铁皮石斛组培快繁技术(1)
技术开发欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗
［J ］．湖北林业科技，2010（5）：67－68．
［3］鲁敏，李英杰，王仁卿．油松容器育苗基质性质与苗木生长及生理
．林业科学，2005，41（4）：86－93．特性关系［J ］
［4］．世谢红梅，柏劲松．不同片区的油茶穗条对嫁接苗木的影响［J ］
2010，23（特刊）：207．界林业研究，
［5］佘远国，汪鹏，周火明．不同生长刺激素处理银杏扦插条生根效果
2001（1）：14－15．试验［J ］．湖北林业科技，
［6］邓华平，杨桂娟．不同基质配方对金叶榆容器苗质量的影响［J ］．
2010，23（1）：138－142．林业科学研究，
［7］杜佩剑，徐迎春，李永荣．天竺桂容器育苗基质配方研究［J ］．江苏
2008（2）：143－146．农业科学，
（责任编辑周贤军）
櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒doi ：10．3969/j．issn．1000－8101．2012．01．027
铁皮石斛组培快繁技术
111*2
李莹，谭鹏鹏，彭方仁，周余华
（1．南京林业大学森林资源与环境学院，南京210037；2．江苏农林职业技术学院）
摘
要：以铁皮石斛无菌苗的茎段为外植体，通过诱导丛生芽，进行壮苗生根，建立了一套快繁体系。结果显示，
6－BA的浓度为2．0mg /L时，铁皮石斛试管苗在MS 培养基中生长状况最好，当添加NAA 的浓度为0．1mg /L，铁皮石斛丛生芽的增殖率达到最高。铁皮石斛幼苗壮苗的较佳培养基为MS +0．5mg /LIBA +0．5mg /LNAA 。同时，单独使用0．5mg /LNAA 的培养基中小苗生根快，根数多。香蕉泥能促进幼苗根系的生长。组培苗移栽到纯树皮的基质中，成活率最高。
关键词：铁皮石斛；组织培养；诱导增殖；壮苗生根
Tissue culture and rapid propagation of Dendrobium officinale ∥LI Ying ，TAN Peng-Peng ，PENG Fang-ren ，
ZHOU Yu-hua
Abstract ：An effective method for rapid propagation of Dendrobium officinale was established to induct cluster shoots ，strengthening plantlet and rooting．The results showed that ：Dendrobium officinale plantlet grew best in MS medium ，The proliferation rate of cluster shoots reached the highest in MS medium with NAA 0．1mg /Land 6－BA2．0mg /L．The most suitable medium for strengthening plantlet and taking roots was MS +0．5mg /LIBA+0．5mg /LNAA．The plantlet rooted rapidly and got more roots with 0．5mg /LNAA alone in addition．The banana juice could promote growth of plantlet roots．The survival rate was highest when plantlet were transplanted into the matrix of pure bark．
