泛素连接酶的结构与功能研究进展 (1)
ＲｅｖｉｅｗｓａｎｄＭｏｎｏｇｒａｐｈｓ综述与专论
生物化学与生物物理进展
ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓ２００８，３５（１）：１４￣２０
ｗｗｗ．ｐｉｂｂ．ａｃ．ｃｎ
泛素连接酶的结构与功能研究进展＊
杨
娜１）
侯巧明１，２）
南
２）
洁２）苏晓东１，２）＊＊
（１）北京大学深圳研究生院，化学基因组实验室，深圳５１８０５５；北京大学生命科学学院，结构生物学实验室，北京１００８７１）
摘要泛素化是体内蛋白质翻译后重要修饰之一，是蛋白质降解的信号．泛素连接酶Ｅ３是泛素化过程中的关键酶之一，介
导活化的泛素从结合酶Ｅ２转移到底物，不同的泛素连接酶作用于不同的底物蛋白，决定了泛素化修饰的特异性．根据结构与功能机制的不同，可将泛素连接酶Ｅ３分为ＨＥＣＴ（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｏＥ６ＡＰＣｔｅｒｍｉｎｕｓ）家族和ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ家族，前者含有ＨＥＣＴ结构域，可直接与泛素连接再将其传递给底物．ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ家族的Ｅ３发现较晚，庞大且功能复杂，是近年来研究的热点，此家族均包含相似的Ｅ２结合结构域和特异的底物结合部分，作为桥梁将活化的泛素从Ｅ２直接转移到靶蛋白，其本身并不与泛素发生作用．总结了这２种Ｅ３连接酶家族成员的三维结构及功能机制研究的最新进展．
关键词泛素连接酶，底物特异性，ＨＥＣＴ，ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ，ＷＤ４０学科分类号Ｑ７１
在各种形式的蛋白质翻译后修饰ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ，ＰＴＭ）过程中，泛素化过程近年来引起了越来越广泛的关注，与蛋白质磷酸化信号传导作用相似，泛素化在细胞生命活动的许多进程中发挥着至关重要的作用．２００４年诺贝尔化学奖授予了在“泛素介导的蛋白质降解过程研究”中做出开创性贡献的三位科学家．泛素是一个由７６个氨基酸残基组成的高度保守的多肽，因其广泛分布于各类细胞中而得名，被泛素标记的蛋白质将被特异性地识别并被迅速降解．细胞中蛋白质的降解是一个复杂的、被严密调控的过程，此过程在涉及细胞基本进程（如ＤＮＡ修复，细胞周期调控，细胞凋亡等），抗原呈递，炎症反应等一系列通路中扮演重要角色［１］．蛋白质降解异常与许多疾病，如恶性肿瘤、神经退行性疾病的发生、发展密切相关［２］．因此，阐明泛素在蛋白质降解中的作用机制对理解多种疾病的发生机制和遗传信息的调控表达有重要意义．
ａｃｔｉｖａｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ），泛素结合酶Ｅ２（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ）和泛素连接酶Ｅ３（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎｌｉｇａｓｅ），也称底物识别因子（ｓｕｂｓｔｒａｔｅｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ）．它们的作用机制现已基本研究清楚：首先由Ｅ１通过其活性中心的Ｃｙｓ残基与泛素的Ｃ端形成硫酯键活化单个游离的泛素（此步骤需要ＡＴＰ），然后Ｅ１将活化的泛素递交给Ｅ２，最后由Ｅ３募集特异的底物和Ｅ２，并介导泛素从Ｅ２转移到靶蛋白．由于蛋白酶体识别泛素化的蛋白并将其降解是一个非特异性的进程，因此，Ｅ３在整个蛋白质的降解过程中发挥了至关重要的作用，决定了反应的特异性．
２泛素连接酶的分类及特征
１泛素化反应机制
蛋白质的泛素化修饰主要发生在赖氨酸残基
通常情况下，泛素化反应包含一个Ｅ１，少数几个Ｅ２和众多Ｅ３．现已发现的Ｅ３家族主要有两类，包括占多数的ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ家族［３］和ＨＥＣＴ（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｏＥ６ＡＰＣｔｅｒｍｉｎｕｓ）家族［４］．ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ家族的Ｅ３均包含相似的Ｅ２结合结构域，作为桥梁将活化的泛素从Ｅ２
直接转移到靶蛋白，
的侧链，且通常是多聚化（多泛素化）过程．被多泛素化修饰的蛋白质会被蛋白酶体（ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ）识别进而被降解．三种关键的酶共同介导了这一多泛素化过程，包括泛素活化酶Ｅ１（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ
＊国家自然科学基金（３０７００１１５），深圳市科技研发资金资助项目．＊＊通讯联系人．
