酶法糖化血红蛋白试剂盒方法学比对评价

—１３３６—

文章编号：１００７－４２８７（２０１０）０８－１３３６－０３

酶法糖化血红蛋白试剂盒方法学比对评价

李义龙，单战海

倡

，韩　冰，韩靖云，王　萌

（卫生部北京医院检验科，北京１００７３０）

摘要：目的　评估一种酶法测定糖化血红蛋白（ＨｂＡ１ｃ）试剂盒的性能。方法　酶法测定ＨｂＡ１ｃ，评价的方法学指标为试剂盒的线性范围、不精密度、抗干扰性、回收率，并分别与免疫法和高效液相（ＨＰＬＣ）法进行相关及偏倚分析。结果　该试剂盒的检测在４．３－１２．９％呈线性；不精密度测定低、中、高值批内及批间ＣＶ在０．８９％～１．４３％之间，总ＣＶ在１．７７－２．１６％；ＨｂＡ１ｃ标准为５．５％和１０．５％其回收率分别为９９．０％、１０２．１％；干扰实验：维生素Ｃ＜５００ｍｇ／Ｌ、胆红素＜４００ｍｇ／Ｌ、溶血素＜５０００ｍｇ／Ｌ、乳糜＜２％时，对结果无明显干扰（干扰率枙±５％）。酶法ＨｂＡ１ｃ与免疫法和ＨＰＬＣ法的测定结果比较其回归方程分别是：Ｙ＝１．０４１７Ｘ－０．７１８７和Ｙ＝０．９８８１Ｘ－０．０９４４，相关系数均为ｒ＝０．９９，Ｐ＜０畅０５，检验方法之间具有显著的统计学意义，经验证酶法测定ＨｂＡ１ｃ与免疫法和高效液相法的偏倚都在允许范围内。结论　酶法ＨｂＡ１ｃ试剂盒在不精密度、抗干扰性、线性范围均符合临床要求，与常规方法比较相关良好偏差较小，可完全满足临床对ＨｂＡ１ｃ检测需求。

关键词：酶法；糖化血红蛋白；方法学中图分类号：Ｒ４４６．１

文献标识码：Ａ

Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅａｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｇｌｙｃａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ（ＧＨｂ）　ＬＩＹｉ－ｌｏｎｇ，ＳＨＡＮＺｈａｎ－ｈａｉ，ＨＡＮＢｉｎｇ，ｅｔａｌ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７３０，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅａｎａｌｙｔｉｃａｌｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｈｅｎｅｗｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｇｌｙｃａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｂｙｍｅａｎｓｏｆｔｈｅｌｉｎｅａｒｉｔｙｔｅｓｔ，ｔｈｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎｔｅｓｔ，ｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔａｎｄｔｈｅｍｅｔｈｏｄｃｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎｄｂｉａｓｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｔｅｓｔｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅａｎａｌｙｔｉｃａｌｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｇｌｙｃａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｉｔｙｒａｎｇｅｏｆｔｈｅ

Ｔｈｅｔｏｔａｌｉｍｐｒｅｃｉｓｉｏｎｗａｓ１．７７％（５．５６％）、２．１６％（８．３３％）、２．０７％（１０．１２％）．Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９９．００％（５．５％）、１０２．１％

ｎｅｗｍｅｔｈｏｄｗａｓ４．３－１２．９％．Ｔｈｅｉｍｐｒｅｃｉｓｉｏｎｏｆｉｎｔｒａ－ａｓｓａｙｗａｓ１．４３％（ＨｂＡ１ｃ５．５６％）、０．９６％（８．３３％）、０．８９％（１０．１２％）．（１０．５％）．Ｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔｓｈｏｗｅｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅａｓｓａｙ（ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ＜±５％）ｗｈｅｎＶｉｔａｍｉｎＣ＜５００ｍｇ／Ｌ，ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ＜４００ｍｇ／Ｌ，ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ＜５０００ｍｇ／Ｌａｎｄｃｈｙｌｏｕｓ＜２％．ＴｈｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｔｅｓｔｓｈｏｗｅｄｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｎｅｗｅｎｚａｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｔｈｅｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｆｏｒｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）ｗａｓｅｘｃｅｌｌｅｎｔ（Ｙ

