西洋参中皂苷类成分提取方法对比_李建明
1896 Journa l o f Ch i nese M ed ici na lM a teria l s 第31卷第12期2008年12月
西洋参中皂苷类成分提取方法对比
李建明, 陈 赟, 章莉娟, 钱 宇
(华南理工大学化学与化工学院/绿色化学产品技术重点实验室, 广东广州510640)
摘要 目的:选择更好的西洋参提取方法, 提高人参皂苷的提取率。方法:以人参总皂苷、人参皂苷R b 1、R b 2、R c 、Rd 、R e 、R g 1、R g 2等7种主要单体皂苷收率为指标, 用高效液相色谱法进行含量测定, 比较热回流提取、超声波提取、罐组式逆流提取、组罐式超声波提取四种方法各自的优劣。结果:组罐式超声波提取是最佳的提取方法, 它可以在保证提取效率的前提下, 减少溶剂的用量, 降低提取温度。结论:组罐式超声波提取法可望广泛地应用在制药工业上。
关键词 人参皂苷; 超声波提取; 组罐式超声波提取
中图分类号:R 284 2 文献标识码:A 文章编号:1001 4454(2008) 12 1896 03
*
Com parison Resarch on D ifferent ExtractionM et hods
of G insenosides fro m Panax qui n quefoliu m
L I Ji an m i ng , C HEN Y un , ZHANG L i j uan , Q I AN Y u
(Schoo l of Chem istry and Che m ical Eng i neer i ng /Guangdong K ey L ab of P roduct T echno logy o fG reen Chem i stry , South Ch i na U nivers i ty of T echnology , G uangzhou 510640, Chi na)
Abstrac t O bjecti ve :T o op ti m ize t he extraction m et hod and i m prove t he extraction ra tio of g i nsenosi des from Panax quinquefoli um M et hods :Four d ifferent ex tracti on m ethods ,
i ncl uding hea t refl ux ex tracti on m ethod , ultrason i c extraction me t hod , m ulti stag e
counte rcurrent extraction m ethod and ultrason i c assisted mu lti stage countercurrent ex tracti on m ethod w ere co m pared accordi ng to the ex tracti on ra ti o of t o ta l sapon i ns and seven g i nsenosides analyzed by HPLC i nclud i ng R b 1, Rb 2, R c , R d , R e , Rg 1, Rg 2 R esu lts :T he u l trasonic assisted mu lti stage countercurrent ex tracti on m ethod w as t he best m et hod and had t he advantages of higher e fficiency , is hoped to be w i dely used i n t he phar m aceutical i ndustry
K ey word s G i nsenosides ; U ltrasonic ex tracti on ; U ltrasonic ass i sted mu lti stage countercu rrent ex tracti on
l ow er
ex tracti on te m pera t ure and l ess so lvent consu m pti on Concl usion :T he u ltrasonic ass i sted m ulti stage countercurrent ex tracti on me t hod
西洋参(Panax quinquefolium L ) 又称花旗参、洋参、西洋人参, 为五加科(A rali a ceae) 人参属多年生草本植物, 原产于美国东部和加拿大, 目前我国已有大面积栽培。西洋参味苦、性凉、入心、肺、肾经, 功能以补益为主, 可滋阴降火、益气生津。其主要活性物质为人参皂苷, 目前从西洋参根中先后分离得到20多种人参皂苷, 其中人参皂苷Rb 1、Rb 2、R c 、Rd 、Re 、Rg 1、Rg 2为西洋参中含量较高的7种皂苷。人参皂苷的提取方法很多, 如热回流提取、超声波提取
1
罐式超声波提取是一种更为新颖节能的中药提取方法。
1 材料、试剂与仪器
1 1 材料与试剂 西洋参主根, 吉林产, 购自广州清平药材市场, 并经山东中医药大学李凌军副教授鉴定为正品; 人参皂苷标准品Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、Rg 1、Rg 2购于浙江美迪康医药贸易服务部(供含量测定用); 无水乙醇、磷酸为分析纯; 乙腈、甲醇为色谱纯。
1 2 仪器 Varian 210型高效液相色谱仪(美国VARI AN ); KQ 600KDE 型高功率数控超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司); 旋转蒸发仪(瑞士B U CH I); 电子天平(上海精密科学仪器有限公司); 高速万能粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司); HH 4数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司); 循环水真空泵(巩义英峪予华仪器厂) 。2 方法与结果
、微波提取
2
、加压提取法
3
等。组罐式超声
