第9章:支原体
鸡毒支原体感染
引 言
鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG )感染常称为鸡慢性呼吸道病(CRD )和火鸡传染性窦炎。其特征是呼吸罗音、咳嗽、流鼻涕,在火鸡鸡常窦炎。临诊表现通常是渐进性的,且病程很长。气囊病是一种严重的气囊炎,这是由于MG 感染时并发某些呼吸道病毒感染所致。通常也还有埃希氏大肠杆菌感染所引起的结果(参阅滑液囊支原体一节)。
经济上的重要性和公共卫生意义
鸡的气囊炎及火鸡的气囊炎、窦炎,仍然是鸡和火鸡屠检时废弃的重要原因。大多数损失直接或间接地与有或无并发因素的鸡毒支原体的感染有关。再加上净膛鸡的降级、饲料利用率和产蛋的降低以及医疗费的增加所带来的经济损失,使得该病成为养禽业面临着的代价最高的疾病问题之一。预防和控制程序,可能包括疫苗,也另外增加成本。此病在公共卫生上没有意义。
历 史
Dodd [49]于1905年在英国首次准确描述了火鸡的这一疾病,并将该病命名为“流行性肺肠炎”。1938年Dickinson 和 Hinshaw [46]曾将此病称为火鸡的“传染性窦炎”。
Nelson [122]于 1935年描述了球杆菌的菌体与鸡的传染性鼻炎有关,随后他发现它们与慢性发作和稽留期长的鼻炎有关系,并最终让这种球杆菌形的菌体在鸡胚、组织培养物及无细胞的培养基中生长。
1943年,Delaplane 和Stuart [45]以鸡胚培养出一种因子,它是从患慢性呼吸道疾病的鸡中分离出来的,后来又从患窦炎的火鸡中分离到。50年代早期, Markham 和Wong [110]及Van Roekel和 Olesiuk [158]报告了对鸡和火鸡的这种微生物的培养获得了成功,并注意到它们的相似性,进一步的研究认为它们是胸膜肺炎群(支原体)的成员。
发 生 和 分 布
在美国的所有地区,该病已成为鸡群和火鸡群的一个重要问题。它广泛分布于全世界。
过去的25年间,由于在养禽业上广泛推行的控制规划,使发病率明显下降。但是,在许多商品蛋生产单位,MG 感染的持续存在仍是个主要问题,这在随后的预防和控制部分将进一步讨论。有证据表明MG 也存在于小型庭院鸡群[113]。
病 原 学
分类
MG 是支原体目、支原体科、支原体属的一个致病种[95]。
形态及染色
该种微生物用姬姆萨染色效果良好,但革兰氏染色为弱阴性。它通常呈球形,大小约0.25~0.5um。MG 的细胞呈丝状或烧瓶样形态,这种形态出现得比分裂早[118],其原因主要是由于有组织良好的末端细胞器或气兆存在[109]。理论上讲,宋的结构控制着运动性或宿主—病原体间的相互作用以及最终的致病性[31,97]。细胞的二次分裂与DNA 复制是同步的[129]。Tajima 等[146]根据电镜(EM )研究结果描述了与鸡气管上皮细胞接触的、与MG 细胞相关的囊状物质。有关MG 细胞与气管上皮相互作用的进一步报告将在病理组织学部分予以讨论。
生长需要
MG 要求一个相当复杂的培养基,其中通常加有10%~15%的灭活的猪、禽或马血清。几种类型的液体或固体培养基可供禽源支原体生长,可依据不同用途最终选择而定。培养MG 和生产抗原的培养基和技术已做过叙述[67,91,106]。常常在PH7.8左右的培养基中于37℃培养生长最适宜。菌落在含有通常的支原体生长成分的琼脂培养基上形成,但需要在一个非常湿的环境中延长培养时间(2~5天)。
Frey 等[62]研制了一种培养基(参阅滑液囊支原体一节),它含所有必需成分,其中有酵母自溶物和葡萄糖。当以10%~15%猪血清制备时,
它是对绝大多数支原体的培养既方便又非常有效的培养基。在用于大量培养的试管中加入酚红和葡萄糖,在用于大量培养的试管中加入酚红和葡萄糖,能观察到支原体的生长与否,如同加入0.0025%的氯化2,3,5-三苯四唑作为一种指示剂一样[173]。
MG 也可以在鸡胚中繁殖(参阅“致病力”及“致病因子的分离和鉴定”两节。
菌落形态
无论是直接接种还是用肉汤或琼脂培养物传代接种,MG 都能在富含血清的琼脂培养基上生长。一般很难获得从临订病料直接生长的菌落。接种了的琼脂平皿必须在一个非常湿润的环境中于37℃培养3~5天。菌落的生长与否最好是在具有间接光的解剖显微镜下观察。特征性的菌落为细小、光滑、圆形、透明的质团,具有一个致密的、突起的中心点(图9.1)。它们的直径很少大于0.2~0.3mm,而且由于邻近的菌落容易融合,特征性菌落常沿划线处边嵴出现。许多禽源支原体分离物菌落的某些差异已被注意到[47,13],但不能根据它的菌落特征来判定该菌的种类。
生化特性
许多学者曾报道过MG 的生化性质及有关的生物学特性。它可发酵葡萄糖和麦芽糖,产酸不产气。不发酵乳糖、卫矛醇或水杨甙,很少发酵蔗糖,对半乳糖、果糖、蕈糖及甘露醇的发酵结果不定。不水解精氨酸、碗酸酶活性阴性,可还原2,3,5-三苯四唑(变红)和四唑蓝(变蓝)。MG 可使加入到琼脂培养基中的马红细胞全部溶血,并能凝集进一步讨论见“血清学”部分。
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图9.1 鸡毒支原体感染(Hofstad )在20%鸡血清琼脂平皿上生长的MG 菌落,×40。
对理化因素的抵抗力
一般认为多数常用的化学消毒剂对MG 有效。石炭酸、甲醛、β-
丙内酯和硫柳汞可将其灭活。它对于青霉素和低浓度(1:4000)醋酸铊有添加剂—加入到培养支原体的培养基中作为细菌和真菌污染的抑制剂。
该微生物在下述环境中仍能存活:20℃时于鸡粪中1~3天,棉布中20℃时3天或37℃时1天,以及在孵黄中37℃时18周或20℃时6周[36]。感染了的绒毛尿囊膜(CAM )的肉汤悬浮液,在暴露于45℃1h 后,50℃min 后或于5℃的第3周失去其感染力[74]。然而,其他学者[125]曾发现有感染力的尿囊液在温箱中4天,室温中6天,冰箱中32-60天仍有感染力。当孵蛋时加温到45.6℃,持续12-14h 作热处理后,MG 可在感染了的孵化着的鸡胚中被灭活[167]。肉汤培养物在保存于是 —30℃时,仍能存活2-4年。从在4℃保存了至少7年的冻干了肉汤培养物中,和在4℃保存了13-14年的感染了的鸡鼻甲骨中都分离出活的MG [173]。Yoder
[171]发现,1965年保存在—60℃冰箱中的MG 和其他各种血清型的大量肉汤培养物在20多年之后重新培养仍获得成功。MG 、滑液囊支原体(M.synoviae ,MS)火鸡支原体(M.meleagridis ,MM)的冻干肉汤培养物,在保存10-15年之后通常发现依然能存活。Kleven [90]研究了MG 的F 株在脱脂奶粉、磷酸盐缓冲液(PBS )、胰蛋白示磷酸肉汤和蒸馏水中,保存在4℃、22℃和37℃的稳定性,结果发现它在4℃或22℃条件下24h 均稳定,在37℃条件下,在PBS 中可保持至少24h 的稳定性。