２

＝１．０４１７Ｘ－０．７１８７，Ｒ＝０．９８，Ｎ＝４０，Ｐ＜０．０５）；ａｎｄｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｎｅｗｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｔｈｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒ－＝４０，Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，ｌｉｎｅａｒｉｔｙ，ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎｄａｃｃｕｒａｃｙｔｅｓｔｗｅｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｒｏｕｔｉｎｅＨｂＡ１ｃ

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄ；ｇｌｙｃａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ；ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ

ｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｆｏｒｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎＡ１ｃｗａｓｅｘｃｅｌｌｅｎｔ（Ｙ＝０．９８８１Ｘ＋０．０９４４，Ｒ２＝０．９８，Ｎｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｎａｕｔｏｍａｔｅｄｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎａｌｙｚｅｒ，ａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｉｎｃｌｉｎｉｃ．

（ＣｈｉｎＪＬａｂＤｉａｇｎ，２０１０，１４：１３３６）

　　糖化血红蛋白（ｇｌｙｃａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ，ＧＨｂ；主要成分类：一类是基于ＧＨｂ与Ｈｂ的电荷不同，如离子交换层析法、电泳法；另一类是基于Ｈｂ上糖化基团的结构特点，如亲和层

２］

析法、免疫法、离子捕捉法和最新推出的酶法［１，。

ＨｂＡ１ｃ）的检测方法有几十种，目前常用的基本上可分为两大

收集北京医院糖尿病病人肝素钠抗凝样本８０份，用于相关性及偏倚分析，并收集高、中、低三个水平ＨｂＡ１ｃ的全血标本０．５ｍｌ，用２０倍的ＨｂＡ１ｃ前处理液溶血后分装于ＥＰ管中，储存于－２０℃备用，用于不精密度测定。１．２　仪器与试剂

１．２．１　仪器　ＯｌｙｍｐｕｓＡＵ６４０全自动生化分析仪（日本，奥林帕斯公司产品）；西门子ＨｂＡ１ｃ免疫法专用仪器ＤＣ２０００＋（德国，西门子诊断公司产品）；ＴＯＳＯＨＨＬＣ－７２３Ｇ７离子交换高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法的全自动糖化血红蛋白分析仪（日本，ＴＯＳＯＨ公司）

１．２．２　试剂　酶法ＨｂＡ１ｃ试剂盒：试剂１和试剂２（批号：００９ＲＪＥ）；前处理液（批号：０１０ＲＡＦ）；校准品（浓度为５．１％和１０．５％批号：０１２ＲＢＦ）均由日本积水医疗株式会社提供。西

酶法测定ＨｂＡ１ｃ提供了一个如临床生化反应一样快速、均一的反应体系（如葡萄糖等），有很好的精密度，与常规仪器，成本比较低，有着更好的应用前景。１　材料与方法１．１　标本来源

倡通讯作者

ＨＰＬＣ法和免疫测定法有很好的相关性，不需要昂贵、专用的

—

计算出ＨｂＡ１ｃ（％）。

１３３７—

门子ＤＣ２０００ＨｂＡ１ｃ免疫法试剂（批号：９７３７１２８）为德国西

＋

门子诊断公司产品。ＴＯＳＯＨＨＬＣ－７２３Ｇ７糖化血红蛋白仪所用洗脱缓冲液１（批号：Ｅ７－１０５Ｎ）洗脱缓冲液２（批号：Ｅ７－２０４Ｎ）洗脱缓冲液３（批号：Ｅ７－３０６Ｍ）溶血素／清洗液（批号：司。

ＨＷ－１１Ｎ）及分离柱（批号：ＮＣ０８２６Ｅ）均购置于日本ＴＯＳＯＨ公

１．３．２　酶法ＨｂＡ１ｃ的不精密度试验　参照美国国家临床实验室标准化委员会（ＮＣＣＬＳ）颁布的ＥＰ５－Ａ文件方案

［３］

进行操

作。将全血标本离心，离心速度为８００ｇ，５分钟。用ＨｂＡ１ｃ前处理液对高、中、低３份离心后样本中血球部分进行溶血处理，ＨｂＡ１ｃ前处理液与血球的比例为２０∶１，并分装于ＥＰ管中，放入－２０℃保存。连续测定２０天，每天测定两批，批间间隔的时间不少于２小时，每批对样品做双份测定，取均值，计算批内、批间、天间及总不精密度（ｃｖ％）。