Key words ：Dendrobium officinale ；tissue culture ；induction and proliferation ；strong plantlet and rooting
Author ’s address ：College of Forest Resources and Environment ，Nanjing Forestry University ，Nanjing 210037，China
铁皮石斛（Dendrobium officinale ）是兰科石斛属
［1］
多年生附生草本植物，为我国特有的名贵药材。《本草纲目》李时珍在中评价铁皮石斛“强阴益精，厚
补内绝不足，平胃气，长肌肉，益智除惊，轻身延肠胃，
［2－3］；民间称其为“救命仙草”。多分布于海拔近年”
千米的山地半阴湿岩石上，加上长期采挖，使得野生
建立了一套快繁体系，为大面积人段进行组织培养，
工种植铁皮石斛提供了有力技术支持。1材料与方法1．1试验材料
本试验所用材料来源于江苏吴江苗圃场提供的铁皮石斛健壮实生无菌苗。
培养条件：温度21 25ħ ，光照1500lx ，时间12h /d，环境湿度60% 80%。1．2试验方法
1．2．1外植体及基本培养基的选择
选取生长旺盛、植株健壮的铁皮石斛无菌幼苗植株，以茎节为中心切下，节的上下各留0．5cm 的茎
N 6、1/2MS、MS 计4种培养基，段。分别接入B 5、每瓶
7．5g /L接种10个茎段。培养基均添加30g /L蔗糖，
林业科技开发2012年第26卷第1期
铁皮石斛资源日渐枯竭
［4－5］
。因其种子无胚乳，需结
合共生菌才能正常萌发，故实生苗的栽培难度较
［6］
大。传统的无性繁殖方式繁殖系数低，大面积栽培种苗数量无法得到满足。本试验通过铁皮石斛茎
收稿日期：2011－07－14修回日期：2011－09－08基金项目：江苏省科技支撑项目（编号：BE2010311）。第一作者简：李莹（1986－），女，硕士生，研究方向为经济林栽培。通
mail ：frpeng@njfu．edu．cn 讯作者：彭方仁，男，教授。E-
96
欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗技术开发
琼脂和10%香蕉泥。pH 值为5．6。30天为1个周期，观察其茎段腋芽萌发及生长状况。1．2．2
丛生芽增殖的激素浓度配比
将诱导出的丛生芽接入分别添加有不同浓度配比的6－BA 和NAA 的培养基中，每瓶接种10个10瓶为1组，幼芽，每组重复3次。组培室中培养30天后，统计丛生芽增殖数量，并随时观察其生长情况。
1．2．3植入密度对比
将铁皮石斛组培幼苗分别接种到丛生芽增殖的
15个/瓶、最佳培养基上，分别接种茎段为10个/瓶、20个/瓶、25个/瓶，观察对比其增殖倍数和苗健壮程
30天后统计增殖数。度，1．2．4
茎段不同部位腋芽诱导
将长5 7cm 的健康无菌苗嫩茎分基部、中部、
舒展。
分别将待移栽、长势相似的组培苗移栽入盛有已纯苔藓和腐殖土的基质中，用多菌灵消毒的纯树皮、
60天后观察成活株数，计算其成活率。成活率=成活株数/移栽总株数。1．3
数据处理及统计
数据的统计分析采用SPSS17．0进行单因素方差way ANOVA ）和多重比较，分析（One-用S －N－K法对组间数据进行差异显著性分析。22．1
结果与分析
基本培养基的选择
4种基本培养基均能诱导产生丛生芽，但诱导效果存在显著差异。从表1可以看出，芽诱导用MS 培养基和1/2MS的诱导率均可达到100%。但MS 培养基中的幼芽叶片浓绿，平均芽长可以达到1．73cm ，明显高于1/2MS培养基幼苗的平均芽长1．45
cm 。而B 5、N 6的芽诱导率较低，且幼芽长势明显不如MS 培养基中的幼苗。所以，选取MS 培养基为最佳基本培养基。
表1
培养基
种类MS 1/2MSB 5N 6
上部接种在丛生芽增殖的最佳培养基中，每瓶接入10个茎段，30天后统计不同部位腋芽的诱导率，并观察对比其腋芽的生长状况。1．2．5组培苗生根试验