Ｔｅｌ：０７５５－２６０３２７０３，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｕｘｄ＠ｓｚｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ收稿日期：２００７－０６－０４，接受日期：２００７－０９－１７
２００８；３５（１）杨娜等：泛素连接酶的结构与功能研究进展
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其本身并不与泛素发生作用［５］．而ＨＥＣＴ家族的Ｅ３除与Ｅ２结合外，均包含ＨＥＣＴ催化结构域，其中保守的Ｃｙｓ残基可与Ｅ２携带的泛素形成硫酯键，Ｅ２先将泛素传递给Ｅ３，再由Ｅ３递呈给底物．随着越来越多的新型泛素连接酶的发现，理解其功能发挥的结构基础和作用机制已成为当今研究的热点．２．１
ＨＥＣＴ家族的泛素连接酶结构与功能特点
ＨＥＣＴ家族的Ｅ３源自最早发现的Ｅ６ＡＰ（Ｅ６
不等，均包含Ｃ端的３５０个残基左右的ＨＥＣＴ催化结构域和Ｎ端的特异性结构域，大体可分为包含ＷＷｄｏｍａｉｎ蛋白（如Ｎｅｄｄ４家族蛋白）和缺少ＷＷｄｏｍａｉｎ蛋白（如Ｅ６ＡＰ）［７］．Ｎｅｄｄ４家族蛋白是研究得比较清楚的一类ＨＥＣＴＥ３，也称为Ｃ２－ＷＷ－ＨＥＣＴＥ３，除Ｃ端的ＨＥＣＴ催化结构域外，还包含Ｎ端的Ｃ２磷脂结合结构域用于亚细胞单元的定位，中间的２～４次重复的ＷＷｄｏｍａｉｎ则通过识别ＰＹｍｏｔｉｆ（ＰＰｘＹ）介导Ｎｅｄｄ４与底物的相互作用，决定了泛素化的特异性．目前在人类中共发现了９种Ｎｅｄｄ４蛋白（表１），可调节包括基因转录、质膜蛋白的稳定及拥挤、错误折叠蛋白质的降解、抑癌因子的降解（如ＰＴＥＮ）等多种胞内进程［８，９］．
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ）［６］，该蛋白质与人类乳突淋瘤病毒（ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ）的Ｅ６蛋白相互作用后，介导细胞内抑癌因子ｐ５３的降解，引发宫颈癌的产生．另外，Ｅ６ＡＰ的Ｅ３连接酶功能异常会导致一类神经性疾病，安琪曼综合症（Ａｎｇｅｌｍａｎ!ｓｓｙｎｄｒｏｍｅ）的发生．迄今共发现了５０种人源的ＨＥＣＴＥ３，大小从９０～５００ｋｕ
Ｔａｂｌｅ１
Ｎｅｄｄ４蛋白Ｎｅｄｄ４－１Ｎｅｄｄ４－２Ｓｍｕｒｆ１Ｓｍｕｒｆ２ＡＩＰ４／ＩｔｃｈＷＷＰ１ＷＷＰ２ＮＥＤＬ１ＮＥＤＬ２
ＳｔｒｕｃｔｕｒｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎｅｘａｍｐｌｅｓｏｆｎｉｎｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔＮｅｄｄ４ｐｒｏｔｅｉｎｓ
表１
结构域组成－Ｃ２－（ＷＷ）４－ＨＥＣＴ－Ｃ２－（ＷＷ）４－ＨＥＣＴ－Ｃ２－（ＷＷ）２－ＨＥＣＴ－Ｃ２－（ＷＷ）３－ＨＥＣＴ－Ｃ２－（ＷＷ）４－ＨＥＣＴ－Ｃ２－（ＷＷ）４－ＨＥＣＴ－Ｃ２－（ＷＷ）４－ＨＥＣＴ－Ｃ２－（ＷＷ）２－ＨＥＣＴ－Ｃ２－（ＷＷ）２－ＨＥＣＴ
９种人源Ｎｅｄｄ４蛋白的结构与功能
介导的泛素化降解过程可调控的对象或进程举例
抑癌因子ＰＴＥＮ的降解，ＨＩＶ病毒颗粒组装，Ｌｉｄｄｌｅ综合征上皮钠离子通道ＥｎａＣ，电压门控钾离子通道，氯离子通道ＣＩＣ－５ＴＧＦ－β受体，肿瘤细胞的运动性，ＢＭＰ／Ｓｍａｄ１通路，ＲｈｏＡ的降解ＴＧＦ－β受体，ＧＴＰ酶Ｒａｐ１Ｂ在形成神经元极性中的作用细胞命运调节因子Ｎｏｔｃｈ，闭锁蛋白Ｏｃｃｌｕｄｉｎ，ＪｕｎＢｐ５３的定位及转录，Ｋｒｕｐｐｅｌ－ｌｉｋｅｆａｃｔｏｒ５转录因子Ｏｃｔ４，上皮钠离子通道超氧化物岐化酶１突变体稳定ｐ７３及其转录调控
现已有３种ＨＥＣＴ家族的Ｅ３有三维结构报道，包括Ｅ６ＡＰ，ＷＷＰ１和Ｓｍｕｒｆ２［１０～１２］．Ｅ６ＡＰＨＥＣＴ结构域和Ｅ２复合物的晶体结构由Ｐａｖｌｅｔｉｃｈ课题组于１９９９年首先获得解析，开启了我们认识这类泛素连接酶的大门．如图１ａ所示，Ｅ６ＡＰ的ＨＥＣＴ结构域包含较短的Ｃ－ｌｏｂｅ和较长的Ｎ－ｌｏｂｅ，二者由柔性的ｌｉｎｋｅｒ相连，大体呈躺倒的Ｌ型．其中Ｃ－ｌｏｂｅ包含活性中心的Ｃｙｓ残基，Ｎ－ｌｏｂｅ则负责与Ｅ２相连．奇怪的是ＨＥＣＴｄｏｍａｉｎ的活性Ｃｙｓ残基与Ｅ２活性中心的Ｃｙｓ残基相距４０"之遥，这样大的距离很难完成泛素在二者之间的传递，因此推测该酶在催化过程中应存在较大的构象变化．
来自Ｎｅｄｄ４家族的ＷＷＰ１蛋白的ＨＥＣＴ催化结构域于２００３年由Ｖｅｒｄｅｃｉａ等［１１］解析，为我们理解ＨＥＣＴ类Ｅ３酶的构象变化提供了新的证据和线索．如图１ｂ所示，ＷＷＰ１蛋白的ＨＥＣＴ结构域也由Ｃ－ｌｏｂｅ和Ｎ－ｌｏｂｅ组成，ｌｏｂｅ本身与Ｅ６ＡＰ非常相似，只是二者之间连接的ｌｉｎｋｅｒ发生了较大的变化，使得Ｃ－ｌｏｂｅ位于Ｎ－ｌｏｂｅ的中间，整体呈Ｔ型结构．这
种构象变化使得ＨＥＣＴｄｏｍａｉｎ与Ｅ２活性中心Ｃｙｓ残基间的距离缩短到１６#（计算模拟）．进一步通过计算，Ｖｅｒｄｅｃｉａ等提出了一个催化模型（图１ｃ）：Ｅ３通过ｌｉｎｋｅｒ区进一步的构象变化使其催化中心更加靠近Ｅ２的催化中心，两Ｃｙｓ残基间的距离只有５$，使得泛素在二者之间的传递成为可能．为了证实这种构象变化模型，作者通过定点突变实验改变ｌｉｎｋｅｒ区的柔性以及２个ｌｏｂｅ间接触面的稳定性，发现均会影响该Ｅ３酶的催化活性．新近的实验结果也进一步证实了此模型的存在［１３，１４］．