菌株分类
MG 的不同菌株,不应与整个支原体属(Mycoplasma )中来自禽类的、其特征不同的许多血清型相混淆。MG 的某些分离株,有时在分离时被命名为菌株,而更为大家所熟知的却是它们的分离株称号。Zandr [3,57,178]的S6株是从患传染性窦炎的火鸡脑分离的早期的致病株。A5969株是由Van Roekel提供的有致病力的培养物,并由 Jungherr 等[80]予以命名。A5969株已成为各种抗原生产的标准菌株。目前广泛用于制备活疫苗的MG 的F 株[35,64,133],是来源于van der Heide [157]使用康涅狄格F 株研究获得的相对致弱株。然而,原始的F 株是由Yamamoto 和 Adler [166]作为一个典型的致病株进行描述的。Luginbuhl 等[103]在康涅狄格使用该株对幼龄肉种鸡替代群进行活毒免疫以减少MG 可能在后备种群中经蛋传播。MG 的R 株由Dale Richey于1963年在乔治亚大学禽病研究中心从一只患气囊炎的鸡分离获得。R 株已广泛应用于菌苗生产,并作为一个致病株应用于MG 的攻毒研究中[64,131,168,175]。
由于它们分离困难,其致病性、传播性和免疫原性均比田间分离株的预期值为弱,所以从鸡和火鸡分离的MG 被描述为变异株和非典型株
[15,48,107,175]。
一种被命名为4229T 株的支原体,1984年从法国的一只鸭子的鼻甲部分离得到,后来又从法国的鹅和英国的一只雉中分离到相似的菌株通过免疫荧光和生长抑制试验最初将其鉴定为MG [26]。但是随后的血清学和分子生物学证实与MG 只有部分相关性,DNA-DNA 杂交研究提示与MG 只有约40%-46%基因同源性[26]。在血清学上与MG 有交叉反应,模仿支原体(Mycoplasmaimitans )被建议定为该菌的新种[26]。
命名为6/85株[56]和ts-11 [162,163]的的MG ,最近已被应用于生产活的培养苗。
致病力
接种物 MG 分离株的相对致病力差异很大,视分离株的性质、传代方式、传代数、接种途径和剂量而定。从接种鸡胚获得的感染性尿囊液通常比经肉汤传代的支原体的传染性强。
鸡和火鸡 火鸡比鸡更为易感,接种了的火鸡可发生较严重的窦炎、气囊炎和腱鞘炎。F 株的活毒对火鸡的致病力比鸡相对强些[99。100]。经眼内、鼻内和气管接种比经静脉内和气囊内接种病变少而轻微。有时火鸡不发生窦炎,除非将培养物直接注入窦内[48]。MG 感染通常与复杂的环境因素所涉及的疾病因子有关,在“发病率和死亡率”部分将进一步讨论。
鸡胚 将肉汤培养物或含有MG 的渗出物接种于7日龄鸡胚的卵黄囊中,通常使胚胎在5-7天内死亡。在产生典型病变和死亡之前,有必要通过一次或多次卵黄传代。最典型的病变是胚的矮小化、全身性水肿、肝坏死及脾增大。在胚胎临死之前,本菌在卵黄囊、卵黄及绒毛尿囊膜(CAM )中浓度最高。研究表明,MG 株对蛋的致病力存在差异,对蛋的致病力和其他体内外致病力评价方法之间没有相关性[98]。虽然在接种后17天仍能从活鸡胚的卵黄囊膜分离到MG ,但强毒MG 所致鸡胚的死亡率可被鸡蛋中所含的母源抗体所抵制。
很少用接种鸡胚来分离禽支原体,因为现在有许多培养基可利用。
发病机理和流行病学
自然和实验宿主
MG 的自然感染发生于鸡和火鸡,然而,MG 也曾从自然感染的雉(Phasianus colchicas )咕咕鹧鸪(Alectorisgraeca )、孔雀(Pavocristatus )、北美鹑(Colinus virgininanus ) 和日本鹌鹑(Coturnix cofurnix japonica ) 中分离出来。Reece 等[130]在在澳大利亚从一只金色雉中分离到MG ,Bozeman 等[24]也从黄颈亚马逊鹦鹉中分离到此菌。据英国[78]和南斯拉夫[21]报道,从鹅分离到MG 。Davidson 等[44]关于从野生火鸡分离到MG 的报告指出,发病的火鸡 (Meleagris gallopavo) 是笼养的,而不是在其自然栖息地自由活动的。8年后对同一群进行的追踪调查也没有发现MG 存在的,说明了MG 在这种野火鸡群不是持续存在或传播的[104]。其他对野火鸡的调查也发现MG 有血清阳性群[75,105]和血清阴性群[38,63]。然而,很少从野火鸡分离到MG ,或者许多部分是由于其他支原体(Mycoplasma opp)普遍发生的原因,尤其是gallpavonis 支原体[38,63]。
有关从各种自由飞翔禽类分离支原体的情况,偶有报道,但其重要性尚未被确定。同样,试图确定它对各种飞禽的致病性也没有令人信服的证据。及为病人吸入剂疗效的动物模型,用MG 实验感染鹦鹉(Melopsittacusundulatus )可出现临床症状,支气管和气囊有病变,但无死亡率[32]。
传播
易感鸡与感染了的带菌鸡或火鸡直接接触会引起此病暴发;也可能通过污染的尘埃、司法部沫或羽毛传播。通常认为与污染了的设施发生接解而传播,但未见详细的记载。小型鸡群的水平传播分为4个阶段:
第一阶段,即潜伏阶段(12-21天),指接种鸡在第一次能检测到抗体之前的这段时间;第二阶段,此段(1-21天)是指鸡群逐步出现5%-10%感染;第三阶段,此阶段内(7-32天)鸡群中90%-95%的鸡产生抗体;
第四阶段,最后阶段(3-19天),鸡群剩余的部分也呈阳性[114]。增加群体密度会增加鸡群水平传播的发生率。鸡和火鸡的感染可以经蛋传播。MG 曾从感染鸡的输卵管及成年公鸡的精液中分离到[173]。人工感染易感鸡后,已成功地引起了经蛋传播[23,59,64,174,175]。从新鲜鸡蛋的卵黄膜培养MG 比从18日龄的鸡胚获得更多的分离物[138]。
潜伏期
早期的研究者发现,实验传播病例的潜伏期为6-12天。在人工接种的火鸡,窦炎常发生在6-10天内。在自然条件下,判定准确的感染时间是非常困难的,那么多变化着的因素似乎影响临床感染的发作和范围,所以不能指出有意义的潜伏期。许多鸡群或火鸡群都在快产蛋时发生临床感染,说明由于一系列的应激因素,促使一个低水平的内在感染(可能是经蛋传递)出现。这种明显长的潜伏期特别常见于感染鸡或火鸡,以及为了控制MG 的感染而在孵化之前还在抗生素液中浸泡过的蛋孵出来的后代。来自其他感染动物的污染可能起什么作用,不都是清楚的,除了有理由之外,很少能被证明。许多MG 的分离株,似乎代表着这类迟发的、新近出现的感染,血清学反应通常首次出现在第26周龄和第38周龄之间[101,156,170]。