将生长良好、长2 3cm 的铁皮石斛组培苗接入分别添加了不同浓度NAA 和IBA 的培养基中，每瓶接种10个幼苗，培养45天诱导生根，统计根数和根长。1．2．6
有机物添加试验
将铁皮石斛组培苗幼苗接种到组培苗最佳生根培养基上，分别添加香蕉泥、土豆泥、苹果汁60mg /L的有机添加物。45天后观察这3种添加物对铁皮石
同时要观察组培苗的健壮斛幼苗的生根情况的影响，程度以及有无褐化和玻璃化现象。
1．2．7组培幼苗壮苗试验
将具有2 3条根的铁皮石斛组培幼苗转接入含有不同浓度配比IBA 和NAA 的最适培养基中，培养0．5、1．0）mg /L+NAA （0、基配方为MS +IBA （0、0．5、1．0）mg /L，培养60天观察幼苗的健壮程度、叶片数、平均生长量、色泽等。1．2．8
炼苗及室外移栽试验
移栽前先将瓶苗移至炼苗房炼苗，慢慢适应自然
通常在常温下炼苗7天左右。等瓶苗生长健环境，
［7］
壮、叶色浓绿，苗长5 7cm 高时出瓶移栽。
组培苗出瓶时，打开瓶塞将培养基与小苗一起
不同培养基对腋芽诱导效果
平均芽长
/cm1．73Aa 1．45Bb 1．24Bb 1．16Cc
诱导率/%1001008663
芽生长情况好较好叶色发黄细弱，矮小
平均再生
芽数/个11Aa 9Bb 8Bb 5Cc
注：大小写英文字母分别代表1%和5%的差异水平，下同。
2．2不同激素浓度对铁皮石斛茎腋芽诱导和增殖
的影响
不同激素浓度及配比对铁皮石斛茎腋芽诱导和增殖均存在显著影响（如表2）。接种30天后发现，以处理6－BA2．0mg /L+NAA 0．1mg /L效果最好，增殖系数达到2．83；而处理6－BA3．0mg /L+NAA 0．1mg /L的效果最差，增殖系数只有0．71；低浓度时，随着6－BA浓度的增加，铁皮石斛腋芽的诱导率和增殖系数随之增加。当6－BA浓度达到2．0mg /L时，腋芽诱导率和增殖率达到最高，同时腋芽叶色浓绿，茎粗壮，生长状况良好。之后随着6－BA浓度的升高到3．0mg /L时，诱导和增殖都被抑制。腋芽也出现了叶片发卷，矮化，无根或少根的现象；当6－BA浓度相同，随着NAA 浓度的增加，增殖系数却随之降低，说明高浓度的NAA 不利于腋芽的分化。综合以上分析，可以得出诱导丛生芽的最合适激素组合为6－BA2．0mg /L+NAA 0．1mg /L。
97
轻轻取出，不要伤及根茎部。先用流水洗去根部附
着的培养基，在阴凉通风处晾根半天至根发白，栽入盛有基质的穴盘中。移栽时，要注意将幼苗的根
林业科技开发2012年第26卷第1期
技术开发欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗表2
不同激素浓度对铁皮石斛茎腋芽诱导和增殖的影响
－1
壮程度最佳。
表3
不同密度对铁皮石斛腋芽诱导的影响
增殖倍数2．62Bc 3．31Aa 3．18Ab 2．46Cd
苗的健壮程度苗粗壮，叶色发绿苗健壮，叶色发绿苗部分叶片发紫叶片发黄，茎细、矮小、发干，幼苗出现畸形
·接种茎段数/（个瓶－1）
10
152025
激素组合/（mg ·L ）6－BA1．0+NAA0．16－BA1．0+NAA 0．36－BA1．0+NAA 0．56－BA2．0+NAA 0．16－BA2．0+NAA 0．36－BA2．0+NAA 0．56－BA3．0+NAA 0．16－BA3．0+NAA 0．16－BA3．0+NAA 0．1
增殖倍数/倍1．97Bb 1．28Cc 1．17Ccd 2．83Aa 1．13Cd 0．86De 1．27Cc 0．76Def 0．70Def
生长情况叶绿，茎粗壮，根粗叶绿，茎粗壮，根粗叶绿，茎粗壮，根粗叶浓绿，茎粗壮，形成大量丛生芽叶绿，茎粗壮，根粗苗小，叶色黑绿茎细小叶片发卷矮化少根叶片发卷矮化无根叶片发卷矮化无根
2．4
不同外植体部位腋芽诱导的影响
从表4的培养结果可以看出，在其他成分保持恒
2．3
接种密度对铁皮石斛幼苗增殖的影响
从表3可见，随着接种密度的增加，接种倍数先