１．３．３　酶法ＨｂＡ１ｃ的线性范围测定　参考ＮＣＣＬＳＥＰ６－Ａ文

［４］

１．３　方法

１．３．１　酶法测定ＨｂＡ１ｃ原理　第一反应中，在蛋白酶的作用下，切断ＨｂＡ１ｃ的β链Ｎ末端中的糖化甘氨酰谷氨酰胺，同时通过测定６００ｎｍ与８００ｎｍ的吸光度差，求出Ｈｂ的浓度。第二反应中，果糖基氨基酸氧化酶（ＦＰＯＸ）作用于糖化甘氨酰谷氨酰胺。在过氧化酶（ＰＯＤ）的存在下，生成的过氧化氢与Ｎ－羧甲基氨羰基－４，４－二甲氨基二苯胺化钠（显色剂）产生显色反应。通过测定此吸光度求出ＨｂＡ１ｃ的浓度。此试验可用于半及全自动生化仪。根据求得的ＨｂＡ１ｃ浓度与Ｈｂ浓度

件方案进行操作。取异常高值ＨｂＡ１ｃ（１２．９％）全血标本１份（作为浓度序号１０）和正常人低值（４．３％）全血标本１份（作为浓度序号０）等体积混合（作为浓度序号４），取等体积的４和１０混合形成浓度序号５，依次类推，见表１所示进行稀释，混匀后检测并重复２次，计算均值。

表１　线性实验的标本处理

配制形成顺序０１０＋２１１０＋３１００＋４９０＋１０３４＋１０４５＋１０５６＋１０６７＋１０７８＋１０８１０２１．３．４　酶法ＨｂＡ１ｃ的回收试验　将全血标本进行溶血处理，用上述３种方法按顺序１→８进行样本测定，再按相反顺序８并于ＨｂＡ１ｃ校准液（浓度分别为５．５％和１０．５％）按一定比例混合进行回收检测。样本制备：基础样本：全血前处理液０．９ｍｌ＋０．９％Ｎａｃｌ０．１ｍｌ，作为空白。回收样本１：全血前处理液ｍｌ＋１０．５％校准液０．１ｍｌ。混匀后检测并重复２次，计算均值。按照公式：

Ｐ＝（Ｘ１－Ｘ０）／Ｍ倡１００％，其中Ｐ为回收率，Ｘ１为混合样本

［５］

→１重复测定，５ｄ完成。记录测定结果，计算每个样本每种方法测定结果的均值、每个样本每种方法样本重复测定值间差值的绝对值及２种方法测定结果均值间的差值，并去除离散值。

１．３．７　统计学分析　统计学分析采用ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ２００３，ＳＰＳＳ１１．０软件。回归分析采用Ｐａｓｓｉｎｇ－Ｂａｂｌｏｋ回归，回归线性计学意义。相关性分析采用Ｐｅａｒｓｏｎ相关，Ｐ＜０．０５表示相关具有统计学意义。偏倚分析采用Ｂｌａｎｄ－Ａｌｔｍａｎ方法。２　结果

２．１　酶法测定ＨｂＡ１ｃ的不精密度检测表３显示低、中、高三份标本的ＨｂＡ１ｃ批内、批间、天间及总不精密度值，结果显示总ＣＶ平均在２％左右，而批内及批间ＣＶ在１％左右。精密度良好。

表３　酶法测定ＨｂＡ１ｃ的不精密度（％）样本低值样本

中值样本均值５．５６８．３３０．０８０．０８０．０６０．０２０．１４０．０６总

０．１００．１０１．７７２．１６检测采用Ｃｕｓｕｍ方法检测，Ｐ＜０．０５表示线性回归偏倚有统

０．９ｍｌ＋５．５％校准液０．１ｍｌ。回收样本２：全血前处理液０．９

的检测平均值，Ｘ０为基础样本浓度，Ｍ为添加的校准液浓度。１．３．５　酶法ＨｂＡ１ｃ的干扰试验　参考ＮＣＣＬＳＥＰ７－Ａ２

文件

方案进行操作：将２．７ｍｌ全血分别与维生素Ｃ、胆红素、溶血素、脂肪乳的浓缩液０．３ｍｌ混合，８００ｇ速度离心，用ＨｂＡ１ｃ前处理液处理含干扰物的全血标本（ＨｂＡ１ｃ前处理液∶血球＝２０∶１），分别得到样本１，将全血标本２．７ｍｌ与纯水０．３ｍｌ混合，用上述方法同样处理标本，得到样本２。依照表２将样本１与样本２按一定梯度混合得到一系列不同浓度的干扰物，然后对每管稀释液进行测定。按表２操作：

