氮标准曲线的制作
氮标准曲线的制作
一、实验目的
1、掌握氮标准曲线的制作方法。 2、以氮的标准曲线为例,了解标准曲线制作的一般步骤。
3、学习分光光度计的使用方法。 二、实验原理
根据朗伯(Lambert)-比尔(Beer)定律: A=abc 。A为吸光度,b为溶液层厚度(cm),c为溶液的浓度, a为吸光系数。其中吸光系数与溶液的本性、温度以及波长等因素有关。溶液中其他组分(如溶剂等)对光的吸收可用空白液扣除。由上式可知,当固定溶液层厚度和吸光系数时,吸光度A与溶液的浓度成线性关系。
在最大吸收波长下 ,测定一系列已知浓度c溶液的吸光度A,作出A~c工作曲线,在分析未知溶液时,根据测量的吸光度A,查工作曲线即可确定出相应的浓度。这便是分光光度法测量浓度的基本原理。
三、实验用品
1、苯酚钠溶液(1.35mol/L):62.5克苯酚溶于少量乙醇,加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮,用乙醇稀释至100毫升(A),存于冰箱中;27克NaOH溶于100毫升水(B)。将AB溶液保存在冰箱中。使用前将2溶液各20毫升混合,用蒸馏水稀释至100毫升。
2、次氯酸钠溶液:用水稀释试剂,至活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定。
3、氮的标准溶液:精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000ml,得到1ml含有0.1mg氮的标准液
四、实验步骤 1、数据测定 吸取配置好的氮溶液10ml,定容至100ml,即稀释了10倍,吸取1,3,5,7,9,11,13ml移至50ml容量瓶,加水至20ml,再加入4ml苯酚钠,仔细混合,加入3ml次氯酸钠,边加边充分摇荡,放置20分钟,用水稀释至刻度。1h内将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定,以标准溶液浓度为横坐
标,以光密度值为纵坐标绘制曲线图。 2、标准曲线的绘制 (1)将数据整理好输入Excel,并选取完成的数据区,并点击图表向导。
(2)点击图表向导后会运行图表向导,先在图表类型中选“XY散点图”,并选了图表类型的“散点图”。如是输入是如本例横向列表的就不用更改,如果是纵向列表就改选“列”。如果发现图不理想,就要仔细察看是否数据区选择有问题,如果有误,可以点击“系列”来更改。如果是X值错了就点击它文本框右边的小图标,在表上选取正确的数据区域。然后点击“下一步”出现图表选项界面,调整选项,以满足自己想要的效果。点击“下一步”,现在一张带标准值的完整散点图就已经完成。
(3)点击图上的标准值点,然后按右键,点击“添加趋势线”。本例是线性关系,在类型中选“线性”,点击“确定”,标准曲线就回归并画好了。
(4)点击趋势线(也就是我们说的标准曲线)然后按右键,选趋势线格式,在显示公式和显示R平方值(直线相关系数)前点一下,勾上。再点确定。
氮的标准曲线为:
六、注意事项
1、分光光度计需要预热20min后使用,预热时应把盖子打开,防止对光源造成损伤。
2、苯酚钠要现配现用。储存时分A、B液储存。 3、为保证曲线的准确性,可重复三次测定。