然而，关于ＨＥＣＴ家族的Ｅ３是如何识别特异性底物及其催化活性是如何被调节的研究还在积累之中．已知Ｎｅｄｄ４家族的蛋白质是通过其２～４次重复的ＷＷｄｏｍａｉｎ直接与包含ＰＹｍｏｔｉｆ的底物结合，一些重要的衔接蛋白（ａｄａｐｔｏｒ）也可通过各种不同的方式介导连接酶与底物之间的相互作用［８］．另外，通过调节ＨＥＣＴ结构域的催化能力来调控该类酶的活性也是很重要的方面．Ｓｍｕｒｆ２蛋白的结构及功能研究为我们提供了典型的例证［１２］．众所周知，ＴＧＦ－β
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生物化学与生物物理进展Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２００８；３５（１）
信号传导通路在细胞的生长、分化等重要进程中发挥着至关重要的作用，对于该通路的各种调节机制均是研究的热点．Ｓｍｕｒｆ２蛋白可介导完成ＴＧＦ－β受体的泛素化降解过程，这一进程受一种抑制型的Ｓｍａｄ蛋白，Ｓｍａｄ７所调控．
Ｓｍａｄ７蛋白由Ｎ端的
ＮＴＤ结构域，中间的ＰＹｍｏｔｉｆ，以及ＭＨ２结构域组成．其中ＰＹｍｏｔｉｆ可与Ｓｍｕｒｆ２的ＷＷｄｏｍａｉｎ结合，而ＭＨ２结构域可与ＴＧＦ－β受体结合，因此Ｓｍａｄ７介导Ｓｍｕｒｆ２与底物间的结合．更为有意思的是，发现ＮＴＤ结构域不但可与Ｓｍｕｒｆ２的ＨＥＣＴ结构域结合，
还可与Ｅ２（ＵｂｃＨ７）结合．根据进一步结构分析及突变实验结果，发现Ｓｍｕｒｆ２的ＨＥＣＴ结构域本身与Ｅ２的亲和力非常的低，Ｓｍａｄ７则通过帮助Ｓｍｕｒｆ２募集Ｅ２来激活其连接酶的活性．于是在对Ｓｍｕｒｆ２连接酶的调控中，Ｓｍａｄ７发挥了双重的作用，不但介导了Ｓｍｕｒｆ２的ＷＷｄｏｍａｉｎ与底物的结合，也调控其ＨＥＣＴ结构域与Ｅ２之间的亲和作用，从而激活Ｓｍｕｒｆ２蛋白的泛素连接酶催化活性，完成底物ＴＧＦ－β受体泛素化依赖的降解过程．
４０!１６"５#
Ｆｉｇ．１ＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｃｈａｎｇｅｍｏｄｅｌｓｏｆＨＥＣＴｄｏｍａｉｎ
图１
与Ｅ２复合物结构模拟．（ｃ）催化模型．
［１１］
ＨＥＣＴ结构域的构象变化
［１１］
蓝色为Ｎ－ｌｏｂｅ，紫色为Ｃ－ｌｏｂｅ，绿色代表Ｅ２，红色代表泛素．（ａ）Ｅ６ＡＰ－ＵｂｃＨ７（Ｅ２）复合物结构．（ｂ）ＷＷＰ１晶体结构及
２．２ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ家族的泛素连接酶结构与功能特点
２．２．１ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ家族Ｅ３的组成．ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ连接酶家族的成员除了少数为单分子（如ＭＤＭ２，ｃ－Ｃｂｌ）外，均为多个分子的复合物，如ＡＰＣ／Ｃ，ＳＣＦ复合物等．它们均包含相似的Ｅ２结合结构域ＲＩＮＧ和各异的底物识别复合体．与ＨＥＣＴ家族的连接酶不同的是，ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ连接酶没有催化结构域，不与泛素直接发生作用，只是起到桥梁作用，将挑选的底物与Ｅ２募集到一起，完成泛素从Ｅ２到底物之间的传递过程．
其中Ｃｕｌｌｉｎ－Ｒｉｎｇ－ｂａｓｅｄＥ３－Ｌｉｇａｓｅｓ（ＣＲＬｓ）构成了此类泛素连接酶的主体［３］．目前，在人类细胞中共发现了７种ｃｕｌｌｉｎ（表２），其作用类似活性Ｅ３组装的“支架”，Ｃ端通过结合Ｒｂｘ（Ｅ２ｂｉｎｄｉｎｇＲｉｎｇｆｉｎｇｅｒｐｒｏｔｅｉｎ）蛋白与Ｅ２相连，Ｎ端则与底物受体相连．
Ｔａｂｌｅ２
表２
ＣｕｌｌｉｎＣＵＬ１ＣＵＬ２ＣＵＬ３ＣＵＬ４ＡＣＵＬ４ＢＣＵＬ５ＣＵＬ７
在已发现的Ｃｕｌｌｉｎ中，Ｃｕｌ１和Ｃｕｌ７通过与ＳＫＰ１和不同的Ｆ－ｂｏｘｐｒｏｔｅｉｎ结合来招募特征底物，Ｃｕｌ２和Ｃｕｌ５通过结合ｅｌｏｎｇｉｎＢＣ以及ＶＨＬｂｏｘ和ＳＯＣＳｂｏｘ来捕获特异性底物，Ｃｕｌ３则通过ＢＴＢ结构域与底物结合．最新又发现Ｃｕｌ４Ａ通过与ＤＤＢ１和不同的ＤＣＡＦ（ＤＤＢ１－Ｃｕｌ４ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆａｃｔｏｒｓ）分子相互作用来招募底物．
目前，在哺乳动物中发现了大于６０种Ｆｂｏｘ，４０种ＳＯＣＳ，近２００种ＢＴＢ蛋白和数十种ＤＣＡＦ分子，可见Ｃｕｌｌｉｎ蛋白可构成非常庞大的泛素连接酶家族．它们作用的底物及可调节的对象遍及细胞周期（如ＣｙｃｌｉｎＤ／Ｅ，ｐ５３，ｐ２１，ｐ２７，ｐ５７，ＷＥＥ１），信号传导（如β－ｃａｔｅｎｉｎ，ＩＦＮＡＲ１，ＳＭＡＤ３／４，Ｎｏｔｃｈ１／４），转录调节（如Ｅ２Ｆ１，ＡＴＦ４，ＨＩＦ１α／２α，Ｊｕｎ，ＮＦ－κＢ１／２），ＤＮＡ复制（如ＣＤＴ１，ＯＲＣ１），生长发育（如Ｅ２Ａ）等许
Ｃｕｌｌｉｎ－ＲＩＮＧ－Ｌｉｇａｓｅ（ＣＲＬ）ｆａｍｉｌｙ
名称
ＳＣＦ，ＣＤＬ１
