ABO正反定型不符的问题分析及解决办法

一、ABO正反定型不符的问题分析

（一）ABO定型问题经常发生的情况为：

1.　明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：

(1) 新生儿血样

(2) 免疫缺陷、免疫紊乱

(3) 前带现象

(4) 血型型物质过多

(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体

(6) 亚型，反应是混合视野

2.　由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体

3.　明显多出抗原(或多出抗体)

(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1

(2) 自家凝集

(3) 获得性B

（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析

1.　技术因素：

(1) 试剂贮存不当

(2) 使用技术错误

(3) 使用错误的试剂

(4) 使用污染或失效的试剂

(5) 离心速度不当

2.　存在IgM性质的自家冷抗体

由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。可用DTT或2-ME来处理细胞及血清来解除此种IgM抗体引起的干扰。血清的反定型可在37℃进行，用O型红细胞作为对照。

3.　抗原表达弱或缺失：

(1) A、B抗原的表达可在下述情况下被抑制：

a.白血病

b.双胞胎

c.H基因变异

(2) A、B抗原表达太弱：由于A、B抗原表达太弱，与抗-A或抗-B不反应，但确实存在A或B抗原，因此血清中无相应的抗体。

4.　高水平可溶性血型物质的病人：

极少数有卵巢囊肿的妇女，由于含高浓度的可溶性血型物质，使抗原减弱或消失，此血型物质分泌进入血液可以中和抗-A或抗-B。当使用未洗涤的RBC用于ABO 定型时，型物质就会中和抗-A或抗-B，引起假阴性反应。

5.　混合视野：

(1) 来自近期输注非ABO同型红细胞病人的血样

(2) 骨髓移植后不久

(3) Tn或A3型红细胞

6.　缺失或弱抗-A、抗-B

(1) 新生儿血清

(2) 免疫缺陷、紊乱病人

(3) 老年人

7.　前带现象

当抗-A或抗-B的效价（如35000）IgG太高时, 立即离心法与A 或B细胞不反应。解决方法：

(1) EDTA抗凝血浆结合钙

(2) 使用EDTA保存液悬浮细胞

(3) 将血浆于56℃灭活补体

(4) 血浆或血清用盐水1:10稀释

8.　多凝集：多凝集红细胞，具有不正常的膜结构，可被正常成人血清凝集。起因是微生物酶引起膜的改变，以及膜上糖基合成不完善。

9.　不正常血清蛋白：

白蛋白/球蛋白比例失调的血清引起红细胞产生缗钱状假凝集。

10. 血样血清中存在抗试剂成分的抗体：如抗防腐剂的抗体、抗EDTA的抗体等，此种抗体可以通过将红细胞洗涤而解除。

二、解决ABO定型不一致的指导原则

（一）出现弱反应或缺失抗原的解决方案

出现弱/缺失抗原的可能情况

1.　A亚型、B亚型或AB亚型

2.　疾病状态：如白血病导致A或B抗原减弱，何杰金病（Hodgkin’s）有时会抑制抗原表达，与白血病类似。

3.　过量的血型物质：由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌、卵巢囊肿）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗－A或抗－B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。通过洗涤红细胞可解决此问题。

4.　获得性B

5.　抗－A或抗－B试剂中存在低频抗原的抗体

出现弱/缺失抗原的解决措施

1.　洗涤RBC且延长孵育时间进行试验，如果使用洗涤红细胞后反应加强，则考虑是型物质的抑制

2.　酶处理红细胞再次试验

3.　吸收放散确定是否是亚型。

4.　了解输血史(尤其是O型红细胞输注)来分析混合视野

5.　了解病情诊断（尤其是白血病）

6.　了解是否是骨髓移植受者

7.　了解是否是双胞胎

8.　是否使用从前未使用过的单克隆抗体血清进行了血型鉴定

9.　分泌型型物质检查

10. 进行玫瑰花试验来确定是否混入其它红细胞，或进行细胞分离

11. 如果是弱A或弱B遗传，则检查红细胞上H抗原的表达

患者的正定型与正常反应强度相比属于减弱的反应。从反定型中可以看出，患者血清中不存在ABO系统以外的抗体干扰，也不存在自身抗体的干扰，因和B细胞产生反应，表明红细胞上可能具有A抗原。在正定型中与国产的单克隆抗-A无反应活性，而和抗-AB有弱反应，暗示A亚型的可能。

