临床生物化学和生物化学检验
临床生物化学和生物化学检验
实验操作技能项目与考核标准
一、刻度吸量管的使用技能
1. 选择：使用前先根据需要选择适当的吸量管，刻度吸量管的总容量最好等于或稍大于最大取液量。临用前要看清总容量和刻度。
2. 执管：用拇指和中指（辅以无名指），拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。刻度数字要朝向自己。
3. 取液：另一只手捏压橡皮球，将吸量管插入液体内（不得悬空，以免液体吸入球内），用橡皮球将液体吸至最高刻度上端1~2cm处，然后迅速用食指按紧吸量管上口，以免液体从吸量管下口流出。
4. 调准刻度：将吸量管提出液面，吸粘性较大的液体时，先用滤纸擦干管尖外壁；然后用食指控制液体使之缓慢下降，当至所需刻度时，立即按紧吸量管上口（此时液体凹面、视线和刻度应在同一水平面上）。
5. 放液：放松食指，让液体自然流入容器内，放液时，管尖最好接触容器内壁，但不要插入容器内原有的液体中，以免污染吸量管和试剂。
6. 洗涤：吸取血液、血清等粘稠液体及尿液标本的吸量管，使用后要及时用自来水冲洗干净；吸一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，实验完毕后再冲洗。冲洗干净后，晾干，再浸泡于铬酸洗液中，数小时后取出，再用流水冲净，最后用蒸馏水冲洗，晾干备用。
二、溶液的混匀技术
混匀的方式大致有以下几种，可随使用的器皿和液体容量而选用。
1. 旋转混匀法 用手持容器，使溶液作离心旋转，适用于未盛满液体的试管或小口器皿，如锥形瓶。旋转试管时最好用手腕旋转。
2. 指弹混匀法 左手持试管上端，用右手指轻轻弹动试管下部，使管内溶液作旋涡运动。
3. 倒转混匀法 适用于有塞量筒和容量瓶、试管内容物的混匀。一般试管内容物的混匀可用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒转混匀。
4. 吸管混匀法 用吸量管将溶液反复吸放数次，使溶液充分混匀。
5. 玻棒搅动法 适用于烧杯内容物的混匀，如固体试剂的溶解和混匀。
6. 甩动混匀法 右手持试管上部，轻轻甩动振摇，即可混匀。
7. 电磁搅拌混匀法 在电磁搅拌机上放置烧杯，在烧杯内放入封闭于玻璃或塑料管中的小铁棒，利用磁力使小铁棒旋转以达到混匀杯中液体的目的，适用于酸碱自动滴定，pH 梯度滴定等。
8. 振荡器混匀法 利用振荡器使容器中的内容物振荡，达到混匀的目的。
9. 注意：(1) 混匀时须防止容器内液体溅出或被污染。(2) 严禁用手指直接堵塞试管口或锥形瓶口振摇。
三、离心机的使用方法
使用离心机前，应检查离心机转动状态是否平稳，以确定离心机的性能；检查套管与离心管大小是否相配，套管是否铺好软垫（用棉药或橡皮），检查套管底部应无碎玻璃片或漏缝。
检查合格后，将一对离心管（待分离管与非分离空白管）放入一对套管中，然后连套管一起分置粗天平两侧，用滴管向非分离空白管一侧加水，直至天平两侧彼此相等为止。将各对平衡的套管连同内容物放置于离心机内，两个等重的离心管必须放于对称位置。放妥后，接通电源开关，逐步扭动转速旋钮，缓慢增加离心机转速，直到所需的转速。达规定时间后，将转速旋钮逐步调回零，待离心机停稳后，取出离心管。
四、721型分光光度计
使用方法如下：
1. 接通电源（指示灯亮），预热15～20分钟。
2. 灵敏度选择钮放在“1”档（如调不到“OD=0” 时选用较高的档次）。
3. 转动波长选择钮，选用所需的波长。
4. 揭开比色杯暗箱盖，转动“0电位器”使电表指针对准T=0处。
5. 将比色杯放入比色杯架，使空白管对向光路，盖好比色杯暗箱盖。转动“100电位器”，调准电表指针使之指向OD=0（T=100）处。