症状
鸡 成年鸡群自然发病所表现的特征性的症状是气管罗音、流鼻涕和咳嗽、食俗减少、体重减轻。在产蛋鸡群,产蛋量下降,但通常会维持在一个较低的水平上[117]。不过,鸡群可以在血清学上有感染的证据,而无明显临诊症状,尤其在幼龄感染并部分恢复了的鸡群。公鸡常有明显的症状,而且在冬季比较严重。在肉鸡群,疾病暴发大多发生在4-8周龄之间,症状通常比成年鸡群中观察到的明显,在肉鸡中观察到的严重暴发,通常是由于并发症引起的(参阅“发病率和死率”一节)。在日本已有显然是MG 引进的商品蛋鸡角膜炎的病例报道,第一次出现症状的时间约在3日龄[124]。病鸡表现面部皮肤和眼睑肿胀、流泪增加、结膜静脉充血及呼吸罗音。给鸡眼结膜混合接种MG 澳大利亚田间株与传染性支气管炎病毒,鸡会患结膜炎[142]。
火鸡 流鼻液和伴有泡沫的眼分泌物,通常发生于比较典的由于窦炎所致的副鼻窦肿胀之前。严重的窦肿胀有时引起眼的部分或全部闭合(图9.2),只要鸡能看见吃食,食欲仍是接近正常的,当病情发展时,病鸡呈现消瘦。如果气管炎或气囊炎出现的话,就会有气管罗音、咳嗽和呼吸困难,据报导12-16周龄商品火鸡MG 感染脑炎形式,其表现为颈歪斜和角弓反张。在种鸡群中可能有产蛋减少或至少是产蛋率降低。
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图9.2 鸡毒支原体感染
传染性窦炎后期,火鸡眶下窦肿胀和鼻分泌物。
发病率和死亡率
鸡 感染通常危害到整个鸡群,但严重程度和病程是不同的。在一年的几个寒冷月份中,此病更剧烈,病程更长。尽管成年鸡由于产蛋量降低而有相当的损失,但青年鸡受害的程度比成年鸡更严重。
MG 被认为是慢性呼吸道病(CRD )的首要原因,其他微生物通常引起并发症。严重的气囊感染(常被称为是CRD 的并发症)或气囊病,在野外更为常见。新城疫(ND )或传染性支气管炎(IB )可以促使MG 感染的暴发。埃希氏大肠杆菌(Escherichia coli )是一个常常病发的微生物。Gross [66]及Fabricant 和 Levine [58]研究了MG 、 E .coli和 IB 病毒单独感染或联合感染对鸡的作用。当三者联合时,他们产生一种严重的气囊感染。他们进一步注意到E.coli 不易感染气囊,除非那些气囊以前被MG 单独侵入、同传染性支气管病毒(IBV )或同新城疫病毒(NDV )联合侵入过。其他几位研究者注意到,当MG 与IBV 同时存在时,疾病的严重程度和病程都有啬了[142]。
成年鸡群的死亡率是很小的,但可使生产鸡的数量减少[28]。在肉鸡,没有并发症时死亡率非常低,有并发症时可高百家30%,尤其是在寒冷的月份。生长缓慢,净膛鸡等级降低及废育等造成更进一步的损失。
火鸡 此病可感染火鸡群中的大部分火鸡,其中一部分可不表现窦炎,但呼吸道的感染形式则最为明显。未经治疗的群中感染可持续数周、数月。MG 感染火鸡的临诊症状、发病率和死亡率差异很大。最为典型的肉用火鸡暴发此病常在8-15周龄。开始,有轻度呼吸症状,持续2-7天后,发展为80%-90%的火鸡严重咳嗽。鼻窦肿胀、流鼻涕的症状在感染群中可达1%-70%。净膛火鸡废弃原因除鼻窦炎外,还与气囊炎及全身感染有关。
大体病变
大体病变主要是鼻道、副鼻道、气管、支气管及气囊的卡他性渗出液,窦炎在火鸡通常是很显著的,在鸡和其他禽类宿主中也可观察到。虽然气囊可能仅出现一种珠状的或淋巴滤泡样的外观,但常会有干酷样
渗出液,还可能观察到某种程度的肺炎。在典型的鸡气种疾病的严重病例,可见纤维素性的或纤维脓性的肝周炎和心包炎同大量的气囊炎一道发生。Demermuth 等[51]曾报道过由MG 引起的鸡和火鸡的输孵管炎。因MG 引起的患角膜结膜炎的商品蛋鸡,其面部皮下组织和眼睑水肿,偶尔可见角膜浑浊[124]。
病理组织学
Van Roekel等[151]研究了鸡和火鸡显微镜下的病理学, Hitchner [72]研究了火鸡显微镜下的病理学。他们发现感染的组织黏膜,由于单核细胞浸润和黏液腺的增殖百显著增厚(图9.3)。淋巴组织增殖的局部病灶区域在黏膜下常被发现(图9.4)。在肺部,除肺炎滤泡变化外,也曾发现肉芽肿病变。Trampel 和Fletcher [155]报道了使用光镜、扫描电镜(EM )和组织形态学检查MG 感染鸡气囊通道的详细情况。Tajima 等[145]研究了MG 与鸡气管上皮细胞相互作用的超微结构。AbuZ-ahr 和 Butler [2]及Takagi 和Arakawa [14]报道了感染的气管环外植体的相似研究结果。 Dykstra 等采用电镜技术研究了在鸡气管上皮细胞和接种了致病性MG 的气管环培养物中产生的细胞病理学变化。他们描述了纤毛和无纤毛的上皮细胞脱落后发生的黏液颗粒释出,以及单个细胞纤毛的少量脱落。上皮表面的修复受基底上皮细胞分化和培育脱落细胞形成的空隙影响,感染期间,由于细胞浸润和水肿,上皮增厚[52]。
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图9.3鸡毒支原体感染(Van Roekel)
试验感染鸡鼻道和窦的切面,一侧的窦和鼻道黏膜增厚,×6。
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图9.4鸡毒支原体感染
鸡窦的切面, 上皮下的单核细胞浸润和淋巴滤泡反应。
脑炎型MG 的病鸡,其脑组织学检查为中度到重度的脑炎,血管淋巴细胞管套,纤维蛋白样血管炎、局部实质坏死和脑膜炎[37]。
MG 所致的结膜炎,其特征症状为上皮增生,严重的细胞渗出,上皮下和中央弱性血管结缔组织基质水肿,这引起眼睑明显增厚[124]。在
上皮下固有层、浆细胞和淋巴细胞增殖显著,形成生发中心,并引起增厚的增生上皮层不规则隆起[124]。
免疫力
由临诊症状恢复了的禽有某种程度的免疫力,但这样的禽群带有细菌,并能通过接解将疾病传染给易感禽或通过蛋传递给它们的后裔。在Luginbuhl 等[103]报告中包括着有关MG 免疫反应的文献综述。Adler 等