表２　不同浓度的干扰物制备

样本１（μｌ）０５０１００１５０２００２５０３００３５０４００４５０５００［６］

１．３．６　相关性分析　参照ＮＣＣＬＳＥＰ９－Ａ２

评价方案，各收集

２．２　酶法ＨｂＡ１ｃ的线性试验　结果如下Ｙ＝１畅０４９３Ｘ－０畅１２５３，相关系数ｒ＝０．９９８９，Ｐ＜０．０５说明检测值与理论值有显著相关性，ｂ＝１．０４９斜率接近１，ａ＝０．１２５３截距接近０，因此当ＨｂＡ１ｃ为４．３－１２畅９％时线性良好。

２．３　酶法ＨｂＡ１ｃ的回收率结果　经检测并计算含低、高ＨｂＡ１ｃ校准液溶液的回收率分别为９９．０％、１０２．１％，均在９５％

４０份检测ＨｂＡ１ｃ的临床病人标本，用日本积水医疗株式会社２０００＋ＨｂＡ１ｃ免疫法（简称：免疫法）和日本ＴＯＳＯＨ公司的离子交换高效液相色谱法（简称：高效液相法或ＨＰＬＣ法）检测ＨｂＡ１ｃ并进行比对。方法如下，每天选取８份临床样本，分别的酶法（简称：酶法）ＨｂＡ１ｃ试剂并同时分别用西门子公司ＤＣ

—１３３８—

－１０５％内，所以该方法的回收率较好。

２．４　酶法ＨｂＡ１ｃ的干扰实验结果　较高浓度的维生素Ｃ、溶血素、胆红素和乳糜对ＨｂＡ１ｃ测定值的干扰率均小于５％，即维生素Ｃ浓度＜５００ｍｇ／Ｌ、溶血素＜５０００ｍｇ／Ｌ、胆红素枙４００ｍｇ／Ｌ和乳糜枙２．０％对ＨｂＡ１ｃ测定值均无明显干扰。２．５　酶法ＨｂＡ１ｃ试剂与免疫法、ＨＰＬＣ法相关性及偏倚分析　相关性检测结果显示酶法ＨｂＡ１ｃ试剂盒的测定值与免疫法、ＨＰＬＣ法的测定值回归方程分别为：Ｙ＝１．０４１７Ｘ－０．７１８７和Ｙ＝０．９８８１Ｘ－０．０９４４，相关系数均为ｒ＝０．９９，Ｐ＜０．０５呈显著相关。相关系数均大于０．９７５，说明数据分布合理，回归方程中的斜率和截距可靠。卫生部临检中心公布的ＨｂＡ１ｃ室间质量评估允许误差为±２０％，允许偏倚根据公式：（Ｘｃ×允许误差）／２计算，Ｘｃ为ＨｂＡ１ｃ检测试验的医学决定水平，因

酶特异酶解Ｈｂ产生果糖基氨基酸；（２）应用了果糖基氨基酸氧化酶，在特定的蛋白酶体系与果糖基氨基酸反应；（３）在溶血体系中应用了Ｈ２Ｏ２测定的灵敏性，由于过氧化氢酶可以分解色素元引起负反应，所以可用过氧化物酶代替。此方法反应灵敏特异可使用全自动生化仪检测，不需专用昂贵的仪器。与常规ＨＰＬＣ法和免疫法有很好的相关性。酶法ＨｂＡ１ｃ试剂说明书提供高线性可达１６％，而实验中的ＨｂＡ１ｃ高浓度样本只达１２．９％，可以满足临床。酶法有较高的精密度，本文中不精密度测定ＨｂＡ１ｃ的低、中、高值批内及批间ＣＶ在０畅８９％－１．４３％之间，总ＣＶ在１．７７％－２．１６％范围；酶法的回收率较高，ＨｂＡ１ｃ低、高值校准物回收率分别为９９％和１０２．１％。酶ｂｅｔｅｓＳｏｃｉｅｔｙ，ＪＤＳ）／日本临床化学学会（ＪａｐａｎｅｓｅＳｏｃｉｅｔｙｏｆＣｌｉｎｉ－法ＨｂＡ１ｃ中的校准品通过了日本糖尿病学会（ＪａｐａｎｅｓｅＤｉａ－