铁皮石斛1年生嫩茎的中部丛生芽增殖定的情况下，
数最多，而且芽的平均长度最长，生长状况佳，上部次之，基部最差（图1）。这可能和铁皮石斛茎的中部较
营养积累较为充足有关。粗壮，
表4
茎段部位基部中部上部
升后降，当密度为15个/瓶时，增殖倍数最大，接种的密度达到20/瓶以上，会出现叶片发黄，茎细，矮小，发干，幼苗畸形。这一方面可能是铁皮石斛生长具有一定的群集效应，另一方面也与营养物质竞争有一定关系。当密度为15个/瓶时铁皮石斛的增殖和苗健
不同外植体部位腋芽诱导的影响
平均芽长/cm
1．23Cc 1．46Aa 1．37Bb
平均诱导腋芽数/个
9Cc 16Aa 12
Bb
图1铁皮石斛丛生芽增殖
2．5
不同浓度激素对铁皮石斛试管苗生根的影响NAA 和IBA 两种生长素均能诱导并促进铁皮石苗高、叶长均有苗壮苗效果良好；当浓度持续增加时，
幼苗壮苗效果有所抑制；当NAA 保持0．5所减少，
IBA 为0．5mg /L时，mg /L不变时，平均苗高和叶长
都达到最大，效果好于单独使用0．5mg /LNAA 的效果，但随着IBA 浓度的增加，幼苗壮苗效果有所下降；当IBA 浓度为1．0mg /L不变时，不论NAA 为0
0．5mg /L或1．0mg /L，mg /L、幼苗壮苗效果都不佳。0．5mg /LIBA +0．5mg /LNAA 最适培养综上所述，
基的幼苗壮苗效果最佳。
表6
CK NAA 0．5NAA 1．0IBA 0．5IBA 1．0IBA0．5+NAA0．5IBA0．5+NAA1．0IBA1．0+NAA0．5IBA1．0+NAA1．0
斛幼苗生根。由表5可知，在低浓度范围内，当NAA 浓度为0．5mg /L时，生根率最高，为100%；且长势良好，平均根长最长，生长快，茎、根粗壮，幼苗生长健壮。而当IBA 浓度较低时，铁皮石斛的生根率随着浓度的增加先升高，但当浓度上升为0．5mg /L时，反而会抑制铁皮石斛组培幼苗的生根。综上分析，可以得出最适合诱导根的生长素为NAA ，浓度为0．5mg /L。
表5
浓度组合
/（mg ·L －1）
CK NAA 0．1NAA 0．5IBA 0．1IBA 0．5
不同浓度激素对铁皮石斛试管苗生根的影响
平均根长/cm3．73Cc 4．10Bb 4．90Aa 3．71Cc 3．56Dd
平均根数/条4．2Cc 5．4Bb 6．8Aa 4．9Bb 4．1Cc
生根率/%91．0Bb 95．0Aa 100．0Cc 96．8Cc 94．1Cc
生长情况生长较慢部分叶色泛黄生长快，茎粗壮根粗壮生长快，茎粗壮根粗壮植株生长较慢植株生长较慢
不同浓度激素对铁皮石斛幼苗生长的影响
平均苗高/cm3．135Gg 4．315Dd 3．272Ff 3．183Gg 4．100Cc 4．684Aa 3．531Ee 3．682Dd 3．031Hh
叶长/cm1．2Hh 1．8Cc 1．5Ff 1．9Bb 1．7Aa 2．1Dd 1．4Gg 1．5Ee 1．1Ii
叶片数466666664
叶片色泽浅绿绿绿绿绿绿绿绿浅绿
·L －1）浓度组合/（mg
2．6
不同浓度激素对铁皮石斛试管苗生长的影响
从表6可以看出：单独使用NAA 浓度为0．5
mg /L时，平均苗高和叶长都较高，叶片色泽浓绿，幼
98
林业科技开发2012年第26卷第1期
欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗技术开发
2．7
不同的有机添加物对组培苗生根的影响
分析结果（表7）显示：添加香蕉泥的生根培养基
浓度以同时添加较高浓度的6－BA（2．0mg /L）和低
［8］
浓度NAA （0．1mg /L）最好。这与郭洪波等、陈媛等
的报道相似。但周俊辉等认为铁皮石斛的最
且6－BA浓度为0．1mg /L时，丛生芽佳培养基为B 5，
［9］
［10］
中的幼苗生根时间比添加土豆泥和苹果汁的培养基
生根集中在7 12天。同时，的生根时间有所提前，
在生根率和单株根数方面，以添加香蕉泥最好，生根