[104]确定了法氏囊对MG 的抵抗力与血清学反应的重要性。已经发现伴有并发感染的鸡的支气管洗液中MG 抗体效价上升可降低微生物含量和支气管病变伤痕[164]。康复鸡体内抗体持续存在,一旦复发,它们比暴发疾病后所观察的MG 消除速度要快,支气管病变严重程度要比初次轻。这些结果及其他结果表明,呼吸道分泌的抗体在抵抗MG 中起着重要作用[54,164,165]。呼吸道产生的相应的MG 感染的抗体能抑制微生物在支气管上皮细胞上附着[12],这可能是免疫介导保护的一个重要机理。鉴定MG 抗原已有了相当有效的方法,尤其是应用粘附素或血凝素特性,它可能在感染的病理机制和免疫反应方面起关键作用。分子量为60-75KD 的MG 蛋白或脂蛋白作为免疫优势粘附素或血凝素已有过论述
[11,14 ,15,18,27,43,61,111]。已经发现MG S6株的67KD 血凝素是由一个基因族所编码的,它的假说功能是免疫逃避[112]。更进一步的讨论,请参阅“免疫接种”一节。
诊 断
病原的分离和鉴定
气管或气囊的渗出液、鼻甲骨、肺的悬浮液或鼻窦的渗出液,均可直接在支原体肉汤中或琼脂培养基培养[91]。从鼻后裂(腭裂)拭子取样证明是分离MG 的适宜方法[29]。在补充有10%-15%马或猪血清的Frey 培养基中[62],加入醋酸铊(1:4000)和青霉素(可加到每升2000国际单位)可控制外源性的细菌污染。公鸡精液[173]和母鸡输卵管中[51,173]业已分离到MG 。虽然火鸡支原体(MM )通常从火鸡泄殖腔拭子分离到,但MG 也可以从火鸡[161]和鸡[7,106]的泄殖腔部位分离到。
渗出物或组织拭子直接在琼脂平板上涂板,经4-5天培养后形成菌落,但用肉汤初次分离通常是一种较敏感的方法。培养物至少应在37℃
培养3-7天传代一次,连续传2代或3代,可增加分离的数量。加入三苯四唑或加入酚红和具有足够的葡萄糖,提供了一个生长指示系统,MG 还原三苯四唑而在培养基中产生红色,或者发酵葡萄糖使培养基变酸时酚红变为黄色。
将肉汤培养物接种到富含琼脂培养基上以研究菌落的形态和做免疫荧光试验。接种的培养基在很温润的条件下37℃培养3-7天后才能生长成能用解剖显微镜观察到的足够大小的典型菌落。注射雏鸡或雏火鸡的窦、气囊或腱鞘可确定培养物的致病力。制备的组织切片也有助于诊断。
用原始渗出液接种7日龄的鸡胚卵黄囊,可以作为一种进一步分离MG 的方法,但是接种物必须在一定程度上无细菌污染。鸡胚应在5-8天之内死亡,但是在鸡胚死亡以及在典型的病变出现之前,卵黄材料可能要做一次或更多次的连续传代。
鉴定支原体分离株是否是MG ,是用以抗体为基础的方法来确定的。可制备抗原,然后用已知的抗MG 血清进行试验,这种试验对新分离的培养物效果不十分满意;另一个方法是用已知的MG 抗原检查人工感染鸡或火鸡的血清。应用直接免疫荧光方法检测琼脂平皿表面上的菌落或菌落印迹是一种对培养物鉴定的有效方法。这些方法和改良的方法对鉴别含有其他支原体的MG 培养物是特别有用的[20,119]。
琼脂凝胶沉淀也可用来鉴定培养物[16,123]。据报道,直接免疫过氧化物酶法也可有效地鉴定MG 和MS 的培养物[77],但检查血清中的抗体则更常用酶联免疫吸附试验(ELISA )来测定血清中的抗体。
用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE )或DNA 限制片段长度多态性分析(RFLP )方法所得的蛋白带比较发现, 鸡毒霉形体(MG)株之间互有差异, 相比而言,RFLP 方法更加敏感一些[88,92,93,137]。
153]和MG 暴发的流行病学调查方面特别这些方法在鉴定MG 的疫苗株[85,
有用。DNA 和rRNA 基因探针也用鉴定MG 特性和疫苗株[50,60,76,87,84,120,136,177]。根据核酸特异序列[121,141],多聚酶链反应(PCR )能增加微生物检测的灵敏度,并研制成了商品化的试剂盒。
血清学
在MG 控制程序中,血清学方法适用于监测鸡群,并在怀疑鸡群感染时用此方法来论断。血清学试验的阳性反应,结合病史和典型症状,就可以在微生物的分离和鉴定尚未确定时做出初步诊断。
试管凝集试验是一种常的方法,尤其是在60和70年代控制火鸡MG 的过程中,但现在很少使用。用于检测MG 的过程中,但现在很少使用。用于检测MG 抗体的血清平板凝集(SPA )抗原可以从市场上买到。因为SPA 方法快捷,且相对低廉和灵敏,所以已经广泛应用于鸡群监测和血清学诊断的初步筛选试验。然而,感染滑液囊支原体,或用油乳剂苗免疫或用抗各种病原的组织培养苗近期接种有些鸡群,会发生非特异性反应[25,39,132,172]。通过稀释试验血清[134]或制备SPA 抗原的培养基中用脂质体替代猪血清[5],某些非特异性SPA 反应要能会减少。
血凝抑制试验(HI )通常用于判定血清平板凝(SPA )或最新的ELISA 试验的反应结果。然而,血凝抑制试验(HI )耗时间,且无市售试剂,试验也不是非常灵敏[48,73,92,135]。
为寻求比SPA 或HI 试验检测MG 抗体更敏感更特异的方法,有些研究者采用了ELISA 方法[13,42,70,108,151]。商品ELISA 试剂盒已逐渐用于鸡群监测和血清学诊断的初步筛选试验。有人努力通过选择和纯化用于ELISA 抗原的特异性免疫优势MG 蛋白的方法来提高MG ELISA 的灵敏性和特异性[14,126]。此外,ELISA 也应用于呼吸道洗液[6211,164]和和卵黄样品[116]MG 的抗体检测上。用ELISA 或HI 试验检测卵黄样品和血清样品中MG 抗体水平,比较研究显示其结果有可比性,说明卵黄样品可替代血清样品用于监测鸡群[33,116,175]。用于检测MG 抗体的斑点免疫结合试验也已有过描述[10,41,139]。
70年代,在某些无MG 病史的种鸡群中可遇到一些非典型的MG 血清学试验结果。通常外观正常的种群在28-36周龄时,采用血清平板试验(SPD )检测有低滴度的阳性率。在几个月的研究中注意到,HI 滴度很少超过1:8,血清平板试验的阳性率也不超过20%-40%[107,170]。有人认为分离困难并明显经蛋传播的低毒力“变异”MG 株与之有关[156,170]。火鸡也曾有过被低毒力、低传播性和弱免疫原性的MG 株感染的情况[48]。经免疫印迹[14,15,140]和血凝试验[128]或血凝抑制试验[48,92,111]证定的MG 抗原变异,至少一定程度上与非典型性因子有关。
鉴别诊断
鸡 要注意将MG 感染与鸡的其他呼吸道病区别开。鸡新城疫(ND )和鸡传染鼻炎(IB )的抗体可单独存在或作为并发病的慢性呼吸道病(CRD )的一部分而存在。传染性鼻炎和禽霍乱常通过细菌培养即可确定。滑液囊支原体(M.synoviae )可单独存在,或与MG 同时存在,在
一些病例,应用两种支原体的血清学试验方法或培养方法是必要的。