ＪＳＣＣ）的认证，ＪＤＳ／ＪＳＣＣ是公认的ＨｂＡ１ｃ方法学此，ＨｂＡ１ｃ检测的允许偏倚为（６畅２％×±２０％）／２＝±０．６２％，ｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，

ＨＰＬＣ法预期偏倚计算公式：ａ＋（ｂ－１）Ｘｃ。所以根据回归分析，酶法研究权威机构之一。酶法ＨｂＡ１ｃ试剂与免疫比浊法、ＨｂＡ１ｃ试剂的测定结果与免疫法的回归方程为Ｙ＝１．０４１７Ｘ－０．７１８７，其预期偏倚绝对值为０．４６％，小于ＨｂＡ１ｃ检测的允

相关性及偏倚试验表明，两组ｒ＝０．９９说明相比较的数据合理有效，两组Ｐ＜０．０５表明数据呈显著相关。卫生部临检中心公布的ＨｂＡ１ｃ室间质量评估允许误差为±２０％。需要说明的是，这样的判断只是从引入系统误差大小上考虑，没有将标本检测的不精密度的随机误差考虑在内。因此，应在估计的总误差都能小于允许误差，才能真正说明新方法是否可以用于临床。较简单的方法是将卫生部临检中心公布的ＨｂＡ１ｃ室间质量评估允许误差的１／２作为方法比较结果系统误差的允许限值，实验表明酶法与其他两方法的偏倚均小于规定的允许限值。

总之，经对日本积水医疗株式会社的酶法ＨｂＡ１ｃ试剂评价，其准确度和精密度较高，与现在实验室常用的ＨＰＬＣ法和免疫法相比较有较好的相关性，具有操作简单、快速并可应用

许偏倚０．６２％；酶法ＨｂＡ１ｃ试剂与ＨＰＬＣ法的回归方程为Ｙ＝０．９８８１Ｘ－０．０９４４，预期偏倚绝对值为０．１６８％，也小于３　讨论

ＨｂＡ１ｃ检测的允许偏倚范围。

糖化血红蛋白（ｇｌｙｃａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ，ＧＨｂ）是Ｈｂ与葡萄糖的结合产物，人类Ｈｂ是由２对（４条）Ｈｂ单体聚合而成，成人２α，２γ）组成

［７］

Ｈｂ由ＨｂＡ（９７．０％；２α，２β）ＨｂＡ２（２．５％；２α，２δ）和ＨｂＦ（０．５％；

。ＧＨｂ的主要成分ＨｂＡ１ｃ是在组织中由葡萄糖

的游离醛与ＨｂＡ的β链Ｎ基末端缬氨酸的氨基经非酶促反应，首先形成不稳定的Ｓｃｈｉｆｆ碱（醛亚胺），然后经Ａｍａｄｏｒｉ重排，形成稳定的酮胺化合物ＨｂＡ１ｃ，此过程为非酶促反应其速度非常缓慢，一旦形成不再解离，这种反应也称糖基化，其浓度主要取决于血糖浓度及与Ｈｂ的接触时间，反映最近１～２ｂｅｔｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ＡＤＡ）作出结论报告：长期患糖尿病患者常伴年ＡＤＡ还规定糖尿病患者应定期检测ＨｂＡ１ｃ浓度，并将其作为监测糖尿病患者血糖控制的“金标准”

［８］

于全自动生化仪等特点，是临床较为理想的检测ＨｂＡ１ｃ方法。作者简介：李义龙，男，５２岁，副主任技师，硕士。研究方向：临床实验及方法学研究。参考文献：

［１］ＧｏｏｄａｌｌＩ，ＧｏｌｍａｎＰＧ，ＳｃｈｎｅｉｄｅｒＨＧ，ｅｔａｌ．Ｄｅｓｉｒａｂｌｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｓｔａｎ－ｄａｒｄｓｆｏｒＨｂＡ１ｃａｎａｌｙｓｉｓｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ［２］ＳａｋｕｒａｂａｙａｓｈｉＩ，ＷａｔａｎｏＴ，ＹｏｎｅｈａｒａＳ，ｅｔａｌ．Ｎｅｗｅｎｚｙｍａｔｉｃａｓｓａｙｆｏｒｇｌｙ－［３］ＮＣＣＬＳ．ＥＰ５－Ａ２：Ｅｖａｌｕｔｉｏｎｏｆｐｒｅｃｉｓｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｅａ－ｓｕｒｅｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓ；ａｐｐｒｏｖｅｄｇｕｉｄｅｌｉｎｅ－ｓｅｃｏｎｄｅｄｉｔｉｏｎ［Ｍ］．ＷａｙｎｅＰＡ．２００４．