ＶＢＣ，ＣＢＣ，ＥＣＳ，ＳＣＦ２，ＣＤＬ２ＢＣＲ３，ＳＣＦ３，ＣＤＬ３ＤＤＣ，ＣＤＬ４－
ＳＣＦ５，ＣＤＬ５ＳＣＦ７，ＣＤＬ７
Ｃｕｌｌｉｎ－ＲＩＮＧ－Ｌｉｇａｓｅ（ＣＲＬ）连接酶家族
ＣＲＬ组成
Ｆ－ｂｏｘｐｒｏｔｅｉｎ／ＳＫＰ１／ＣＵＬ１／ＲＩＮＧ
ＳＯＣＳ／ＢＣ－ｂｏｘｐｒｏｔｅｉｎ／ｅｌｏｎｇｉｎＢＣ／ＣＵＬ２／ＲＩＮＧＢＴＢ－ｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎ／ＣＵＬ３／ＲＩＮＧＤＣＡＦ／ＤＤＢ１／ＣＵＬ４Ａ／ＲＩＮＧ？／ＣＵＬ４Ｂ／ＲＩＮＧ
ＳＯＣＳ／ＢＣ－ｂｏｘｐｒｏｔｅｉｎ／ｅｌｏｎｇｉｎＢＣ／ＣＵＬ５／ＲＩＮＧＦＢＸ２９／ＳＫＰ１／ＣＵＬ７／ＲＩＮＧ
２００８；３５（１）杨娜等：泛素连接酶的结构与功能研究进展
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多至关重要的胞内进程，发挥着难以估量的作用．
目前已获得结构解析的ＣＲＬ主要有两种，一类是Ｃｕｌ１参与的ＳＣＦ复合物的晶体结构，另一类是Ｃｕｌ４Ａ参与的ＤＣＡＦ／ＤＤＢ１／Ｃｕｌ４Ａ／ＲＩＮＧ复合物的部分晶体结构．另外，虽然Ｃｕｌ２和Ｃｕｌ３的结构尚未获得解析，其衔接蛋白ｅｌｏｎｇｉｎＢＣ及ＢＴＢ－ｄｏｍａｉｎ已有一些三维结构报道，在此不做详述，可参见文献［１５，１６］．
２．２．２ＳＣＦ连接酶复合物结构与功能研究．研究最为清楚的ＣＲＬ是ＳＣＦ（Ｓｋｐ１－Ｃｕｌ１－Ｆｂｏｘ）蛋白复合物，该复合物的三维晶体结构于２００２年由Ｐａｖｌｅｔｉｃｈ课题组解析［１７］．解析的精确三维结构表明（图２），Ｃｕｌｌｉｎ１由一个长柄状结构域（ＮＴＤ）和一个球状结构域（ＣＴＤ）组成．球状结构域结合环指蛋白Ｒｂｘ１并进而与Ｅ２结合；长柄状结构域由３个重复的新型五螺旋结构域组成，其Ｎ端结合Ｓｋｐ１和Ｆｂｏｘｓｋｐ２蛋白，Ｆｂｏｘ蛋白则通过其特有的介导蛋白质与蛋白质相互作用的模式来捕获不同的底物，是决定泛素化特异性的关键所在．Ｃｕｌ１作为一个长“支架”，将结合了泛素的Ｅ２和特异性底物募集在一起，完成蛋白质的泛素化过程．
三维结构分析表明，Ｓｋｐ１－Ｆｂｏｘｓｋｐ２－Ｃｕｌ１－Ｒｂｘ复合物整体构架非常刚性，缺少柔性的连接部分，包括Ｓｋｐ１与Ｆ－ｂｏｘ及Ｃｕｌ１相互之间，以及Ｃｕｌ１本身ＮＴＤ与ＣＴＤ之间的连接都是十分刚性．通过定点突变实验改变Ｃｕｌ１的ＮＴＤ与ＣＴＤ之间柔性，发现该突变体丧失了体外泛素化ｐ２７的能力［１７］．说明Ｃｕｌ１及整个ＳＣＦ复合物的刚性是确保此类Ｅ３连接酶活性所必需的，分析模拟得到的ＳＣＦ复合物与Ｅ２之间相互作用的模型（图２），发现从Ｅ２活性中心的半胱氨酸
残基到Ｆｂｏｘｓｋｐ２的ＬＲ（ｌｅｕｃｉｎｅ－ｒｉｃｈ）重复区的距离约５０!．而分析ｐ２７分子的结构发现，其结合于Ｓｋｐ２ＬＲ重复区的残基（磷酸化的Ｔｈｒ１８７）与其潜在的泛素化标记位点（Ｌｙｓ１３４，Ｌｙｓ１５３和Ｌｙｓ１６５）之间的距离刚好与这个尺寸相当．Ｃｕｌ１的长杆状结构为不同大小底物的结合及底物的活性位点向Ｅ２的呈递提供了足够的空间，作为桥梁将Ｅ２活性中心的半胱氨酸残基和底物的靶赖氨酸残基靠近在一起，完成泛素在二者之间的传递．
最新在植物中也发现了类似ＳＣＦ复合物的泛素连接酶家族新成员，即ＴＩＲ１－ＡＳＫ１复合物，华盛顿大学的郑宁课题组再次在泛素连接酶领域获得突破，解析了该植物泛素连接酶的三维晶体结构，同时首次建立了植物生长激素受体的结构模型［１８］．２．２．３Ｃｕｌ４类泛素连接酶复合物结构与功能研究．Ｃｕｌ４Ａ－ＤＤＢ１－ＷＤ４０是最新发现的一种ＣＲＬ泛素连接酶，可以调节包括ＤＮＡ修复，ＤＮＡ复制和转录，病毒感染等多种进程．Ｃｕｌ４Ａ可与ＤＤＢ１蛋白（ＵＶ－ｄａｍａｇｅｄＤＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ１）和ＲＯＣ１（一种Ｒｉｎｇｆｉｎｇｅｒ蛋白）相互作用构成Ｅ３，其晶体结构由华盛顿大学的郑宁课题组２００６年９月发表［１９，２０］．如图３所示，Ｃｕｌ４Ａ的结构与Ｃｕｌ１非常类似，由长弓形的ＮＴＤ螺旋结构域和球状的ＣＴＤ结构域构成，ＣＴＤ结合ＲＯＣ１环指蛋白招募Ｅ２，而其Ｎ端结合的ＤＤＢ１蛋白结构上与Ｓｋｐ１蛋白有很大差异．ＤＤＢ１蛋白由３个β－ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ结构域构成，其中ＢＰＢ结构域相对独立，是与Ｃｕｌ４Ａ结合的部分，ＢＰＡ和ＢＰＣ结构域紧密相连，提供了底物结合的平台．然而这样的一个连接酶，其底物结合的特异性是如何实现的呢？从其他的ＣＲＬ推导，应该存在功能上类似Ｆｂｏｘ或ＳＯＣＳ的一类分子，即可与ＤＤＢ１结合，又能与不同的底物相结合
．
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生物化学与生物物理进展Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２００８；３５（１）
２００６年９月～１０月期间，共有４个课题组几乎同时报道他们发现了可与Ｃｕｌ４Ａ－ＤＤＢ１相互作用的因子［２０～２３］，各有不同的命名，此处统一称为ＤＣＡＦ（ＤＤＢ１－Ｃｕｌ４ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆａｃｔｏｒｓ）．在他们发现的几十种ＤＣＡＦ中，绝大部分都是ＷＤ４０蛋白．