火鸡 包括火鸡群的窦炎在内的呼吸道疾病的出现,除了常见的MG 感染外,还可能是由于禽霍乱、鸟疫、MS 感染或维生素A 缺乏症所引起的。要用特异性的培养和血清学方法区别之。禽A 型流感病毒感染也应考虑。
治 疗
MG 对下列几种抗生素敏感:链霉素、土霉素、金霉素、红霉素、炭霉素、螺旋霉素、泰乐菌素、林肯霉素和壮观霉素[40,154]。但据报道,MG 的某些菌株对链霉素、红霉素、螺旋霉素和泰乐菌素有很强的抵抗力。
60年代曾试烀用各种抗生素和化学药品治疗慢性呼吸道病(CRD ),产生的结果不一。在许多情况下,鸡的增重或产蛋量的稍有增加以及净膛鸡的屠宰废弃率的轻度减少,汪定抵得上治疗的费用。但是,某些较常用的治疗方法,包括应用土霉素、金霉素,每吨饲料含200g 连用几天,是具有良好效果的。泰乐菌素,皮下注射,6.6-11.0mg/kg体重, 或于1L 水中加入530-790mg 饮水,连用3-5天。对各种年龄混养的产蛋鸡给予非常低剂量的泰乐菌素可降低鸡蛋生产的损失[127]。据报道,用硫粘菌素和硫粘菌素加盐老对鸡和火鸡是一种有效的治疗方法[9,19,143]。林肯毒素和壮观霉素合用可有效地控制幼龄鸡的实验性并发性气囊炎[69]。Danlfloxacin ,一种喹啉类抗菌素,对实验感染MG 的鸡有效[79,83,152]。
有人试图通过给种鸡群及其后代使用链霉素、双氢链霉素、土霉素、金霉素、红霉素或泰乐菌素等进行药物治疗,以阻止MG 经蛋传播,但此法通常可降低MG 的感染率,而不能获得一个完全无MG 感染的鸡群。
在不同的温度和压力条件下,浸蛋法已作为使孵化蛋获得抗生素的一种手段来消除MG 和经蛋传播[6,58,68,144]。一般来讲,这些方法可明显降低经蛋传播的可能性,但有时不能完全消除。浸蛋有时影响孵化率,且细菌污染有时也是个问题。用抗生素溶液浸蛋法使猪一个足够大的无MG 鸡群成为可能。这个鸡群可以为养禽业提供一个更大的清洁后备鸡群,以至于在美国建成了无MG 的种鸡和种火鸡群。只有当清洁种鸡是稳定的且又有繁殖能力时,对种鸡群进行血清学检验和筛选阴性鸡群才能实施。
Yoder [167]报道了另一种打破经蛋传播循环的方法。室温(25.6℃)善的蛋在一个加压空气的孵化器内加温,使内部温度达到46.1℃, 保持
12-14h ,此时,孵化率常常降低8%-12%,但是MG 和MS 却被灭活了。 Meroz 等[115]在以色列报道了类似的成功结果。大量的野外试验在许多情况下显然是相当成功的,且孵化率仅降低2%-3%[169]。
预防和控制
国为MG 能经蛋传播,采取严格的隔离措施以防止疾病传入后备鸡群,来维持鸡和火鸡群无MG 感染是可能的。使种鸡群建立和维持在清洁状态,必须有相应的控制方案。火鸡和鸡育种家一般都采用了由国家支持的在“全国家禽改进计划”中规定的MG 控制方案[8]。
免疫接种
MG 灭活菌苗 对MG 菌苗的研究源自70年代后期,因为在某些多年龄组混群的大型的产蛋鸡场,MG 感染成为很明显的地方性禽患。据报道,MG 油乳剂菌苗可保护雏鸡免受鼻内接种强毒的攻击,以及保护产蛋鸡群不造成产蛋率下降[71]。有的学者证实,上述菌苗可防止肉鸡发生气囊炎[82,176]。或防止产蛋鸡群产蛋率下降[175],面有的学者却没有发现在有流行性MG 感染的商品蛋鸡中的效[86]。菌苗能减少但通常不能消除随后的MG 攻毒菌的定居[150,165,175,176]。为了提高MG 灭活菌苗的性能,已研究了很多种佐剂和抗原缓释系统,包括脂质体和iotacarageenan [17,53,55]。MG 灭活菌苗已经商品化生产。
活的MG 菌苗接种 Van der Heide [157]和Carpenter 首[35]次报道了青年后备母鸡转入大型的不同年龄的产蛋鸡舍之前,使用活MG 培养物(康涅狄格F 株)进行免疫的研究。还有许多关于使用活MG F株菌苗的报导[38,30,64],该菌苗已商品化生产,并广泛用于不同日龄产蛋鸡群。F 株菌苗能对因气溶胶接种强毒R 株引起的肉鸡气囊炎起部分保护作用
[97,100,133],其生物学机制不涉及先入菌附着位点竞争或阻断,F 株菌对MG 强毒株起保护作用[97]。F 株能经蛋传播[100],也能水平传播。然而,Kleven [89]报道,感染F 株的小母鸡不会轻易传播感染给有隔离带或转栏相隔的同一鸡舍内饲养的肉鸡群。许多研究[35,117]显示,在汉行MG 的鸡群,F 株菌苗免疫的产蛋鸡产量比未免疫鸡群多,但不如无MG 鸡群多。连续2年使用F 株菌苗免疫的替代鸡群,MG 田间株即被替换掉[94]。通过实验感染发现MG F株菌苗对火鸡有致病力[100],这可能与野外条件下肉用型火鸡和种火MG 暴发有关[99]。最近有报道指出,6/85株和ts-11株的活MG 菌苗对鸡和火鸡毒力很弱或无毒力[1,56,162]。这
些菌苗已商品化生产。
活苗接种 1977年,Van der Heide[157]研究报道,青年后备鸡群转入大型不同龄产蛋鸡舍之前,使MG 活培养物进行免疫。他使用的是Carpenter 等[35]在宾夕法尼亚州培养的MG 康涅狄桥格F 极弱毒株,有关MG F弱毒株的大量研究也已报道。
Clisson 和Kleven [64]研究了F 弱毒株和MG 菌苗对保护MG 感染母鸡减少产蛋损失或MG 经蛋传播的效果。所有免疫级较对照级产蛋量高,且经蛋传播的机会少。经两个剂的的MG 菌苗免疫的母鸡在发生蛋传播之前有一个最长的相隔时间。Branton 和 Deaton [28]在发生MG 流行性感染的三个口系的商品蛋鸡场,使用MG F弱毒株进行了大规模野外试验。三个品系的蛋重和蛋壳强度相似,且与对照组无差异。经F 株免疫的某些品系的母鸡死亡率较低,且产蛋率较高。进一步研究[30]证实,在第45周龄(产蛋高峰过后),使用F 弱毒株免疫接种对输卵管菌能无影响,这是通过蛋壳强度、厚度和蛋的质量判定的。经眼接种MG F弱毒株,母鸡不会发生蛋传播,但经气溶胶接种则可发生。然而,经上述两种途径接种R 菌株,蛋传播都很严重[101]。其他报道证实[102,133],先用F 弱毒株滴眼,再用R 强毒株做气溶胶攻毒,可使肉鸡不发生气囊炎。Levisohn 和Dykstra [9]也发现,F 株可保护鸡群不发生由MG 攻毒诱发的气囊炎,但在气管上皮细胞上,F 株的定居不能阻止致病性MG 的感染。Kleven [89]报道,当有空笼隔开时,经眼接种F 株弱毒株的小母鸡不易将感染传递给同舍内饲养的网鸡。
