所 定。 水为
双
２ ．１ ． 线４性关 系考 察 ： 别分 密精吸取 香丁酚 对照
品 溶液０ ． ５ １、 ． ０、 １ ．５ 、２ ０ 、． ２． ５ Ｉｍ 置于 １ Ｏ ａ Ｌ 容量 瓶ｒ
蒸重 水 馏，乙 腈 甲、为醇色谱纯 ， 其 试 余 剂分析为纯。 １ ．３ 茵 株金 黄色葡 球萄 菌 （ ＡＴ ＣＣ ２ ５ ９ ２ ３ ） 大、
肠 杆 菌（ＴＡＣ Ｃ ２ ５ ９ ２）２、 铜 假绿 单 杆孢菌
中 加 ，醇甲 释稀至 刻度， 制配成 不同浓 度 对的 品照溶 液， 上 述按色谱 件条测 定 以 。香 酚丁检 测 浓 度（ Ｘ ）为 横坐标 峰面， 积 积 分值 （Ｙ ） 纵为坐 标 ，制 备标 曲准线， 得 回归程方 Ｙ７一Ｅ ＋０ ９ Ｘ＋６ １ ３１６ ６ ， ｒ 一 ． ０９９ １９结 果
明表，丁香酚 ０在． ２ ０ ０ ４ ～ １． Ｏ ０２ ／￣ ｇ 范围 内与 面峰积 积 分
（
ＡＴ ＣＣ ２ ８７５ ３ ） 为标 准株 菌 购， 于卫 生 部 临 床 检验 中 心 表。皮葡萄球 菌（ ２０１ １ ０ ３） 、 鲍蔓 动杆 菌 （ 不２ ０１ ０ １ ）６ ， 阴 沟 杆 （菌 ２０ １ １ ０ ）８， 肺炎克 雷伯 菌 （ ２ ０ １ １ ０ ）１ 陕 西由 省人 医民院检验科从 床标 本培临 养离分 到得 。
值 呈 良好 的线性关 系
。
西 中陕 医 ０ ２ ３年１第 ４３卷 ３第 期 ．２１ ． ５ 精 密试度 验： 在 上述 色 谱 条 下件 精 密 吸，
取浓度 为 ２ Ｏ ． ４０； ｇ／ ｍ Ｌ 的香 丁酚 照 对溶品液 １ ０ ｕＬ ，
３ ６ ３ 养
板 ， 孔每 分别 加入 经 倍稀比 释丁 香油 溶 液的５ ０ Ｌ， 分 再加人别制 备 好的各菌 液 ５ ０ ；Ｌ，轻轻 混 匀， 置 ３７ Ｃ￣
注 入色谱仪 ，连续 测 定６ 。次 果 结Ｓ ＤＲ 为０ ． ８ ０ ， 表
明仪 器密精度 良 。好
培
养 箱， 养 培 ２４ ｈ 观，察结果 。 个 每 样品浓 度重 复 实 验
１次。 （见 ３ ）表
２
． ． ６１ 稳定 试性验 ： 取 同 供 一 试 溶 品液适量 ， 分
别 于 ， １０， ２ ４，， ６， ｈ８ 上 按 色谱 述条件 进 样 测定 。 果结 Ｓ Ｄ为Ｒ １ ７ ． ６ ，表 明 供试 溶品液在 １ ０ｈ内 稳定 。 ２ ．１． ７ 重复 试性验 ： 取 一 同 批样 品５ 份， 分别按
表
３
丁
挥 发油香放置 不 同时间 的 体抗 外
试验 菌果 结 （
稀 释倍 数）
“ ． ２１ ． ”３ 项 法制方 供备试品溶 液 ， 在 上述 谱 色件条下测
定 结， 丁果 酚香Ｒ ＳＤ为 Ｉ． ｌ ６ ， 表明方 法重 性复良 好。
２ ． １ ． ８加样回 收试 率验： 精密 取吸 已含知量 的 品样９份 ， 分 别 精 密加 一 定入量 丁香 酚 照 品溶 对液混 合 匀 ， 均 按上述色谱 条件 测定 ，算 加计样回收率 。
表 １ 加 样回 收 率 实 结 验果
注 ： １ ： ６ ， ４ 表在 明（ ：１６倍 稀 ） 释 后 的］杳油 再 １：作 ４倍 ６稀释 ， 无细
菌生长 。
３讨 论 香丁 含 酚 测量 定 有采 用 气相色 谱
法］ 和液相 谱色法 ＿６ 方等法 ， 其 液中 相谱色 应法 用 较普 ，遍本 研采究 高用 效相液 色谱 法定测 丁香油 中丁 香酚
含量。 通 过 对 丁 酚香标 准 品 醇甲溶 液 在 ２０ ～ ０ ４０ ０ ｎ ｍ 进 行 扫描， 发 现 其 ２在 ０ ｎ ３ｍ 最大吸收，有 故选 择 ２３ ０ ｉ ｒ ｍ为检 测 波长。 对 色谱条 件 中 流动 相系统 进行 了考察， 现发用 乙一腈 ０ ．１ 磷 酸 溶 系统液分 离 峰 最
好 。 香 丁 油中 除 丁 香 酚外 石 ， 烯竹和 丁 香 酚 乙 酸酯含
２
