兔抗绵羊红细胞溶血素
兔抗绵羊红细胞溶血素在补体实验中的应用
产品名称：兔抗绵羊红细胞溶血素
规格：0.5ml*10支/盒
免疫动物：家兔
性状：冻干粉
储存：4～-20℃
原免疫血清效价1：4000
用途:仅供科研
实验原理
利用绵羊细胞与相应抗体（溶血素）结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和溶血素量一定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血（CH50）时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为最敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的最小补体量为一个CH50U ，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50U/ml表示。
本试验主要反映补体经典活化途径的溶血功能，其结果与补体C1～C9各组成分的量及活性均有关。
1． 试剂及配制
(1)缓冲生理盐水：
① 贮存液：
● Na2HPO4·12H2O 2.85g
● KH2PO4 0.27g（加蒸馏水至100毫升，4℃保存）
● NaCl 17.00g
② 应用液（缓冲液）：5毫升贮存液加95毫升蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1毫升。当日
配制。12小时内使用。
（2）2%绵羊红细胞（From ：南京森贝伽生物公司）：无菌采取绵羊血液，于等量Alsever 液中可保存3周。用前以缓冲液洗3次，并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。
(3)冻干绵羊红细胞溶血素（From ：南京森贝伽生物公司）（规格：0.5ml/瓶，0.5ml 蒸馏
水复溶）：将本品（效价1：4000），用缓冲液作1：2000倍稀释（即0.5ml 溶血素加999.5毫升缓冲液）。
(4)待测血清：新鲜血液室温放置30分钟，再4℃放置60分钟，使血块收缩。4℃离心（3000r/min）10分钟，取上清，-20℃保存。
2. 试管法操作步骤（改良Mayer 法）
（1）致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（1：2000），混匀，置37℃水浴30分钟。
（2）稀释血清：待测血清0.2ml ，加缓冲液3.8ml ，稀释度为1：20。
（3）配制溶血标准管：2%绵羊红细胞2ml 加8ml 蒸馏水，混匀，即为全溶血管。取全溶血管液2ml 加缓冲液2ml ，即为50%溶血管。
（4）按表所示，依次加各成分于试管中，混匀，置37℃水浴30分钟。第10管为非溶血对照。
补体CH50测定试管法 试 管 号
成 分
1
1：20待测血清
缓冲液(ml)
致敏红细胞（ml ） 2 3 4 5 6 7 8 9 10 - 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 1.40 1.35 1.30 1.25 1.20 1.15 1.10 1.05 1.00 1.50 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
（5）结果测定：取出试管，2000r/min离心10分钟，对照管应不溶血。肉眼比色，选与50%溶血标准管相近二管，再用分光光度计测（波长542nm 、0.5cm 比色杯）OD 值，确定与标准管最接近者为终点管，然后按下公式计算CH50值：血清补体CH50（U/ml）=（1/血清用量）×稀释度。
如第5管为终点管，测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。