Carpenter 等[35]报道,在宾夕法尼亚发生地方流行性MG 感染的鸡场,建成了无MG 和F 株免疫的产蛋鸡群。他们断定,平均来讲,每个无MG 感染的鸡舍的母鸡较感染的母鸡多下15.7枚蛋,经F 株免疫的鸡群较感染母鸡多下7. 枚蛋。同样,Mohammed 等[117]在在加利福尼亚州确定了MG 和MS 感染对商品蛋鸡造成的经济影响。他们断定,与不感染鸡群相比MG 感染群中每只母鸡少产5~12枚蛋,F 株免疫群少产6枚蛋。他们估计,1984年在加利福尼亚州商品蛋鸡场,由感所造成的总的损失大约是700万美元。
用MG 温度敏感变异株S6株经鼻内接种免疫幼龄雏鸡,然后用S6强毒株经气囊感染,结果与对照组引比,气囊炎发生率较低[81,96]。
滑液囊支原体感染
引 言
MS 感染最常发生的是亚临床型的上呼吸道感染。它与新城疫(ND )、传染性支气管炎(IB )或二者兼有相结合,可引起气囊感染。有时MS 可变成全身性感染并导致传染性滑膜炎,这是鸡和火鸡的一种急性或慢性传染性疾病,主要涉及关节的滑液囊膜及腱鞘,引起渗出性滑膜炎、腱鞘滑膜炎或黏液囊炎。
历史
Olson 等首先描述了传染性滑膜炎,并认为与支原体有关[67,68]。MS 感染的呼吸型的发生[70]及气囊感染均系由于某些MS 的分离株与新城疫及传染性支气管炎的疫苗接种共同所引起[50]。可参阅Jordan [39,40]和Timns [90]关于MS 的文献综述。
发生与分布
在50年代和60年代,传染性滑膜炎主要见于美国的肉用仔鸡生产地区中的4~12周龄牌子生长期的鸡。从70年代到90年代,鸡滑膜炎型很少见到,面呼吸型则屡见不鲜。无明显症状的感染并不鲜见。MS 感染经常发生于年龄不一的商品蛋鸡群中。传染性滑膜炎通常见于10~20周龄的火鸡。来自所有大型的鸡和火鸡的商品种禽场的繁育群大多无MS 感染。MS 呈世界范围性分布。
病 原 学
分类
Chalquest 和 Fabricant 注意到支原体菌落象卫星一样在微球菌菌落的周围生长[18],他们还鉴定出该菌生长需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD )。Dierks 等[23]称它为血清型S 。Olson 等[71]研究了若干分离株并提出命名为MS ,后来又证明它为一个独立的体[41]。
形态及染色
MS 在姬姆萨染色片中表现为多形态的球状体,直径0.2um 。对禽滑膜的超微结构研究证实,MS 存在于内饮小泡中。支原体细胞呈圆形或梨形,内含颗粒性核糖体。其直径为300~500nm,无细胞壁,并被三层膜所包裹[97]。采用电镜技术,经钌红和负染证实了细胞外表面膜的存在[1]。
生长需要
该菌生长需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸[18],但可以烟酰胺代替较昂贵的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸来生产抗原[22]。血清也是生长所必需,猪血清较好[17]。琼脂上的生长可通过将平板置于密封的罐中来完成,这样可避免琼脂干燥。最适生长温度为37℃。
初次分离时,由于组织抗原、毒素和抗体可能存在,建议采用小量接种,24h 内移植,或在肉汤中将接种物稀释。移植需用吸管加接种物10%。用棉拭子从气管、鼻内裂滑膜及气囊病变部位取样接种肉汤较为满意。直接接种于琼脂平板3~5天可见菌落生长,但在肉汤中分离更为敏感。当注意到酚红批示剂的颜色从红色变为橘红或黄色时(通常3~7天后)应再进行肉汤接种。然后将培养物转移到琼脂平板,并再次接种至肉汤中。MS 对低PH 较敏感,因此,培养物中酚红批示剂的颜色变黄后(
* 对潜在性污染样本,每升可增加10%醋酸铊20ml 和青霉素2000000IU 。
氨苄青霉素(200~1000mg/L)可代替青霉素。
应用下述Frey 氏培养基的改良配方可使支原体生长良好[27](表
9.2)。琼脂平板则可用1%纯化的琼脂如离子琼脂1号、Nobel 琼脂或Difco 纯化琼脂。除半胱氨酸、NAD 、血清和青霉素外的所有成分均可在121℃条件下15min 进行高压蒸气灭菌。冷却至50℃后无菌加入上述其它成分,这些成分也已经过过滤除菌并加热至50℃。倾注平板约5mm 厚。琼脂平板上可不加酚红。
菌落形态
观察固体培养基上的菌落,最好是用30倍的解剖显微镜,使用间接光源,可见隆起、圆形、略似花格状、有中心或无中心的菌落。菌落直径从不足1mm 至3mm 不等,因菌落数多少、培养基的适宜度及培养时间而异。固体培养基培养到3~5天后可见生长。
生化特性
MS 的生化特性业已描述[18,23]。在适当地增加了营养成分的培养基中,MS 能发酵葡萄糖及麦芽糖,产酸不产气,不发酵乳糖、卫矛醇、杨苷或蕈糖。MS 呈磷酸酶阴性并产生薄膜斑点[41]。有些MS 分离株可凝集鸡或火鸡的红细胞。它还原四唑盐的能力很有限。
对理化因素的抵抗力
对消毒剂的抵抗力未作过测定,但可能和其他霉形体相似。污染鸡舍经清洁和消毒后,再空置1周,然后将1日龄的雏鸡放进去,没有引起感染[28]。MS 在PH6.8或更低时不稳定,对高于39℃的温度敏感,能耐受冰冻,但滴度降低。以下测量均未达到终点,但可知在卵黄材料中的MS 于-63℃条件下至少7年、-20℃条件下2年之后仍在存活。在-70℃条件下冻存的肉汤培养物以及在4℃条件下保存的冻干培养物,均可存活数年。在室温条件下,羽毛上的支原体至多可存活3天,而在鼻腔内至多可存活12h ,但在多数其他材料上存活不会超过1天。
抗原结构
血清平板凝集(SPA )[69]、试管凝集(TA )[95]、血凝(HA )[94]、琼脂凝胶沉淀(AGP )[85]和酶联免疫吸咐试验(ELISA )[35,74,77]的抗原都曾有过研究。利用Western blots进行的研究已经明确了这种MS 的主要免疫性膜抗原的特性[3,4,5]。 在斑点ELISA 试验中,一种主要的免疫性蛋白P41表现为起决定作用的一种抗原,而P53和P22作用不明显[3]。主要膜蛋白的分子体积的大小因MS 菌株的不同而异[2]。
71],可靠资料表明MS 只有一个血清型[23,经DNA-DNA 杂交技术证实,
MS 不同菌株间几乎没有差异[104,105]。MS 菌株可采用DNA 核酸内切酶技术加以鉴别[55,60]。鉴别MS 菌株的一种更简单更快捷的方法是利用任意引物聚合酶链反应(PCR )方法[24]。
感染了MS 的鸡的血清偶尔凝集MG 的平板抗原[71,72],反过来的情况却很少发生。Roberts 和Olesuik [84]认为这种交叉反应与类风湿因子的存在有关,并受组织反应的刺激。当进行血凝抑制(HI )或TA 试验时,交叉反应会减小。MS 的和MG 也有共同的抗原决定簇[2,105]。针对MS 的种特异性单克隆抗体已经开始生产[37]。一种与血凝有关并与肺炎支原体的P1蛋白表现同源性的55000mW 抗原已经鉴定出来[61],此蛋白已经被克隆和部分测序[62]。免疫球蛋白G Fc受体也已鉴定出来[53]。