１． ． ９ 丁香油 置放 不同 时间丁香酚 含量 定测 ：取
于 温度２ ５ ±２ ℃， 及 ４ Ｏ± ２ Ｃ￣放 置０ 、 １ 、２、 、３６ 、 １ ２ 个月 丁香的油 测定其 丁中 酚含香 ， 量法方 同 前， 见 表２。
２ 表 丁香 油 放置 不 同 时 间 丁 香 酚
含 量测 定果结（ 一ｎ ） ２
２ ５ 土２℃ 放置丁 香含酚／量 ０月 ８ ３ ． ６ ３ 月１ ８３ ． ２２ ２ 月 ８ ３ ． １ ５ ３月 ６ 月１ ２ 月 ８ １ ．８ ４
量 也较 大， 为 了更 好地考 察丁香油 的稳定性 ， 本 研究 最 终确 定用 乙腈一 ．０ １ ９ ６／磷酸 液溶行进梯度脱洗， 同 测时 定 石了 烯 和丁香 竹酚 乙酯酸 峰的面 积积 分 值观。 察 结
果显 示， 丁 油香 于温度 ２５ ± ２￣ 放Ｃ 置 １２个 月 ， 及 ４ ０± ２ ℃ 放置 ３ 月个 其丁中 酚香 含变 量化显不著 ， 且香 丁油 中丁 香 酚比 丁 酚香标 准 品要 稳 定得多 ，是 何 原 因有待
入 深究 研 丁香 （ 峰面烯 积变 化不显著 ，丁香 乙酸酯 峰 酚面 积 显 著减 在 ）小， 而香 丁 油的菌 抗用 随作置放时间 无
明显 化变 。 参 考 文 献
［１ ］ 邱 琴 陈 崔兆 杰 ，，韦 栋 ，梁 ． 丁 香等 挥发 油 学化 成分
研的究 ［Ｊ ．］药物 分杂志 析， ０２０
３， ２３ ６ （）： ４４ ３—４ ６ ．４ ［ ２］ 李巧 如 ，刘宗 。 智健 康任， ．等丁 香 提 取 物 抗 菌 机 理 的探 ＿讨 Ｊ ］． 西 北 药 杂学 志 ，２ ００１ ，１ （ ６ ）６： ２ ６ Ｉ － ２ ６２ ． ３［］ 晨赵 曦， 逸梁 曾 ，李 宁晓 ． 香丁挥 发 油化 学 分 与成
８抗２ ．９ ０ ２ ８ １ ．２
４ Ｏ土 ２ ℃放 置
香丁含酚量／
１ 月８
． ５ ６ ３
月２
８２ ６．２
３ 月
１ ８． ８ ９
月 ６８
１ ．５ ９
验结 果发 实现， 丁 香 油 的丁中香 酚 两 在 条 种 下件 保 存 ，丁香 酚均 相 对比稳较定 。 ２ ． ２ 丁香油放 置 不 同时 抗间 试验 ２菌 ．２． １ 药 配制物 ： 精密吸 取丁香油 １ ． ０ｍＬ ， 置 ０１ｍ ｌ 试管 ，中加
入无菌
．０ １ 琼脂液溶６ ｍ Ｌ混 匀 。再精 密 取吸２ ｍ［
用 无 菌生 理盐 溶水液 依 次作 ２ 、 ４ 、 ８ 、 ３ ２ 、６ 、４ １２ 、 ２ ５ ８６、 ５ １２倍 稀释， 即 得 同浓不 的丁度香 油 溶 。液
菌
活研究［ Ｊ性］ ． 天然 物研产究开发 与 ，２０ ０ ６ ，１ ８ （ ３ ） ： ３８ １ — ３８５ ． ［ ４ ］ 吕世 民， 陈杖榴 陈建新，． 丁香酚 体外 抗 菌 用作 研的 究ｒＪ ］ ． 食 品学科 ，２ ０ ８ ，０ ９ ２ （９ ）：１ ２ —２１ ２ ４ ． ［ ５］ 海 英 ． 王气相 色谱 法测 定 香 油丁 中丁香 酚 含量［ Ｊ ］． 哈尔滨
医 ，药２ ０ ０ ９（ ２ ９ ：）２ ０ —２ １
２． ．２ ． ２ 菌液的制 备：用 无菌枪头 取挑数 新鲜个 的金黄 色葡 萄球 菌菌落 于 ２ｍ １营养 汤肉 中 ， 制管成０ ． ５
氏麦 比 度 的 菌 浊 液 ，悬置 ３ ℃ ７箱 孵温育 ２ ～ ３ ，ｈ取
０ ５ Ｉ 菌 悬液 入加 １０ Ｌ微ｍ 半 量体培固 养基 ］混 中 匀 ， 用备。其它 菌株 操 相作 同。
２ ．２ ． ３ 抗菌 试 ： 验微用 琼 脂量稀 法 释 取，９ ６孔培
［ ６ ］ 余小 平． 高 液 效相色 谱 法测 定 丁 香 丁中 香 酚的含 量 ［ ］ｊ． 物药分析杂 ， 志２ ０ ８ ０ ，２ （ ６８ ） ： ７ ９ ５ — ７９７
（ 收稿 Ｏ １２ ２ —１ ０－ ｉ ８ 修回 ２ ０ １； － ２１ 卜 １２）