中草药中多糖的测定方法改进
中草药中多糖的测定方法改进
作者：wangyu 科研信息来源：文献资料 点击数：82 更新时间：2009-4-28
[关键词]：中草药, 多糖, 蒽酮硫酸法
健康网讯：
通常所用经典的比色法测定多糖时, 要用有毒的易挥发的有机溶剂苯酚, 反应速度慢, 步骤繁琐。笔者采用蒽酮- 硫酸吸光光度法测定多糖所用的试剂无毒, 线性好, 准确度高, 仪器简单、测定速度快, 具有较好的选择性。现报道如下。
1 器材
7230G分光光度计(上海精密科学仪器有限公司), 电热真空干燥箱(上海市实验仪器总厂), SH2D ( Il1)循环水式真空泵 (巩义市英峡予华仪厂), 旋转蒸发仪(德国B üCH I Rotavapor R200), SartoriusBS210S电子天平(北京塞多利斯天平有限公司), SK250H超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司), HH4型数显恒温水浴锅, CS1012型真空干燥箱; 无水碳酸钠, 蒽酮, 体积分数95%的乙醇, 硫酸、氢氧化钠、盐酸均为分析纯; 标准品为药用纯葡萄糖。 2 方法与结果
2.1 雀儿舌头中多糖含量的测定采用蒽酮硫酸法。精密称取 105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品20 mg,置100 ml容量瓶中, 加蒸馏水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 备用。
2.2 标准曲线的绘制精密吸取浓度为200 g/L 的葡萄糖标准溶液0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4 ml,分别置于10 ml试管中, 加2 ml蒸馏水, 摇匀, 另取2 ml蒸馏水作空白对照。各管再迅速加入5.0 ml蒽酮- 硫酸溶液, 混匀, 迅速加入浓硫酸5 ml,摇匀后放置30 min,取出, 置冷水中冷却, 于620 nm处测定吸光度。以葡萄糖的体积为横坐标, 吸光度值为纵坐标, 作图得到标准曲线, 其回归方程为: Y=1.041X + 0.030 7, r=0.997 7,表明葡萄糖在40～320μg 范围内呈良好线性关系。
2.3 加样回收率实验精密吸取0.1 ml样品溶液, 加入葡萄糖标准液0.1 ml,置于10 ml 带塞试管中, 加2 ml蒸馏水, 摇匀, 各管再迅速加入5.0 ml蒽酮- 硫酸溶液, 混匀, 摇匀后放置30 min,取出, 置冷水中冷却, 于620 nm处测定吸光度, 代入回归方程计算加样回收率, 得出平均回收率为101.2% , RSD=1.35%。
2.4 样品中总糖及还原糖含量测定称取雀儿舌头多糖10.00 mg,溶解后移至100 ml容量瓶中定容备用。精密吸取0.4 ml苯酚, 加水1.6 ml,按“2.2”项方法测定吸光度, 依回归方程求出多糖中葡萄糖浓度, 按公式f=W/CD计算, 式中W 为多糖质量, C为多糖中测量出的葡萄糖浓度,D 为多糖的稀释因素, 得出f=1.229。精密称取雀儿舌头样品粉末6.0 g,置于烧瓶中。采用热水浸提法:不经乙醇脱脂, 直接于90 ℃水中提取2 h,趁热过滤, 滤饼用热水洗
涤(30 ml×3), 洗液并入滤液, 合并滤液, 减压浓缩后定容备用。按“2.2”中方法测定吸光度, 依回归方程计算待测样品溶液中葡萄糖的浓度, 按下式计算样品中总糖的含量:总糖含量(% )=(C×D ×f/W)×100%。经5次平行实验测得雀儿舌头中总糖的平均含量为1.512%。
精密称取雀儿舌头样品粉末6.0 g,置于烧瓶中, 不经乙醇脱脂, 直接于90 ℃水中提取2 h,趁热过滤, 滤饼用热水洗涤(30 ml ×3), 洗液并入滤液, 合并滤液, 减压浓缩至10 ml,加入无水乙醇使乙醇含量达80% ,静置过夜, 多糖沉淀, 过滤除去沉淀, 将乙醇除去后, 加水溶解至100 ml,摇匀。精密量取1.0 ml,按“2.2”中方法测定吸光度, 依回归方程计算待测样品溶液中葡萄糖的浓度, 按下式计算样品中还原糖的含量:还原糖含量(%)=(C×D ×f/W)×100%。经5次平行实验测得雀儿舌头中还原糖含量为0.532% ,计算得出多糖含量为0.980%。
3 讨论
经典的比色法测定多糖含量实际为总糖的测定, 而且需要使用沸腾的水浴反应10～15 min后才能进行测定, 步骤繁琐、速度慢。对此作者进行了一些改进, 即沉淀并分离多糖再以同法测定溶液中的还原糖。由于硫酸和水发生水合作用释放出大量的热量, 使反应系统自行升温, 达到充分显色, 故可免去水浴加热步骤, 在室温下直接显色。实验证明该法可行。蒽酮- 硫酸法进行多糖的测定时, 多糖本身不直接与蒽酮反应, 而主要是由多糖的水解产物- 果糖和葡萄糖的脱水产物5 - 甲基糠醛与蒽酮发生显色反应。硫酸在其中主要起到催化剂、脱水剂和溶剂作用。多糖水解时, 浓硫酸是催化剂, 同时也为多糖的水解反应提供了大量的热能; 然后在果糖、葡萄糖的脱水反应中作脱水剂; 在蒽酮与 5-甲基糠醛反应时作溶剂, 生成物- 蓝绿色物质。