ＷＤ４０重复序列是一类广泛存在于真核生物体内，结构保守、功能复杂的蛋白质，已发现有几百种，主要通过介导蛋白质间的相互作用发挥其功能，可参与调节包括信号转导、ｍＲＮＡ剪接、组蛋白修饰、细胞骨架组装和细胞周期调控等重要过程［２４，２５］．其重复保守区一般由４０～６０个氨基酸残基组成，Ｎ端由甘氨酸－组氨酸（ＧＨ）开始，Ｃ端到色氨酸－天冬氨酸（ＷＤ）结束．重复的ＧＨ和ＷＤ之间的保守核心共同组成稳定的β－ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ结构．典型的－ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ结构一般包含７～８个β－ｂｌａｄｅｓ，每个β
ｂｌａｄｅ由４条反平行的β－ｓｔｒａｎｄｓ组成，共同形成一个封闭的中空桶状ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ结构［２６］．研究表明位于ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ顶部和底部的极性氨基酸残基通常是ＷＤ４０蛋白与其他蛋白质相互作用的活性部位．ＷＤ４０家族蛋白一般通过与其他一个或几个蛋白质相互作用发挥其功能．它的结构重复单元对称地排列在一起，为蛋白质间的相互作用提供了平台．而其结构表面不同的疏水性、电荷和空间位阻决定蛋白质识别的特异性．
在所发现可与ＤＤＢ１相互作用的ＷＤ４０蛋白中，很多都具有重要的生理功能．比如一种称为Ｌ２ＤＴＬ／ＣＤＴ２（ｈｕｍａｎｈｏｍｏｌｏｇｕｅｏｆＤｒｏｓｏｐｈｉｌａｌｅｔｈａｌ（２）ｄｅｎｔｉｃｌｅｌｅｓｓｐｒｏｔｅｉｎ／ｆｉｓｓｉｏｎｙｅａｓｔＣＤＣ１０ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ２）的分子，包含一个Ｎ端ＷＤ４０结构域和Ｃ端结构域，可与Ｃｕｌ４Ａ－ＤＤＢ１和ＰＣＮＡ（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ）相互作用介导ＣＤＴ１蛋白在ＤＮＡ发生损伤时的降解过程［２１，２７］．ＣＤＴ１是ＤＮＡ复制许可蛋白（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｌｉｃｅｎｓｉｎｇ），当ＤＮＡ发生损伤时（如紫外线的照射），ＣＤＴ１被大量降解，阻止ＤＮＡ复制的进行，保护基因组的正确．同时细胞由Ｓ期进入Ｇ１期时，ＣＤＴ１也会被大量降解．人为阻断ＣＤＴ１的降解途径会使细胞停滞在Ｓ期，造成多核现象．进一步的研究又发现，Ｃｕｌ４Ａ－ＤＤＢ１－Ｌ２ＤＴＬ泛素连接酶可与ＰＣＮＡ和ＭＤＭ２相互作用，调控ｐ５３蛋白的多泛素化和降解过程［２８］．众所周知，ｐ５３是所有肿瘤抑制因子中研究的最为广泛的，其作用机制也相当复杂．这个被称为“基因组守护者”的抑癌蛋白从１９７９年发现以来一直备受关注．人类５０％以上
的肿瘤组织中均发现有ｐ５３基因的突变或表达异常，预示着ｐ５３与人类肿瘤的发生发展密切相关．同时ｐ５３介导的信号传导途径在细胞的生长、分化、衰老、应激等生命过程中也起着重要的调控作用．保持野生型ｐ５３的功能及正常的表达水平，抑制癌细胞内ｐ５３的降解途径是抗肿瘤研究的活跃方向．已发现调控ｐ５３的泛素化降解过程有三条途径，一是受ＨＥＣＴ家族连接酶Ｍｕｌｅ／ＡＲＦ－ＢＰ１调节［２９］，二是依赖Ｃｕｌ１－Ｓｋｐ１－ＦＢＬ７连接酶与其Ｃ端的相互作用，三是最新发现的Ｎ端依赖Ｃｕｌ４－ＤＤＢ１－Ｌ２ＤＴＬ、ＰＣＮＡ和ＭＤＭ２共同作用的降解过程．ＭＤＭ２也称ＨＤＭ２，本身可作为一种Ｅ３，但只能单泛素化ｐ５３，ｐ５３的多泛素化还需依赖特定的Ｅ３，即Ｃｕｌ４－ＤＤＢ１－Ｌ２ＤＴＬ和ＰＣＮＡ．
推测ＰＣＮＡ的作用是将ｐ５３、
ＭＤＭ２和Ｌ２ＤＴＬ联系到一起，完成泛素的转移过程．
由于没有三维结构信息，无法直接证实ＤＤＢ１是如何与ＷＤ４０蛋白相互作用的．通过序列分析发现，能与ＤＤＢ１结合的ＷＤ４０蛋白大都存在２个保守的ＷＤｘＲ／Ｋｍｏｔｉｆ，分别位于２个相邻的ｂｌａｄｅ的Ｃ端．从几个结构已知的ＷＤ４０蛋白（ＷＤＲ５、ＴＬＥ１）来看，ＤｏｕｂｌｅＷＤｘＲ／Ｋｂｏｘ中高度保守的Ａｓｐ和Ａｒｇ残基位于桶状ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ的底面，推测是ＷＤ４０蛋白与ＤＤＢ１结合的关键位点之一．进一步定点突变实验表明，将ＤｏｕｂｌｅＷＤｘＲ／Ｋｂｏｘ中的任一Ａｒｇ突变，都使ＷＤ４０蛋白对ＤＤＢ１的结合能力明显减弱．然而一些不包含ＷＤｘＲ／Ｋｍｏｔｉｆ的ＷＤ４０蛋白也证明能与ＤＤＢ１结合［２１］．分析目前唯一获得的ＤＤＢ１－底物复合物晶体结构［１９，２０］（图３），紫色表示的ＳＶ５－Ｖ（Ｖｐｒｏｔｅｉｎｏｆｓｉｍｉａｎｖｉｒｕｓ５）蛋白并不包含ＷＤ４０结构域，主要是通过其Ｃ端的α螺旋结构与ＤＤＢ１的ＢＰＣ结构域相互作用，而ＢＰＡ结构域则存在进一步结合其他蛋白质的位点和空间．于是就存在下面的问题，ＷＤ４０蛋白是竞争ＳＶ５－Ｖ的结合位点呢，还是会结合在另外的ＢＰＡ位置？由于大多数ＷＤ４０蛋白除了ＷＤ４０结构域，还包含其他的结构，那么除了ＷＤｘＲ／Ｋｍｏｔｉｆ，ＷＤ４０蛋白是否存在其他的可与ＤＤＢ１相互作用的位点？不同的ＷＤ４０蛋白是否以同样或各异的方式结合在ＤＤＢ１上？弄清楚上述问题是揭示新型泛素连接酶Ｃｕｌ４－ＤＤＢ１－ＷＤ４０如何实现底物特异性的关键，这对我们了解细胞内许多重要进程，如ＤＮＡ损伤修复，组蛋白翻译后修饰，细胞周期调控，肿瘤的发生等都具有重要的意义．
