植物细胞的活体染色与死活鉴定
植物细胞的活体染色及死活鉴定
一、实验原理
活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。
中性红是常用的活体染料之一,它是一种弱碱性pH 指示剂,变色范围在pH6.4~8.0之间(由红变黄)。在酸性条件下中性红解离度很强,带色的阳离子呈樱桃红色,在pH7以上,它不解离而以分子态溶于水呈橙黄色的溶液。
二、实验仪器与试剂
仪器与用具:显微镜;载玻片;盖玻片;单面刀片;尖头镊子;酒精灯;火柴;吸水纸适量。 试剂 :0.03%中性红溶液;1mol/L硝酸钾溶液
三、实验方法
1. 切下一片较幼嫩的洋葱鳞片,用单面刀片在鳞片内侧割划成0.5cm2左右的小块,用尖头镊子将内表皮小块轻轻撕下,将制好的洋葱鳞茎内表皮放置于滴加蒸馏水的载玻片上,小心地将制片平展到载玻片上,加盖玻片,多余液体用吸水纸吸干,在显微镜下观察(注意调节光线强度)
2. 另取一小块表皮,滴加0.03%的中性红溶液,染色5~10min;在蒸馏水中稍加冲洗,在载玻片上滴一滴蒸馏水,小心地将制片平展到载玻片上,加盖玻片,多余液体用吸水纸吸干,
3. 在显微镜下观察。
将步骤2中的活体染色制片取出几片放入pH 略高于7.0的自来水中浸泡10~15min,再置于载玻片上镜检(为了确证中性红染色部位,可将上述洋葱内表皮染片浸入1mol/L的硝酸钾
4. 溶液中浸泡10min 左右,然后取出观察。)
将步骤3中的活体制片放在酒精灯火焰上微微加热,以杀死细胞,再在显微镜下观察
四、实验结果与分析
1. 可以看清细胞的轮廓。
2. 细胞结构清晰,可以看清细胞核。
3. 细胞呈橙色,细胞质与细胞壁分离,细胞结构清晰。
4. 细胞破裂,细胞边界不存在,细胞呈橙色。