柳树叶提取物诱导肝癌细胞株hep-G2凋亡的实验研究
柳树叶提取物诱导肝癌细胞株ｈｅｐ－Ｇ2凋亡的实验研究 摘要 目的：研究柳树叶水提物抗肿瘤作用，为最终提取一种有效抗肿瘤药物及临床前实验提供依据。方法：柳树叶水提物制备药物血清作用于培养的肝癌细胞株hep-G2，检测其凋亡。采用端粒重复序列扩增（TRAP）法结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测端粒酶活性。结果：柳树叶水提物制备药物血清对靶细胞有明显的抑制生长现象。孵育一段时间后，能使肝癌细胞发生凋亡，并呈现对浓度的依懒性和伴随端粒酶活性下降。结论：柳树叶提取物能诱导肝癌细胞株hep-G2凋亡。
关键词 柳树叶提取物 肝癌细胞株hep-G2 肿瘤细胞凋亡 实验研究
柳树叶中含有挥发油和大量糖苷类化合物及酚类化合物，其水提浸膏早已被证实具有消炎止痛、活血化瘀的作用[1]，常用于外用药的组方中，用于治疗跌打损伤、腰肌劳损等病症，近年来还用于治疗癌性疼痛。国外有研究表明柳枝水萃取物能够显著抑制肿瘤细胞生长[2]，但机理尚不明确。本实验研究以肝癌细胞株hep-G2作为靶细胞，探讨柳树叶水提物诱导其凋亡的可行性。用柳树叶水提物对SD大鼠灌胃，制备药物血清，将药物血清加入体外培养液中进行肝癌细胞株hep-G2培养。观察药物血清对肿瘤细胞凋亡和细胞端粒酶活性的影响。
1 材料与方法
1．1 药物血清的制备：分述如下。
1．1．1 实验材料：柳树叶水提物、SD大鼠、注射器、灌胃针、解剖剪、解剖镊、无菌试管、微孔滤膜、吸管、橡皮头、台式低速离心机、冰箱、真空干燥灭菌柜。
1．1．2 实验步骤：①柳树叶水提物分高浓度(15mg/kg,即每千克SD大鼠灌15mg柳树叶水提物)、中浓度（10mg/kg）、低浓度（5mg/kg）对SD大鼠进行灌胃。对照组用生理盐水灌胃，每组6只SD大鼠。②3周后于无菌条件下分别打开灌胃过的SD大鼠腹腔，由下腔静脉抽血，同组大鼠血装于事先编号的同一无菌试管内，混匀。血液在室温下放置3h，使血液凝固，然后移至4℃冰箱中过夜，使血清充分析出。③第2天将各试管血清在4℃，4000r/min条件下离心20min,使血清析在上层，吸取另装，然后用0．22um的微孔滤膜过滤除菌，再放于真空干燥灭菌柜里53℃灭火30min后，保存于-20℃冰箱待用。