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生物化学与生物物理进展Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２００８；３５（１）
２００６年９月～１０月期间，共有４个课题组几乎同时报道他们发现了可与Ｃｕｌ４Ａ－ＤＤＢ１相互作用的因子［２０～２３］，各有不同的命名，此处统一称为ＤＣＡＦ（ＤＤＢ１－Ｃｕｌ４ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆａｃｔｏｒｓ）．在他们发现的几十种ＤＣＡＦ中，绝大部分都是ＷＤ４０蛋白．
ＷＤ４０重复序列是一类广泛存在于真核生物体内，结构保守、功能复杂的蛋白质，已发现有几百种，主要通过介导蛋白质间的相互作用发挥其功能，可参与调节包括信号转导、ｍＲＮＡ剪接、组蛋白修饰、细胞骨架组装和细胞周期调控等重要过程［２４，２５］．其重复保守区一般由４０～６０个氨基酸残基组成，Ｎ端由甘氨酸－组氨酸（ＧＨ）开始，Ｃ端到色氨酸－天冬氨酸（ＷＤ）结束．重复的ＧＨ和ＷＤ之间的保守核心共同组成稳定的β－ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ结构．典型的－ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ结构一般包含７～８个β－ｂｌａｄｅｓ，每个β
ｂｌａｄｅ由４条反平行的β－ｓｔｒａｎｄｓ组成，共同形成一个封闭的中空桶状ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ结构［２６］．研究表明位于ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ顶部和底部的极性氨基酸残基通常是ＷＤ４０蛋白与其他蛋白质相互作用的活性部位．ＷＤ４０家族蛋白一般通过与其他一个或几个蛋白质相互作用发挥其功能．它的结构重复单元对称地排列在一起，为蛋白质间的相互作用提供了平台．而其结构表面不同的疏水性、电荷和空间位阻决定蛋白质识别的特异性．
在所发现可与ＤＤＢ１相互作用的ＷＤ４０蛋白中，很多都具有重要的生理功能．比如一种称为Ｌ２ＤＴＬ／ＣＤＴ２（ｈｕｍａｎｈｏｍｏｌｏｇｕｅｏｆＤｒｏｓｏｐｈｉｌａｌｅｔｈａｌ（２）ｄｅｎｔｉｃｌｅｌｅｓｓｐｒｏｔｅｉｎ／ｆｉｓｓｉｏｎｙｅａｓｔＣＤＣ１０ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ２）的分子，包含一个Ｎ端ＷＤ４０结构域和Ｃ端结构域，可与Ｃｕｌ４Ａ－ＤＤＢ１和ＰＣＮＡ（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ）相互作用介导ＣＤＴ１蛋白在ＤＮＡ发生损伤时的降解过程［２１，２７］．ＣＤＴ１是ＤＮＡ复制许可蛋白（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｌｉｃｅｎｓｉｎｇ），当ＤＮＡ发生损伤时（如紫外线的照射），ＣＤＴ１被大量降解，阻止ＤＮＡ复制的进行，保护基因组的正确．同时细胞由Ｓ期进入Ｇ１期时，ＣＤＴ１也会被大量降解．人为阻断ＣＤＴ１的降解途径会使细胞停滞在Ｓ期，造成多核现象．进一步的研究又发现，Ｃｕｌ４Ａ－ＤＤＢ１－Ｌ２ＤＴＬ泛素连接酶可与ＰＣＮＡ和ＭＤＭ２相互作用，调控ｐ５３蛋白的多泛素化和降解过程［２８］．众所周知，ｐ５３是所有肿瘤抑制因子中研究的最为广泛的，其作用机制也相当复杂．这个被称为“基因组守护者”的抑癌蛋白从１９７９年发现以来一直备受关注．人类５０％以上
的肿瘤组织中均发现有ｐ５３基因的突变或表达异常，预示着ｐ５３与人类肿瘤的发生发展密切相关．同时ｐ５３介导的信号传导途径在细胞的生长、分化、衰老、应激等生命过程中也起着重要的调控作用．保持野生型ｐ５３的功能及正常的表达水平，抑制癌细胞内ｐ５３的降解途径是抗肿瘤研究的活跃方向．已发现调控ｐ５３的泛素化降解过程有三条途径，一是受ＨＥＣＴ家族连接酶Ｍｕｌｅ／ＡＲＦ－ＢＰ１调节［２９］，二是依赖Ｃｕｌ１－Ｓｋｐ１－ＦＢＬ７连接酶与其Ｃ端的相互作用，三是最新发现的Ｎ端依赖Ｃｕｌ４－ＤＤＢ１－Ｌ２ＤＴＬ、ＰＣＮＡ和ＭＤＭ２共同作用的降解过程．ＭＤＭ２也称ＨＤＭ２，本身可作为一种Ｅ３，但只能单泛素化ｐ５３，ｐ５３的多泛素化还需依赖特定的Ｅ３，即Ｃｕｌ４－ＤＤＢ１－Ｌ２ＤＴＬ和ＰＣＮＡ．
推测ＰＣＮＡ的作用是将ｐ５３、
ＭＤＭ２和Ｌ２ＤＴＬ联系到一起，完成泛素的转移过程．