6. 拉动比色杯座的拉杆，使测定杯进入光路，迅速从电表上读出光密度值，并记录。测读过程中，随机拉回拉杆到原位，使空白杯进入光路，随时调整OD=0。
7. 比色完毕后，关上电源开关，取出比色杯，将比色杯暗箱盖好，清洗比色杯并晾干。
五、恒温水浴箱的使用
1、 加水到适当高度。
2、 接通电源，打开开关。
3、 调节温度，使之恒温。
4、 如长时间不用，应关上开关拔掉电源。
六、氨基酸的薄层层析技术
操作步骤：
（一）薄板的制备
1．称取硅胶G 0.5g放入研钵中，加1.5ml0.2%羧甲基纤维素钠，研磨成均匀的稀糊状。
2．将上述糊状物倾倒在4×10cm 的玻璃片（图11）上，使之均匀地布满于玻片，将玻片轻轻地晃动，使硅胶G 均匀分布，表面平坦，光滑，无水层及气泡，然后水平放置在空气中使其自然干燥。
3. 薄板上硅胶干后，放入105℃的恒温干燥箱内活化，半小时后取出，晾凉备用。
（二）点样
1．在距离薄板一端约2cm 处用细线向下压硅胶，压成一条点样线。
2．用直径约1mm 的玻璃毛细管分别吸取甘氨酸、精氨酸、酪氨酸及混合氨基酸溶液，在点样线上点样，每隔0.8cm 处点一种样品（约5ul ），点样直径约2~3mm。待点样处干后，再将样品在原点样处重复点一次。
（三）展层
1．硅胶板的点样端向下，倾斜地放入层析缸内，使其与缸底平面呈约30。角。
2．用长颈漏斗加入展开剂使展开剂离点样处1~2cm处为止。
3．盖上层析缸盖进行层析。
4．当展开剂前沿到达玻璃板全长的3/4处停止层析，取出玻片，记下展开剂前沿位置，将硅胶板置干燥箱烘干。
（四）显色
1．用0.5%茚三酮丙酮溶液均匀地喷洒于硅胶板上。
2．将玻板置105℃干燥箱内烘干，约2分钟左右即可显出粉红色斑点。
（五）测量
1．分别测量甘氨酸、精氨酸、酪氨酸的R f 值，作为标准。
2．再测出混合液中分离出的各种氨基酸的R f 值与标准值对照，以确定为何种氨基酸。
（六）结果计算
计算R f 值：
氨基酸移动的距离（cm ） 样品至色斑中心的距离（cm ） R f 值样品至溶剂前沿的距离（cm ） 溶剂移动的距离（cm ）
七、血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
操作步骤
1．准备与点样： 取8cm ⨯2cm 醋酸纤维素薄膜, 将其浸泡在pH 8.6缓冲溶液中，待薄膜完全浸透后，取出轻轻夹于滤纸中, 吸去多余的液体。然后用点样器蘸新鲜血清，在无光泽面距一端约2cm 处点样。待血清全部渗入膜内, 移开点样器。
2．电泳：取已点样的薄膜，点样面向下两端紧贴在四层滤纸桥上，注意点样端放阴极。盖好电泳槽盖，平衡10分钟，打开电源开关，调节电压至110～130V ， 电流0.4～0.6mA/cm， 通电45～60分钟。
3．染色与漂洗：电泳结束后，关闭电源。将薄膜从电泳槽中取出, 浸入氨基黑10B 染色液中5～10分钟。待充分染色后，取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗3～4遍, 直至背景无色为止。用滤纸吸干薄膜。
4．定量：取试管6支，编号，将电泳薄膜按蛋白质区带剪开，分别置于试管中，另于薄膜的空白部分剪一平均大小的薄膜条放入空白管中。各管中加入0.4mol/L NaOH 5ml，反复振摇，使其颜色充分洗脱。用721分光光度计进行比色，波长650nm ，以空白管调零，读取各管的吸光度。 各种蛋白质占总蛋白百分含量的计算：
吸光度总和(T)=ODA +ODα1+ODα2+ODβ+ODγ
清蛋白(A)% = ODA /T⨯100
α1-球蛋白% = ODα1/T⨯100
α2-球蛋白% = ODα2/T⨯100
β-球蛋白% = ODβ/T⨯100
γ-球蛋白% = ODγ/T⨯100
5．结果识别与计算
— +
临床生物化学实验操作技能项目与考核标准
一、刻度吸量管的使用技能
