红细胞的脂质双分子层
红细胞的脂质双分子层
By E. GORTER, M.D., 和 F. GRENDEL (从荷兰莱顿大学的儿科的实验室) (收稿出版,1924年12月15日)
我们将在本文中证明,不同动物的红细胞都覆盖了一层只有两个分子厚的脂质。如果红细胞从动脉或静脉采取,并用生理盐水洗涤数次从血浆中分离,然后在纯丙酮中大量提取,可以得到一定量的脂质,脂质总表面恰好足以覆盖两个一层分子厚的红细胞。随后用乙醚或苯产量只有少量的脂类物质的提取。
因此我们假设每个红细胞被一层脂质包围,其中的极性基团被引导到内侧及外侧,其方式大致相同于Bragg 假设分子被定位在“脂肪酸晶体”,及Perrin 提出的一个肥皂泡式的分子。在两相的边界,一边是血红蛋白水溶液,另一边是等离子体,这种取向似乎是在先前推论中最可能的。任何其他的解释似乎很难维持,因为他们没有考虑到红细胞表面积和脂质的含量之间的常数关系。 技术
1. 所有的玻璃器皿(离心管,移液管,漏斗,过滤器,烧杯,萃取装置)通过已加入重铬酸钾的浓硫酸,处理为不含脂肪。
2. 试剂(水,丙酮,苯,乙醚,等)在全玻璃蒸馏器中进行二次蒸馏。盐在使用石英坩埚前被点燃。
3. 血液直接从动脉或静脉取。容器空置,针在双蒸馏水中煮两次,向其中先加1%的钠,然后引入添加0.5%草酸钾。
4. 血液的第一流数据被丢弃,以避免错与皮下组织的脂肪污染的可能性。然后下一个部分被允许流入一个含有0.5%草酸钾的带塞的称量瓶中。在山羊和绵羊的情况中,颈内静脉直接通过皮肤穿刺,但在这种情况下,血液流被允许流动一段时间,以便测定量被接收在我们的玻璃容器中之前清洗所有污染针的脂肪物质。在人体试验中,通过皮肤穿刺静脉的步骤相同。
5. 混合后,10毫升(或在以后的实验1毫升。)血液移液至60毫升离心管中,并用通常的方式用50毫升(0.9%)的盐溶液洗3或4次。
经过几次提取,丙酮过滤到一个玻璃烧杯中,液体在水浴时被浓缩。这个程序是操作中最困难的部分,因为损失是非常易于发生在这个时候。当残渣最终溶解于苯,并过滤到50毫升的量瓶中,已使用10毫升的血液,或当0.5或1毫升血液已采取时,在管中标记为2.5或5毫升。在每次测定前标记液体与苯的组成。
测定在水面上展开的脂质单分子层
格朗缪尔(3)已经证明,脂肪和脂肪酸的扩散是在已溶于苯和几滴置于水面的溶液中的脂质单分子层中。亚当(4)已稍加修改最初由朗缪尔描述的实验装置。我们已经利用
了亚当的改进。使用移液器使苯溶液的量取已精确到了0.1ml 。现在,实验表明,脂肪分子在水面的扩散在平行于水平面之前不需要在某一方向施加任何压力,恰恰形成一个单分子膜,然后它们被分布在垂直位置。
朗缪尔 - 亚当的装置,选择的水面过大给脂肪分子提供了足够的展开空间,导致它们彼此间的接触不紧密。通过安装一个有铜制带状材料达到平衡时的位移精确测量出分子开始在水平面内施加一个压力的时间,并可以通过不同重量的平衡,补偿和测定这种压力。移动同样被薄层石蜡油覆盖的铜盘边缘的玻璃条使得覆盖面尺寸减小。只要脂质分子在一个单分子层上紧密接触,就会逐步失去平衡。通过轻量的增加平衡能够压缩分子层并且不会造成覆盖面的尺寸进一步的减小,直到突然增加的重量将分子层打乱,并且不再回复到的原来的平衡状态。
用直尺测量分子层的厚度。我们总是从表面污染物厚度的测定开始。在平衡的托盘中增加50毫克并且移动玻璃条至30厘米远处。在室温下,我们能够测出厚度几乎没有超过0.5cm 。用移液器从 红细胞脂质的苯溶液中吸取0.1ml 吹到盘中的水面上,并且移动玻璃条标出平衡开始移动的位置,盘中的质量即为50mg 。每厘米都施加压力,该层为盘中每50毫克重量2达因压力。
红细胞数量和大小的测定
通过尽可能快地从含有血液的称量瓶中填充mrlangeur ,并通过计算在BUrker 计数室80个小方格中细胞数量,每个细胞约为1 / 4000立方毫米就可以测定了红细胞的数量。将含有红细胞的血涂片表面用Pappenheim 染料染色。在Zeiss 绘图棱镜的帮助下将40~50个红细胞画到毫米纸上。采用显微镜1倍的放大率测量细胞在水平和垂直方向上的尺寸。通过Knoll 公式(5) 的使用得到的数据证实红细胞呈圆盘形(一种将红细胞涂布在玻璃片上的计算方法)表面是2D 2(D 是直径)。通过其表面积乘以细胞的数量很容易获得的1~10cc血液的红细胞总表面。
结果摘要
我们已经研究了兔子,狗,豚鼠,绵羊和山羊及人类的血液。存在于这些动物体内的红细胞大小有很大差别,但在0.1毫升血液中红细胞的总表面积不显示同样巨大的分歧,因为在血
液中有非常小的血细胞的动物(山羊和绵羊)比大尺寸的血细胞的动物(狗和兔子)有更多的细胞数量。
表I
我们给出了所有实验结果数据,只省略那些我们在丙酮的蒸发过程中无法避免的损失。 很显然,我们的研究结果很好地符合了红细胞覆盖的一层脂肪物质是两个分子厚的假设。
参考文献
1. Bragg, W. H., and Bragg, W. L., X rays and crystal structure, New York, 4th edition, revised and enlarged, 1924.
2. Perrin, J., Ann. phys., 1918, x, series 9, 160.
3. Langmuir, I., J. Am. Chem. Soc., 1917, xxxix, 1848.
4. Adam, N. K., Proc. Roy. Soc. London, Series A, 1921, xcix, 336; 1922, ci, 452, 516.
5. Knoll, W., Arch. ges. Physiol., 1923, cxcviii, 367.