［４］ＮＣＣＬＳ．．ＥＰ６－Ａ：Ｅｖａｌｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌｉｎｅａｒｉｔｙｏｆｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ［５］ＮＣＣＬＳ．ＥＰ７－Ａ２：Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔｉｎｇｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；ａｐｐｒｏｖｅｄ［６］ＮＣＣＬＳ．ＥＰ９－Ａ２：Ｍｅｔｈｏｄｃｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎｄｂｉａｓｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｕｓｉｎｇｐａｔｉｅｎｔｓａｍ－［７］陈灏珠．实用内科学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２０００．ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ［Ｊ］．ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ，２００３，２６：５３３．

ｐｌｅｓ；ａｐｐｒｏｖｅｄｇｕｉｄｅｌｉｎｅ－ｓｅｃｏｎｄｅｄｉｔｉｏｎ［Ｍ］．ＷａｙｎｅＰＡ．２００２．ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ－ｓｅｃｏｎｄｅｄｉｔｉｏｎ［Ｍ］．ＷａｙｎｅＰＡ．２００５．

ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ：Ａｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈ；Ａｐｐｒｏｖｅｄｇｕｉｄｅｌｉｎｅ．ＷａｙｎｅＰＡ．２００３．ｃｏｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ［Ｊ］．ＣｌｉｎＣｈｅｍ，２００３，４９：２６９．ＣｈｅｍＬａｂＭｅｄ，２００７，４５：１０８３．

月的平均血糖水平。１９９３年美国糖尿病协会（ＡｍｅｒｉｃａｎＤｉａ－微血管、大血管（心脑血管、肾、视网膜及神经等）病变。２００２

。

常规的离子交换ＨＰＬＣ方法分离ＧＨｂ可以达到临床需要的稳定性和精密度，故美国国家糖化血红蛋白标准化计划将其作为参考方法，现有许多厂商生产出相应的仪器，如日本此仪器精密度极高批内批间不精密度ＣＶ＜１％，曾应用于美国糖尿病控制与并发症的课题研究，但需成本较高的特殊仪器。在一般情况下免疫比浊法测定ＨｂＡ１ｃ的准确性和精密度也较高，目前免疫化学实验不仅检测ＨｂＡ１ｃ，也同时检测检测结果偏低，这与抗体浓度达不到相应高度有关，需要稀释；变异的血红蛋白也可影响测定结果。日本积水医疗株式会社最新推出的酶法检测ＨｂＡ１ｃ方法，此技术的应用对ＧＨｂ的测定是个突破，表现在３个方面：（１）发展了特异蛋白内切ＨｂＡ２ｃ，因ＨｂＡ２ｃ糖化δ链的表位是相同的；另外高浓度样本ＴＯＳＯＨ公司的离子交换高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定ＨｂＡ１ｃ，

［８］ＡｍｅｒｉｃａｎＤｉａｂｅｔｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｓｔａｎｄａｒｄｓｏｆｍｅｄｉｃａｌｃａｒｅｆｏｒｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈ

（收稿日期：２００９－０９－１０）

酶法糖化血红蛋白试剂盒方法学比对评价

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

李义龙， 单战海， 韩冰， 韩靖云， 王萌卫生部北京医院,检验科,北京,100730中国实验诊断学

CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS2010,14(8)

参考文献(8条)

1. NCCLS EP5-A2:Evalution of precision performance of quantitative measurement methods; approved guideline-second edition 2004

2. Sakurabayashi I;Watano T;Yonehara S New enzymatic assay for glycohemoglobin[外文期刊] 2003(2)

3. Goodall I;Golman PG;Schneider HG Desirable performance standards for HbA1c analysis precision,accuracy andstandardization [外文期刊] 2007

4. American Diabetes Association Standards of medical care for patients with diabetes mellitus 20035. 陈灏珠 实用内科学 2000

6. NCCLS EP9-A2:Method comparison and bias estimation using patient samples;approved guideline-second edition 2002

7. NCCLS EP7-A2:Interference testing in clinical chemistry; approved guideline-second edition 20058. NCCLS EP6-A:Evalution of the linearity of quantitative measurement procedures:A statisticalapproach;Approved guideline 2003

本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgsyzdx201008081.aspx