致病力
不同的分离株在产生疾病的能力上存在着相当大的差异,许多分离株可能不产生或很少产生临床疾病。经鸡胚、组织培养或肉汤传代可降低其产生典型感染的能力。通过鸡胚对致病力的影响较肉汤传代为小。从气囊病变所分离的MS 较易引起气囊炎,而自滑膜分离者较易引起滑膜炎[51]。气囊炎可由新城疫—传染性支气管炎(ND —IB )免疫接种或任何呼吸道感染而加重病情[50,88]。气囊炎的严重程度依赖于与MS 共同作用的传染性支气管炎病毒的毒力[36]。冷的环境温度能极大地增加气囊病变[103]。传染性法氏囊病可造成鸡的免疫抑制,与MS 双重感染会导致更为严重的气囊病变[31]。在表现为严重滑膜炎症状的MS 感染火鸡中已经发现由于脑膜脉管炎病变引起的神经症状[19]。
发病机理和流行病学
自然与实验宿主
MS 的自然宿主是鸡、火鸡和珍珠鸡[76]。鸭[9,91]、鹅[10]、鸽[8,79]、日本鹌鹑[8]和腿鹧鸪[78]也可发生自然感染。人工接咱时,野鸡[87]、鸭[100]和虎皮鹦鹉[13]对此菌敏感。在西班牙,从庭院麻雀(passer domesticus)分离到MS [78];Kleven 和Fletcher 发现这种麻雀可被人工感染,但具有相当的抵抗力。家兔、大鼠、豚鼠、小鼠、猪和羔羊对实验接种不易感
[68]。
据观察,鸡的自然感染最早可发生在1周龄,但急性感染通常见于4~16周龄的鸡和10~24周龄的火鸡。急性感染偶见于成年鸡。在急性感染期之后出现的慢性感染可持续终生。慢性感染可见于任何年龄,在有些鸡群,慢性感染并非继发于急性感染。
MG 感染群中,气囊炎发生于1日龄和较老的火鸡。无支原体的火鸡通过气囊接种可导致气囊炎[30,82]。经卵黄囊接种18日龄的鸡胚可使小鸡发生滑膜炎和气囊炎[14]。MS 可从该病急性期的病变组织中分离到,但上呼吸道感染是永久性的[50]。
传播
本病很容易通过直接接触发生水平传播。在实验组的鸡感1~4周以后,从一直与之保持接触的鸡的呼吸道中证实有MS 存在[70]。在同一鸡舍中,通过鸡笼间的屏障也可以发生传播。除MS 传播较快外,在许多方面,它与MG 的传播相似[65]。但是,也有慢性传播感染的报告[98]。通过呼吸道的传递通常感染可达100%,但是没有或很少发生关节病变。
自然感染和人工感染的鸡均可发生垂直传播[16],但是,许多源于感染母鸡的鸡群却无感染。垂直传播对于MS 在鸡和火鸡的传播中起重要作用。因此,所有制备活病毒疫苗的蛋均应来自无MS 鸡群。试验感染肉种鸡,在接种后6~31天,MS 可存在于1日龄雏鸡的气管、未孵育的胚和死在鸡壳中的胚胎[93]。当商品种禽繁育群在产蛋过程中发生感染时,蛋传播率似乎在感染后的最初4~6周时最高,随后传播可能停止,但感染群随时会排菌。
潜伏期
传染性滑膜炎曾见于6日龄的小鸡,故认为经蛋感染MS 的鸡的潜伏期相对较短。接触感染的潜伏期通常是11~21天。在临诊症状明显以前可测出抗体。以病禽关节渗出液或感染鸡胚的卵黄人工感染3~6周的鸡,易感性与潜伏期的顺序是:爪垫,2~10天;静脉,7~10天;脑内,7~10天;结膜滴注,20天。鸡对肌肉接种亦易感。气管内接种最早在第4天,便可引起气管及窦的感染,并很容易传播给毗邻的禽类。气溶胶接种后气囊病变在职7~21天时最严重[50]。潜伏期还因接种物的滴度及其致病力不同而产生差异。
症状
鸡 在感染滑膜炎的鸡群最初能够观察到的症状是冠苍白、跛行及生长迟缓。随着病情的发展,出现羽毛粗乱,鸡冠萎缩。有些病例的鸡冠呈偏蓝的红色。关节周围常有肿胀,常有胸部的小疱。跗关节及爪垫是主要感染部位,但有些鸡的大部分关节都会被感染,不过,也有些鸡偶见全身性感染而无明显的关节肿胀。病鸡表现不安、脱水和消瘦。虽然鸡已严重地感染发病,但若置于食物及饮水的附近,它们仍思饮食。常见含有大量尿酸或尿酸盐的偏绿的异色排泄物。上述急性症状之后继以缓慢的恢复,但滑膜炎可能在整个鸡群中始终存在。在另一些情况,则不见或不易发现急性期,群中仅见一些慢性感染的鸡。经呼吸道而感染的鸡可能在4~6天时出现轻度罗音,也可能根本无症状。
气囊感染可能发生于任何年龄,但却成为肉废弃的最常见的一个原因[47]。在野外条件下,大多数由MS 感染所致的气囊病变发生在冬季。MS 感染种鸡的后代可能会加重气囊病变的程度,体重减轻,饲料报酬降低。
MS 经气溶胶人工接种母,1周后可察觉产蛋量有所下降,至2周时产蛋量降低18%,至4周全,产量重新恢复正常[56]。但自然感染的成年母鸡,虽然在商品生产中发现过蛋产量有所减少的情况,通常来说,其产蛋量和蛋的质量不受影响或影响甚微[59,73]。
火鸡 MS 在火鸡引发的症状与鸡基本相同。跛行是最明显的症状,跛禽的一个或多个关节常见发热和肿胀,偶见胸骨滑液囊的增大。严重感染的火鸡体重减轻,但感染不严重的火鸡,当与整群分开饲养后,体重得以令人满意地增加。在人工感染的火鸡[68],最早可见的症状是生长
停滞。
呼吸道症状在火鸡不常见,但从窦炎发病率很低的火鸡群中获得的窦渗出物中已经分离到了MS 。Rhoades [81]描述了在火鸡窦炎产生过程中MS 和MG 的协同作用。对火鸡爪垫接种可导致产蛋完全停止。
发病率和死亡率
鸡 鸡群临诊表现为涌膜炎的发病率介于2%~75%之间,通常为5%~15%。呼吸道感染是无症状的,但可能有90%~100%的鸡被感染。死亡率通常少于1%,最多不过10%。人工感染的鸡死亡率可由0%~100%,取决于接种的什么和接种的剂量。
火鸡 感染火鸡群的发病率通常很低(1%~20%),但由于踩踏和相残致死的死亡率值得关注。
大体病变
鸡 在传染性涌膜炎的早期阶段,病禽可见有黏稠的、乳酪色至灰白色渗出物存在于腱鞘的涌液囊膜、关节、龙骨滑膜囊,并伴有肝、脾肿大(图9.8)。肾常肿大,苍白,呈斑驳状。随着病情的发展,在腱鞘、关节、甚至肌肉和气囊中发现干酪样渗出物。在此期间,关节表面、尤其是跗关节和肩关节的表面不同程度地变薄至形成凹陷(图9.9)。在上呼吸道通常无肉眼可见病变。在该病的呼吸型中,可能存在气囊炎。
***************图9.8 *****************
图9.8 涌液囊支原体感染
8周龄火鸡切开的爪垫,指屈肌可见肉芽组织和脓性分泌物,
在鸡可见类似病变。
********************图9.9*******************
图9.9 滑液囊支原体感染