率可以达到100%，单株根数约为6根，且幼苗健壮程度最佳，叶色浓绿，茎、根粗壮（图2）；而添加苹果汁则幼苗茎细小，叶色有发黄迹象。
表7
添加
物香蕉泥土豆泥苹果汁
增殖效果最好。这可能与石斛的产地和种类有关。同时，适宜的接种密度和不同的外植体部位都会对丛生芽的诱导和增殖产生一定的影响。
（2）NAA 浓度为0．5mg /L时，铁皮石斛幼苗生根率为100%，且长势良好，生长健壮。蒋林等郭洪波等
［8］
［12］
［11］
不同的有机添加物对组培苗生长的影响
生根率
/%10097．895．6
开始生根时间/d7 127 1410 15
苗健壮程度叶色浓绿，茎粗，根粗壮有矮化现象，叶色呈绿色叶色有发黄，
茎细小
、
单株根
数/条6．335．674．93
和李小军等都认为添加香蕉泥对石斛
试管苗的生根有利，可以促使幼苗生根时间提前。本试验也证明了这一点。同时，幼苗壮苗以MS +0．5mg /LIBA +0．5mg /LNAA 培养基为最佳，茎粗、苗叶长，效果最好。高、
（3）本试验发现，较为理想的栽培基质为用多菌灵消毒后的纯树皮，该基质排水性和透气性均较好。日常应加强水肥管理，但基质不能过湿，否则细菌易侵染，导致根部腐烂。
参考文献
［1］．北中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志：第19卷［M ］
1999．京：科学出版社，
图2铁皮石斛幼苗生根壮苗
［2］中华人名共和国药典编写委员会．中华人民共和国药典［M ］．北
2000．京：人民卫生出版社，
［3］2007王雁，岳桦．石斛属的利用价值与应用［J ］．中国城市林业，
（5）：2．
［4］——稀有濒危植物［M ］．北京：科傅立国，金鉴明．中国植物红皮书—
1992：492－493．学出版社，
［5］．河南农业大学学赵天榜．铁皮石斛组织培养与栽培技术研究［J ］
1994，28（2）：128－133．报，
［6］2004，邵华，张玲琪，李俊梅，等．铁皮石斛研究进展［J ］．中草药，
35（1）：109－112．
［7］郑勇平，王春，俞继英，等．铁皮石斛试管苗移栽技术［J ］．林业科
2006，20（6）：56－58．技开发，
［8］郭洪波，于晓丹，陈丽静，等．铁皮石斛茎节离体培养的研究［J ］．
2007，18（11）：2659－2660．时珍国医国药，
［9］．北方园艺，陈媛，谢吉容．铁皮石斛试管苗培养技术的研究［J ］
2009（7）：122－124．
［10］周俊辉，钟雪锋，蔡丁稳．铁皮石斛组织培养和快速繁殖的研究
［J ］．仲恺农业技术学院学报，2005，18（1）：23－26．
［11］蒋林，丁平，郑迎冬．添加剂对铁皮石斛组织培养和快速繁殖的影
J ］．中药材，2003，26（8）：539－540．响［
［12］李小军，刘石泉，潘维陵，等．香蕉提取物对霍山石斛试管苗壮苗
J ］．江苏大学学报：自然科学版，2004，25（6）：469－472．的影响［
2．8
不同基质对铁皮石斛组培幼苗生长的影响
由表8可见，纯树皮的试管苗移栽率最高，成活
成活率为率为88．5%；其次为添加了基质的腐殖土，47．6%；而纯苔藓最差，成活率仅为14．0%。所以试验中较为理想的基质为纯树皮。
这可能与基质的含水量有关，铁皮石斛的根为气
怕涝，要求基质通气且排水性良好。纯树皮的生根，
基质符合条件，腐殖土次之，纯苔藓基质保水性太好，铁皮石斛栽于其中容易烂根，这也是其成活率过低的一个原因。
表8
基
质纯树皮纯苔藓腐殖土
不同基质对移栽成活率的影响
株数/株
606060
成活率/%88．514．047．6
3结论与讨论
以铁皮石斛无菌苗茎段为研究材料，通过诱导丛生芽成功建立了一条铁皮石斛的快繁途径。
（1）芽诱导和增殖的基本培养基以MS 为宜，同时，植物生长调节剂对铁皮石斛的组织培养起重要作用。对于丛生芽诱导和增殖，培养基中的激素种类和
林业科技开发2012年第26卷第1期
（责任编辑周贤军）
99