14-3-3是水稻开花素Hd3a的胞内受体
夏爱苗生物文献翻译
14-3-3 proteins act as intracellular receptors for rice Hd3a florigen
14-3-3是水稻开花素Hd3a 的胞内受体
Ken-ichiroTaoka, ChojiroKojima &Ko Shimamoto doi:10.1038/nature10272
Abstract ：
Florigen 可以在叶片里合成运输到茎尖诱导植物的开花，最近研究表明，Florigen 是由植物普遍保守的基因FLOWERING LOCUS T （FT ）编码，但它的诱导机制和遗传学机理并未十分清楚，作者找到水稻中开花素（Florigen ）的同源物Hd3a ，研究表明，Hd3a 可以和14-3-3互作形成复合体，继而转运到细胞核中同水稻转录因子OsFD1形成三聚体“florigen activation complex”（FAC ）,FAC 可以诱导激活开花特异基因OsMADS15的表达，启动植物开花。作者提出14-3-3蛋白可以作为开花素在茎尖细胞中的胞质内受体，从而启动一系列分子事件诱导开花。
Results ：
1、 为理清Hd3a 诱导开花的机制，作者利用Y2H screening 的方法筛选得到了GF14c （rice
14-3-3 protein ）、OsKANADI1和OsBIP16b 三个Hd3a 互作蛋白，三者除了GF14c 之外均具有SAP motif。
2、 GST pull-down实验表明Hd3a 和GF14c 互作，GF14c 可以和OsFD 互作，而Hd3a 不可
以和OsFD 互作。且OsFD1-GF14互作依赖于S192的磷酸化。
3、 基于上述实验以及SAP motif 类似于14-3-3识别motif 的线索，作者猜测14-3-3可能作
为桥梁的角色介导Hd3a 和已鉴定蛋白的互作，Y2H 实验和co-IP 以及三者形成的FAC 晶体分析结果证实了这个猜想。
4、 Gel-shift assay证明FAC 可以和OsMADS15启动子区的C-box 序列（GACGTC ）.
5、 水稻原生质体实验表明，Hd3a-mCherry 定位于细胞质和细胞核中，GFP-GF14b 定位于
细胞核中，CFP-OsFD1定位于细胞核中（Figure1a ）。BiFC 验证了Hd3a 与GF14b 以及GF14b 和OsFD1的互作，同result2是consistent 的。Hd3a 同OsFD1的互作会在缺失同GF14b 互作突变体Hd3aR64G/R132A和OsFD1S192A mutant 消失，这结果同result3 consistent 。
6、 为验证OsFD1对Hd3A 和GF14b 以及Hd3a-GF14b complex亚细胞定位的影响，作者观
察了原生质体co-expression CFP-OsFD1是它们的定位情况，结果表明当共表达时，GFP –GF14b,Hd3a –mCherry 和Hd3a –GF14b complex 会像核内聚集（Figure1b ），BiFC-based FRET-(fluorescence life time imaging microscopy)FLIM分析也支持上述结论。
7、 Hd3a 和OsFD1共转原生质体可以提高OsMADS15的表达水平，在不同Hd3a 突变体背
景下共转OsFD1以及不同OsFD1突变背景下共转Hd3a ，检测原生质体中OsMADS15的表达水平，结果表明14-3-3在其中起着关键作用。
8、 转基因实验证明，组成型表达Hd3a 以及OsFD1磷酸化，可以诱导植物提前开花，相反
RNAi Hd3a和OsFD1可以延迟开花。
9、 根据上述结果作者提出了一个FAC （Hd3a-14-3-3-OsFD1）调控植物开花的Model ：