患传染性滑膜炎的鸡的胫骨和趾骨远端关节表面的溃疡。
火鸡 关节肿胀不如鸡那么明显,但切开跗关节时常见有纤维素性及脓性分泌物。呼吸道病变多种多样。
病理组织学
有关MS 所致鸡的传染性滑膜炎[43,46,87]以及所致鸡[26]和火鸡[30,83]的呼吸道疾病已作过描述。
在关节,特别是趾关节和跗关节,可见有异嗜性白细胞和纤维素浸入关节腔或沿腱鞘浸润。滑液囊膜因绒毛形成和淋巴细胞和巨噬细胞在涌膜下层弥散性至结节性浸润而增生(图9.10)。此间,软骨表面变色、变薄或变成凹陷。气囊的轻度病变包括水肿、毛细血管扩张和异嗜性白细胞及坏死碎屑在表面聚积;至更严重的病变包括上皮细胞增生、单核细胞弥散性浸润和干酪样坏死。业已报道的与传染性滑膜炎有关的其他病变还包括:与脾脏鞘动脉有关的巨噬细胞—单核细胞系统增生,心、肝和肌胃淋巴细胞浸润以及胸腺和法氏囊萎缩,心脏的病理学已有详细描述[45]。
****************图9.10***********
图9.10 滑液囊支原体感染
感染滑液囊炎的7周龄火鸡,
细胞增生的滑液膜具有多层滑膜下淋巴聚集。
免疫力
经鼻感染的鸡对随后的爪垫攻毒有抵抗力[70]。鸡经鼻腔免疫接种MS 温度敏感变异株可防止气囊炎发生至少达21周[64]。鸡先感染MS-H 株—一种温度敏感变异株—随后用一种有产生气囊炎毒力的野毒株攻毒,确有保护能力[86]。用MS 经非肠道途径接种,在产生适当的抵抗力之前,鸡通常先被疾病摧跨了。由MS 诱导的对病变的抵抗力是法氏囊依赖性的,而胸腺依赖性的淋巴细胞对显微镜下所见滑膜囊病变的发展可能是必需的[52]。
诊 断
病原的分离和鉴定
分离出MS 并予以鉴定,就可做出阳性诊断。从急性病禽分离MS 并不难但在感染的慢性阶段,病变组织中可能不在有可见的MS 。从慢性感染鸡的上呼吸道进行分离更为靠。(至于培养基和分离方法,参阅“生长需要”一节)采用菌落压印[21]或完整菌落[89]荧光抗体技术检查可用于
鉴定。
使用DNA 探针对组织或培养物进行MS DNA直接检测己有描述[25,38,44,106]。这是一种简单、快捷的检测方法,但敏感性未必合适。聚合酶链反应(PCR )是一种检测组织或培养物中MS DNA的简单、快捷及高敏感性的方法[29,54,107],而且PCR 试剂盒[92]市场上有售。PCR 程序的敏感性可分离和鉴定相比。
血清学
商品化的血清平板凝集反应的抗原已有出售。每个包装上都有适当的应用说明。通常是将0.02ml 的血清与等量的抗原在玻板上混和, 将玻板轻微转动, 观察凝集反应. 抗原每天都应有已知的阳性血清和阴性血清进行测定. 被感染的鸡大约需要2~4周产生抗体[69]..
在某些鸡群中应用血清平板凝集试验(SPA)时有非特异性反应
[32,102], 特别是使用油乳剂疫苗免疫预防多种疾病鸡群。MG 抗原偶尔也可发生凝集,但反应时间延迟,且通常滴度较低[72]。为了证实反应的特异性,可应用血凝抑制试验(HI )[94]。
一种使用完整支原体菌落作为基质的间接免疫过氧化物酶试验已经用于检测血清、呼吸道分泌物、滑膜液、胆汁、哈德氏腺、输卵管和卵黄中的抗体[7,11,12]。
ELISA [35,74,77]常用作诊断试验可以代替血清平板凝集试验。ELISA 试剂盒市场上有售。
血清学结果更进一步的证实则需要从上呼吸道分离出MS 并进行鉴定[85],或应用PCR 技术。
在呼吸道感染后,火鸡产生低水平的抗体,因此,以凝集反应来判断一个火鸡群的MS 感染状态未必有效。只有爪垫接种后才产生显著的抗体[30,80]。各种商品化的凝集抗原在检查火鸡凝集素的能力方面有所不同。个别感染的火鸡可能不产生可检出的抗体[75]。在检查某些病例的感染方面可能需要人工培养和血凝抑制试验。
鉴别诊断
根据鸡冠苍白、头下垂、消瘦、腿软、胸部起疱、爪垫及跗关节肿大、脾肿大和肝或肾增大等症状可做出初步诊断。必须以细菌学方法
排除由细菌引起的滑膜炎或关节炎的可能性。金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、巴氏杆菌及沙门氏菌也可能是滑膜炎的原发病因。MG 也可能是引起胸部水疱和关节病变的一种病因[68,71]。
跖部伸趾屈腱的纤维化及心肌的淋巴白细胞大量浸润与病毒性关节炎相区别[57]。感染病毒性关节炎的鸡血清不凝集MS 的抗原,但必须牢记,MS 的凝集素可能存在但并无明显的关节症状。
涉及呼吸道的某些病例,MG 和其他一些病原所致的呼吸道疾病应当排除。
治 疗
在体外,MS 对几种抗生素是敏感的,包括氯霉素、达诺沙星(danofloxacin )、恩诺沙星(enrofloxacin )、林肯霉素、土霉素、壮观霉素、螺旋霉素、四环素、多粘菌素和泰乐菌素[15,42,48,99]。与MG 相比,MS 分离株比后期的分离株对氯霉素的反应能力可能要弱,但尚未见到有关MS 的获得性抗生素抵抗力的报道[66]。一般说,适当的药物疗法对预防气囊炎或滑膜炎是有价值的,但对已有病变的治疗鲜见成效。抗生素治疗不能从群中排除MS 感染。
野外和实验室研究的综合资料表明,连续给予氯霉素(每吨饲料中含50~100g)对控制时则要较高浓度(每吨饲料约含200g )。对火鸡群,预防剂量需要每吨200g 。氯霉素的效力可能与所作用的MS 不同菌株有关。
可溶性林肯霉素一壮观霉素(每升饮水中加入502mg )预防肉鸡和雏鸡的气囊炎方面有应用价值[33,34]。业已证实,饮水中的多粘菌素(0.006%~0.025%)对预防鸡的气囊炎和滑膜有效[6]. 其他产品也有应用, 但对MS 的治疗价值尚未深入研究.
预防和控制
MS 是经蛋传播的, 故唯一有效的控制方法是从无MS 的群中选择鸡或火鸡. 大多数原代种鸡群无感染, 还应有无MS 的备用种群可供选用. 必须采取有效的综合防疫措施来防止感染的传入.
肉用仔鸡MS 感染的暴发常可追踪到某一特定的肉用种鸡群. 通常, 等到了染病的种鸡群时, 蛋传递率已经很低或根本不再有临诊意义了. 是
否宰杀感染种鸡群限决于一定的经济基础. 假如这类鸡群继续产蛋, 其后代应单独孵化, 与无MS 的种群隔离开.
抗生素治疗在消除种鸡MS 方面无效, 但可能会降低蛋传递水平. 通过浸蛋或蛋接种的方法利用抗生素如泰乐菌素和庆大霉素对蛋进行处理[63]或加热处理正在孵育中的蛋[101], 这些方法已经用于繁育种禽群来防止MS 的经蛋传递, 但仅限于已确定有感染的种群使用. 一种灭活的油胶乳菌苗市场有售, 但它有MS 控制上的作用尚未深入研究. 一种活的温度敏感型MS 菌苗,MS-H, 已经有澳大利亚野外试验中广泛研究, 但尚未进入商品化供应[86].