1. 选择：使用前先根据需要选择适当的吸量管，刻度吸量管的总容量最好等于或稍大于最大取液量。临用前要看清总容量和刻度。
2. 执管：用拇指和中指（辅以无名指），拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。刻度数字要朝向自己。
3. 取液：另一只手捏压橡皮球，将吸量管插入液体内（不得悬空，以免液体吸入球内），用橡皮球将液体吸至最高刻度上端1~2cm处，然后迅速用食指按紧吸量管上口，以免液体从吸量管下口流出。
4. 调准刻度：将吸量管提出液面，吸粘性较大的液体时，先用滤纸擦干管尖外壁；然后用食指控制液体使之缓慢下降，当至所需刻度时，立即按紧吸量管上口（此时液体凹面、视线和刻度应在同一水平面上）。
5. 放液：放松食指，让液体自然流入容器内，放液时，管尖最好接触容器内壁，但不要插入容器内原有的液体中，以免污染吸量管和试剂。
6. 洗涤：吸取血液、血清等粘稠液体及尿液标本的吸量管，使用后要及时用自来水冲洗干净；吸一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，实验完毕后再冲洗。冲洗干净后，晾干，再浸泡于铬酸洗液中，数小时后取出，再用流水冲净，最后用蒸馏水冲洗，晾干备用。
二、溶液的混匀技术
混匀的方式大致有以下几种，可随使用的器皿和液体容量而选用。
1. 旋转混匀法 用手持容器，使溶液作离心旋转，适用于未盛满液体的试管或小口器皿，如锥形瓶。旋转试管时最好用手腕旋转。
2. 指弹混匀法 左手持试管上端，用右手指轻轻弹动试管下部，使管内溶液作旋涡运动。
3. 倒转混匀法 适用于有塞量筒和容量瓶、试管内容物的混匀。一般试管内容物的混匀可用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒转混匀。
4. 吸管混匀法 用吸量管将溶液反复吸放数次，使溶液充分混匀。
5. 玻棒搅动法 适用于烧杯内容物的混匀，如固体试剂的溶解和混匀。
6. 甩动混匀法 右手持试管上部，轻轻甩动振摇，即可混匀。
7. 电磁搅拌混匀法 在电磁搅拌机上放置烧杯，在烧杯内放入封闭于玻璃或塑料管中的小
铁棒，利用磁力使小铁棒旋转以达到混匀杯中液体的目的，适用于酸碱自动滴定，pH 梯度滴定等。
8. 振荡器混匀法 利用振荡器使容器中的内容物振荡，达到混匀的目的。
9. 注意：(1) 混匀时须防止容器内液体溅出或被污染。(2) 严禁用手指直接堵塞试管口或锥形瓶口振摇。
三、离心机的使用方法
使用离心机前，应检查离心机转动状态是否平稳，以确定离心机的性能；检查套管与离心管大小是否相配，套管是否铺好软垫（用棉药或橡皮），检查套管底部应无碎玻璃片或漏缝。
检查合格后，将一对离心管（待分离管与非分离空白管）放入一对套管中，然后连套管一起分置粗天平两侧，用滴管向非分离空白管一侧加水，直至天平两侧彼此相等为止。将各对平衡的套管连同内容物放置于离心机内，两个等重的离心管必须放于对称位置。放妥后，接通电源开关，逐步扭动转速旋钮，缓慢增加离心机转速，直到所需的转速。达规定时间后，将转速旋钮逐步调回零，待离心机停稳后，取出离心管。
四、721型分光光度计
使用方法如下：
1. 接通电源（指示灯亮），预热15～20分钟。
2. 灵敏度选择钮放在“1”档（如调不到“OD=0” 时选用较高的档次）。
3. 转动波长选择钮，选用所需的波长。
4. 揭开比色杯暗箱盖，转动“0电位器”使电表指针对准T=0处。
5. 将比色杯放入比色杯架，使空白管对向光路，盖好比色杯暗箱盖。转动“100电位器”，调准电表指针使之指向OD=0（T=100）处。
6. 拉动比色杯座的拉杆，使测定杯进入光路，迅速从电表上读出光密度值，并记录。测读过程中，随机拉回拉杆到原位，使空白杯进入光路，随时调整OD=0。