由于没有三维结构信息，无法直接证实ＤＤＢ１是如何与ＷＤ４０蛋白相互作用的．通过序列分析发现，能与ＤＤＢ１结合的ＷＤ４０蛋白大都存在２个保守的ＷＤｘＲ／Ｋｍｏｔｉｆ，分别位于２个相邻的ｂｌａｄｅ的Ｃ端．从几个结构已知的ＷＤ４０蛋白（ＷＤＲ５、ＴＬＥ１）来看，ＤｏｕｂｌｅＷＤｘＲ／Ｋｂｏｘ中高度保守的Ａｓｐ和Ａｒｇ残基位于桶状ｐｒｏｐｅｌｌｅｒ的底面，推测是ＷＤ４０蛋白与ＤＤＢ１结合的关键位点之一．进一步定点突变实验表明，将ＤｏｕｂｌｅＷＤｘＲ／Ｋｂｏｘ中的任一Ａｒｇ突变，都使ＷＤ４０蛋白对ＤＤＢ１的结合能力明显减弱．然而一些不包含ＷＤｘＲ／Ｋｍｏｔｉｆ的ＷＤ４０蛋白也证明能与ＤＤＢ１结合［２１］．分析目前唯一获得的ＤＤＢ１－底物复合物晶体结构［１９，２０］（图３），紫色表示的ＳＶ５－Ｖ（Ｖｐｒｏｔｅｉｎｏｆｓｉｍｉａｎｖｉｒｕｓ５）蛋白并不包含ＷＤ４０结构域，主要是通过其Ｃ端的α螺旋结构与ＤＤＢ１的ＢＰＣ结构域相互作用，而ＢＰＡ结构域则存在进一步结合其他蛋白质的位点和空间．于是就存在下面的问题，ＷＤ４０蛋白是竞争ＳＶ５－Ｖ的结合位点呢，还是会结合在另外的ＢＰＡ位置？由于大多数ＷＤ４０蛋白除了ＷＤ４０结构域，还包含其他的结构，那么除了ＷＤｘＲ／Ｋｍｏｔｉｆ，ＷＤ４０蛋白是否存在其他的可与ＤＤＢ１相互作用的位点？不同的ＷＤ４０蛋白是否以同样或各异的方式结合在ＤＤＢ１上？弄清楚上述问题是揭示新型泛素连接酶Ｃｕｌ４－ＤＤＢ１－ＷＤ４０如何实现底物特异性的关键，这对我们了解细胞内许多重要进程，如ＤＮＡ损伤修复，组蛋白翻译后修饰，细胞周期调控，肿瘤的发生等都具有重要的意义．
２００８；３５（１）杨娜等：泛素连接酶的结构与功能研究进展
・１９・
３结束语
关于泛素化过程的许多细节我们还并不了解，
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２６ＨａｎＺ，ＧｕｏＬ，ＷａｎｇＨ，ｅｔａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｏｆｍｅｔｈｙｌａｔｅｄｈｉｓｔｏｎｅＨ３ｌｙｓｉｎｅ４ｂｙｔｈｅＷＤ－４０ｐｒｏｔｅｉｎＷＤＲ５．ＭｏｌＣｅｌｌ，２００６，２２（１）：１３７～１４４
２７ＨｉｇａＬＡ，ＢａｎｋｓＤ，ＷｕＭ，ｅｔａｌ．Ｌ２ＤＴＬ／ＣＤＴ２ｉｎｔｅｒａｃｔｓｗｉｔｈｔｈｅ
ＣＵＬ４／ＤＤＢ１ｃｏｍｐｌｅｘａｎｄＰＣＮＡａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｓＣＤＴ１ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏＤＮＡｄａｍａｇｅ．ＣｅｌｌＣｙｃｌｅ，２００６，５（１５）：１６７１～１６７７２８ＢａｎｋｓＤ，ＷｕＭ，ＨｉｇａＬＡ，ｅｔａｌ．Ｌ２ＤＴＬ／ＣＤＴ２ａｎｄＰＣＮＡｉｎｔｅｒａｃｔ
ｗｉｔｈｐ５３ａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｐ５３ｐｏｌｙｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙｔｈｒｏｕｇｈＭＤＭ２ａｎｄＣＵＬ４Ａ／ＤＤＢ１ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．ＣｅｌｌＣｙｃｌｅ，２００６，５（１５）：１７１９～１７２９
２９ＣｈｅｎＤ，ＢｒｏｏｋｓＣＬ，ＧｕＷ．ＡＲＦ－ＢＰ１ａｓａｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
比如泛素是一个接一个地加到底物上呢，还是事先聚合好（多发生于泛素的Ｋ４８或Ｋ６３残基间的聚合），再连接到底物上？已有最新的证据表明，ＲＩＮＧ家族的一种Ｅ３可传递聚合好的泛素给底物，这种泛素的多聚化过程是由２个相同的Ｅ２分子共同完成的［３０］．然而这一过程能成为ＲＩＮＧＥ３家族的共同规律吗？在ＨＥＣＴＥ３家族中也能实现吗？ＨＥＣＴ家族的Ｅ３本身也有催化活性，这一多聚化过程会不会由Ｅ３来完成呢？随着越来越多的新型泛素连接酶的发现，更多的三维结构信息和功能研究成果的不断积累，我们对这类具有重要功能的酶家族会有进一步更深入的认识．
参考文献
１２
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Ｄ，
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ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＳｔｕｄｙｏｆＵｂｉｑｕｉｔｉｎＬｉｇａｓｅｓ＊
ＹＡＮＧＮａ１），ＨＯＵＱｉａｏ－Ｍｉｎｇ１，２），ＮＡＮＪｉｅ２），ＳＵＸｉａｏ－Ｄｏｎｇ１，２）＊＊
（１）ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｈｅｎｚｈｅｎＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌ，ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＧｅｎｏｍｉｃｓ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ５１８０５５，Ｃｈｉｎａ；
２）
ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８７１，Ｃｈｉｎａ）
ＡｂｓｔｒａｃｔＵｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎｏｎｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｓｉｓｔｈｅｓｉｇｎａｌｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．ＵｂｉｑｕｉｔｉｎｌｉｇａｓｅＥ３ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｋｅｙｅｎｚｙｍｅｓｉｎｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ，ｉｔｒｅｃｏｇｎｉｚｅｓａｓｐｅｃｉｆｉｃｓｕｂｓｔｒａｔｅｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｒｅｃｒｕｉｔｓａｎｕｂｉｑｕｉｔｉｎｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅＥ２，ｍｅｄｉａｔｉｎｇｔｈｅｕｂｑｕｉｔｉｎｔｒａｎｓｆｅｒｆｒｏｍｔｈｅＥ２ｔｏｔｈｅｓｕｂｓｔｒａｔｅｐｒｏｔｅｉｎ．ＵｂｉｑｕｉｔｉｎｌｉｇａｓｅＥ３ｃａｎｂｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｓｕｂｆａｍｉｌｉｅｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｉｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｒｕｃｔｕｒｅｃｈａｒａｃｔｅｒｓａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ｔｈｅＨＥＣＴ（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｏＥ６ＡＰＣｔｅｒｍｉｎｕｓ）ｆａｍｉｌｙａｎｄｔｈｅＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒｆａｍｉｌｙ．ＭｅｍｂｅｒｓｏｆｔｈｅＨＥＣＴＥ３ｓｈａｒｅｔｈｅｃｏｍｍｏｎＨＥＣＴｃａｔａｌｙｔｉｃｄｏｍａｉｎ，ｗｈｉｃｈｃａｎｂｉｎｄｔｏａｎＥ２ａｎｄｌｏａｄｔｈｅｕｂｉｑｕｉｔｉｎｏｎｔｈｅｍｓｅｌｖｅｓｂｅｆｏｒｅｃａｔａｌｙｚｉｎｇｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｕｂｉｑｕｉｔｉｎｔｏｔｈｅｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＷｈｉｌｅｔｈｅＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒＥ３ａｌｌｃｏｎｔａｉｎａｎｓｉｍｉｌａｒＥ２ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎａｎｄａｕｎｉｑｕｅｓｕｂｓｔｒａｔｅｂｉｎｄｉｎｇｐａｒｔ，ｍｅｄｉａｔｉｎｇｄｉｒｅｃｔｕｂｉｑｕｉｔｉｎｔｒａｎｓｆｅｒｆｒｏｍｔｈｅＥ２ｔｏｔｈｅｓｕｂｓｔｒａｔｅ．ＴｈｅｍｏｓｔｒｅｃｅｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｉｎｔｈｅｓｔｕｃｔｕｒａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｓｔｕｄｉｅｓｏｆｔｈｅｓｅｔｗｏＥ３ｆａｍｌｉｅｓｗｅｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓｕｂｉｑｕｔｉｎｌｉｇａｓｅ，ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓｐｅｆｉｃｉｔｙ，ＨＥＣＴ，ＲＩＮＧ－ｆｉｎｇｅｒ，ＷＤ４０
＊ＴｈｉｓｗｏｒｋｗａｓｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｇｒａｎｔｓｆｒｏｍＴｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（３０７００１１５）ａｎｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＳｈｅｎｚｈｅｎｃｉｔｙ．
＊＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｔｅｌ：８６－７５５－２６０３２７０３，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｕｘｄ＠ｓｚｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎＲｅｃｅｉｖｅｄ：Ｊｕｎｅ４，２００７Ａｃｃｅｐｔｅｄ：Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ１７，２００７