通过吸收放散、型物质检查确认A亚型。可能是A3。

（二）出现弱反应或缺失抗体的解决措施

出现弱反应或缺失抗体由四种情况引起

1.　年龄：新生儿及老人。

2.　低球蛋白血症：如白血病人、使用免疫抑止药物、低球蛋白的淋巴瘤病人（恶性）、骨髓移植后病人。

3.　丙球缺乏血症：如免疫缺陷病人

4.　双胞胎嵌合体

解决方案

1.　延长反应时间

2.　于室温及4℃检查血清中的抗体。用A、B、O及自身红细胞进行检查

3.　于室温及4℃检查血清中抗体。用酶处理的A、B、O及自身细胞进行检查。可能需要在试验前进行冷抗体的自身吸收

4.　确定病人年龄及临床诊断（如新生儿、免疫病）

5.　确定输血史（非ABO同型的血浆输注）

补充试验：正反定型分别在室温及4度孵育30分钟

可能血型为O型，但具有低效价的抗-A

（三）出现多余抗原（额外抗原）的解决方案

出现多余抗原的可能情况

1.　抗原发生改变：

（1）获得性B：肠道疾病患者，细菌作用导致

（2）多凝集现象：红细胞被掘大多数人的正常血清凝集

2.　红细胞已经被抗体包被：如自家免疫溶血性贫血、输血反应及HDN。

3.　非抗－A及抗－B的抗体与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非特异性凝集。（洗涤红细胞）如抗血清添加剂：染料的抗体与抗体结合附着在红细胞表面导致。

4.　混合视野：非同型输注，如O型红细胞给其他型输用，非ABO同型的骨髓移植，A3亚型等。

5.　低频率抗原抗体反应：定型血清中的存在低频抗原的抗体，与对应的低频抗原产生阳性反应。

解决措施

1.　将红细胞洗涤再进行试验，确定是否是病人或献血员的血清中存在针对ABO定型试剂成分的抗体

2.　用O型及自家红细胞于室温检查病人血清，确定血清中是否有冷自家抗体，如果有，则用2ME或DTT处理。

3.　用不同厂家的试剂检查洗涤的红细胞

4.　了解病人的临床诊断

5.　如果怀疑是获得性B，则用酸化的抗-B检查

6.　进行ABH分泌型型物质检查

7.　如果用多克隆抗-A检查结果是混合视野，则用蛋白酶处理RBC试验，考虑是否是多凝集

解决方案: 询问病史,尤其是下消化道疾病，用酸化的抗-B(pH 6.0)检查

在反定型试验中可以看出，O型红细胞和自身对照皆为阴性，表明反定型试验结果可靠，即为O型。而在正定型试验中均为阳性，可能出现的阳性反应不属于ABO系统的抗原抗体反应。需要了解定型血清是否是人血清来源，并了解被检者的疾病诊断，使用非人血清来源的标准定型血清来进行正定型。可能血型为O型的多凝集现象。

可能血型Ｏ,由于抗-B染料丫啶黄和标清中的相应抗体形成复合物附着在红细胞表面，造成正定型中出现和红细胞产生3+的非特异性阳性反应。

（四）出现额外抗体：

产生未知的抗体反应的可能情况

1.　蛋白或血浆不正常引起的缗钱状凝集：

血清蛋白浓度异常，球蛋白浓度由于疾病而升高（多发性骨髓瘤），原发性居球蛋白血症，纤维蛋白原浓度升高，血浆扩容剂的使用以及何杰金氏淋巴瘤，新生儿脐血中的华通氏胶。

2.　冷反应性自身抗体：

存在ABO系统的意外抗体：如A2或A2B个体血清中可能存在天然抗－A1，顺式AB人群中弱的抗-B,导致反定型试验多出抗体。

3.　被检者血清中存在ABO系统以外的特异性冷同种抗体，反定型时出现假阳性反应。（谱细胞鉴定抗体特异性）：如抗-M、抗-N等.

解决方案

1.　于室温及4℃检查，确定是否存在自身抗体或冷同种抗体

2.　洗涤红细胞再次进行试验，防止血清中有针对试剂红细胞保存液成分的抗体

在37℃定型，去除冷自生抗体干扰后定型，型物质检测

解决方案: 使用抗-A1血清进行正定型鉴定

（2）或O型有ABO以外不规则抗体

解决方案:（1）在正定型中添加抗-H检查

（2）不规则抗体鉴定

（五）混合视野凝集的解决方案

1.　确定是否近期怀孕或输血

2.　确定临床诊断（尤其是白血病）

3.　是否是骨髓移植受者

4.　是否是双胞胎

5.　用细胞分离术将两群细胞分开，分别定型

6.　ABH型物质检查

7.　了解输血史