7. 比色完毕后，关上电源开关，取出比色杯，将比色杯暗箱盖好，清洗比色杯并晾干。
五、722型分光光度计
使用方法如下：
1. 接通电源（指示灯亮），预热15～20分钟。
2. 灵敏度选择钮放在“1”档（如调不到“OD=0” 时选用较高的档次）。
3. 转动波长选择钮，选用所需的波长；调节“TAC 旋钮”至“T ”刻度。
4. 揭开比色杯暗箱盖，转动“0电位器”使显示器显示为“0”。
5. 将比色杯放入比色杯架，使空白管对向光路，盖好比色杯暗箱盖。转动“100电位器”，使显示器显示为“100”。
6. 调节“TAC 旋钮”至“A ”刻度，观察显示器显示是否为“0”；若不为“0”，调节“Abs0旋钮”使显示器显示为“0”。
7. 拉动比色杯座的拉杆，使测定杯进入光路，迅速从电表上读出光密度值，并记录。测读过程中，随机拉回拉杆到原位，使空白杯进入光路，随时调整OD/A=0。
8. 比色完毕后，关上电源开关，取出比色杯，将比色杯暗箱盖好，清洗比色杯并晾干。
六、恒温水浴箱的使用
5、 加水到适当高度。
6、 接通电源，打开开关。
7、 调节温度，使之恒温。
8、 如长时间不用，应关上开关拔掉电源。
七、血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
操作步骤
1．准备与点样： 取8cm 2cm 醋酸纤维素薄膜, 将其浸泡在pH 8.6缓冲溶液中，待薄膜完全浸透后，取出轻轻夹于滤纸中, 吸去多余的液体。然后用点样器蘸新鲜血清，在无光泽面距一端约2cm 处点样。待血清全部渗入膜内, 移开点样器。
2．电泳：取已点样的薄膜，点样面向下两端紧贴在四层滤纸桥上，注意点样端放阴极。盖好电泳槽盖，平衡10分钟，打开电源开关，调节电压至110～130V ， 电流0.4～0.6mA/cm， 通电45～60分钟。
3．染色与漂洗：电泳结束后，关闭电源。将薄膜从电泳槽中取出, 浸入氨基黑10B 染色液中5～10分钟。待充分染色后，取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗3～4遍, 直至背景无色为止。
用滤纸吸干薄膜。
4．定量：取试管6支，编号，将电泳薄膜按蛋白质区带剪开，分别置于试管中，另于薄膜的空白部分剪一平均大小的薄膜条放入空白管中。各管中加入0.4mol/L NaOH 5ml，反复振摇，使其颜色充分洗脱。用721分光光度计进行比色，波长650nm ，以空白管调零，读取各管的吸光度。
各种蛋白质占总蛋白百分含量的计算：
吸光度总和(T)=ODA +ODα1+ODα2+ODβ+ODγ
清蛋白(A)% = ODA /T⨯100
α1-球蛋白% = ODα1/T⨯100
α2-球蛋白% = ODα2/T⨯100
β-球蛋白% = ODβ/T⨯100
γ-球蛋白% = ODγ/T⨯100
5．结果识别与计算
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八、FP640火焰光度计操作流程
1. 接通电源，打开液化气罐；打开电源开关，泵启动开关，这时压力表显示压力逐渐上升，
最后稳定在0.15左右。
2. 进样管接水，打开进样开关，片刻后水从出样管流出。
3. 按点火开关，同时慢慢打开燃气开关，稍后火点燃，用燃气开关调节火焰大小，使火焰
呈蓝色，预热15分钟。
4. 进样管接标准应用液，用低标、高标调节K 浓度在4.0mmol/L,Na浓度在140mmol/L。（低
标用水调0，高标调标准液）。
5. 稳定后进样管接待测的稀释血清，读出K 、Na 浓度。
6. 进样管接水，清洗管道。
7. 关闭液化气罐，看到火焰熄灭，关闭燃气开关，关闭泵启动开关和电源，拔去插头。
九、IMS-972系列电解质分析仪程序图
开机系统自检系统冲洗插入活化液活化标定 自检