一种改良型小鼠全脑缺血再灌注模型的制作
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一种改良型小鼠全脑缺血再灌注模型的制作 作者：周越菡
来源：《学园》2014年第21期
【摘 要】采取三血管阻断法（3-VO法），建立C57BL/6小鼠全脑缺血再灌注模型，从形态学组织切片上观察海马CA1区神经元变化，用于进一步研究脑缺血疾病的发生机制及临床防治。经统计学分析，3-VO法能引起实验动物海马CA1区神经元形态变化，减少正常神经元的数量，且颈总动脉结扎的时长为决定动物死亡率和神经元损伤的重要因素，证实3-VO法能诱导实验动物海马CA1区神经元的病理学改变，为相关脑血管病的深入研究提供操作简便的动物模型制作途径。
【关键词】全脑缺血再灌注 3-VO法 缺血性脑血管病
【中图分类号】G642 【文献标识码】A 【文章编号】1674-4810（2014）21-0095-02
缺血性脑血管病是仅次于缺血性心脏病的导致人类死亡的第二大疾病。因此，全脑缺血动物模型的制作在缺血性脑血管病的研究领域成为近年研究的热点。该动物模型的特点是可模拟脑血流中断的状态，引起主要集中于海马CA1区、小脑的迟发性、选择性神经元损伤，尤其在海马易损性等方面的应用较为广泛。桂林医学院用C57BL/6小鼠三血管阻断法（3 vessel occlusion，3-VO法），即结扎延髓腹侧面的基底动脉后短暂性阻断双侧颈总动脉，从形态学组织切片上观察海马CA1区神经元变化，为进一步研究全脑缺血再灌注损伤提供依据和手段。
一 材料与方法
1.实验动物及其分组与模型制作
取26～35g雄性C57BL/6小鼠40只，随机分为假手术组以及Ⅰ～Ⅲ组。4%水合氯醛对实验动物进行麻醉，给药容积为10ml/kg。实施麻醉后，将动物仰卧位固定，颈正中切口，剪去枕骨腹侧面部分颅骨，用5-0缝线（上海浦东区金环医疗用品股份有限公司生产）结扎延髓腹侧面上的基底动脉。分离双侧颈总动脉，穿线备用。依次缝合肌肉及皮肤，将动物放置于38℃恒温加热板保持2小时，以维持正常体温。24小时后，拆线打开原手术伤口，同时结扎双侧颈总动脉。Ⅰ～Ⅲ组分别于结扎后10、12、14分钟后，小心取下结扎于双侧颈总动脉的缝线，恢复灌注。假手术组动物进行以上除结扎基底动脉以及双侧颈总动脉之外的步骤。
2.脑组织标本的取材、染色和观察
手术7天后，将各动物以4%水合氯醛10ml/kg腹腔注射麻醉，暴露心脏，先用生理盐水灌注30分钟，待肝脏变白后，换成4%多聚甲醛灌流，直至动物肝脏变硬，尾巴僵硬后，剪下头部并开颅取脑，再浸入4%多聚甲醛中1天。取出固定好的脑组织，经冲洗、脱水、透明、