波提取技术是超声波提取与罐组式连续逆流提取的集成技术, 具有两种提取技术的特点, 提取温度低, 溶剂用量少, 可减少后续浓缩能耗以达到节能的目的。本文采用高效液相色谱法对7种人参皂苷含量进行同步测定, 以各人参皂苷提取率和总皂苷得率为衡量指标, 对比热回流提取、超声波提取、罐组式连续逆流提取、组罐式超声波提取四种方法, 发现组
基金项目:广东省绿色化学产品技术重点实验室开放基金(GC200706)
作者简介:李建明, 男, 在读硕士, 研究方向为中药有效成分的提取分离; E m ai:l li ji anm i ng @m ail scu t edu cn 。
*
, ; E m ai:l yunchen@ cn 。
Journa l o f Ch i nese M ed ici na lM a teria l s 第31卷第12期2008年12月 1897
2 1 样品处理 样品(西洋参根) 粉碎后过60目筛, 置60 真空干燥箱内干燥24h 至恒重。2 2 供试品溶液的制备
2 2 1 热回流提取:称取10 00g 西洋参粉末于250m l 锥形瓶内, 在90 水浴条件下, 用70%的乙醇溶液提取3次, 每次30m i n , 每次溶剂用量为60m l 。合并3次提取液, 待测。
2 2 2 超声波提取:称取10 00g 西洋参粉末于250m l 锥形瓶内, 在60 条件下, 用70%的乙醇溶液在超声波清洗器中提取3次, 每次30m i n , 每次溶剂用量为60m 。l 合并3次提取液, 待测。2 2 3 罐组式逆流提取:罐组式逆流提取详细操作方式参考文献
4, 5
图1 混合标准品的HPLC 图
表1对照品R g 1R e R g 2R b 1R c R b 2R d
各对照品的回归方程和相关系数
回归方程
Y =3 75 107X -146943Y =3 698 107X -139847Y =5 794 107X -1543Y =3 814 107X -19086Y =2 692 107X -692Y =3 864 107X -1127Y =3 958 107X -31016
相关系数r 0 99940 99960 99980 99980 99970 99980 9997
。采用三效罐组式逆流提取,
每罐装药材10 00g , 用70%的乙醇溶液在90 水浴中连续逆流提取。每次提取30m i n , 每次新鲜溶剂用量为60m 。l
2 2 4 组罐式超声波提取:组罐式超声波提取采用类似组罐式逆流提取装置, 是将各提取罐置于超声环境下。具体操作方式则与罐组式逆流提取相同。采用3次组罐式超声波提取, 每罐装药材10 00g , 用70%的乙醇溶液在60 超声波条件下提取。超声波的功率为600W, 频率40KH z , 每次的提取时间为30m in , 每次新鲜溶剂用量为60m 。l 2 3 含量测定
2 3 1 色谱条件:色谱柱:V arian C 18(4 6mm 250mm, 5 m ); 柱温:室温; 检测波长:203nm; 进样量:20 :l 流速:1 1m l/mi n ; 流动相为0 05%磷酸水溶液和乙腈组成; 梯度洗脱程序为:0~40m in , 乙腈的体积分数为20%; 40~70m i n , 乙腈的体积分数为20%~35%; 70~85m in , 乙腈的体积分数为35%~45%; 85~90m in , 乙腈的体积分数为45%~20%, 所有组份均在90m i n 内出完。
2 3 2 标准曲线的制备:分别称取人参皂苷Rb 14 9m g 、Rb 23 7m g 、Rc 4 8m g 、Rd 4 9m g 、R e 5 6m g 、Rg 15 4m g 、Rg 25 2m g , 移至5m l 的容量瓶内, 加2m l 甲醇后超声振荡2m i n , 定容刻度。分别称取对照品的储备液0 08、0 16、0 32、0 64、1 28m l 至2m l 容量瓶, 定容至刻度, 摇匀, 得到系列浓度的对照品混合液。分别进样3针, 每次20 , l 记录色谱图。图1是上述色谱条件下测得的某个混合标准溶液的H PLC 图谱。以对照品的浓度(mg /ml) 为横坐标(X ), 对照品的峰面积为纵坐标(Y ), 进行线性回归计算, 得到回归方程及相应的相关系数见表1
2 4 方法学考察
2 4 1 精密度实验:精密吸取上述对照品溶液, 按 2 3 1 项下的色谱条件, 重复进样5次, 测得各色
谱峰的峰面积和保留时间, 7种人参皂苷Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、Rg 1、Rg 2峰面积的RSD 值分别为0 25%、0 32%、0 36%、0 21%、0 34%、0 55%、0 50%、0 30%, 7种组分保留时间的RSD 为0 20%~0 59%, 表明仪器精密度良好。
2 4 2 稳定性实验:精密称取西洋参粉末1份, 按 2 2 4 项下处理方法制成供试品溶液, 按 2 3 1 项下的色谱条件, 分别在0、1、4、8、12、24、36、48h 进样测定, 测得各色谱峰的峰面积和保留时间, 7种人参皂苷Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、Rg 1、Rg 2峰面积的RSD 值分别为:0 57%、1 38%、1 51%、0 79%、1 63%、1 61%、0 69%, 7种组分保留时间的RSD 值为0 43%~0 86%, 说明供试品溶液在48h 内化学性质稳定。
2 4 3 重现性实验:精密称取西洋参粉末5份, 按 2 2 4 项下处理方法制成供试品溶液, 按 2 3 1 项下的色谱条件, 分别进样测定, 测得各色谱峰的峰面积和保留时间, 7种人参皂苷Rb 1、Rb 2、R c 、Rd 、Re 、Rg 1、Rg 2峰面积的RSD 值分别为:2 78%、2 46%、1 85%、2 31%、2 82%、2 43%、2 81%, 7种组分保留时间的RSD 值为0 24%~0 42%, 表明
1898 Journa l o f Ch i nese M ed ici na lM a teria l s 第31卷第12期2008年12月
2 5 四种方法对西洋参中人参皂苷提取效果的影响 见表2。
表2 不同提取方法提取的总皂苷中各
单体皂苷和总皂苷含量的比较
提取方法(mg /g)
皂苷种类R g 1R e R g 2R b 1R c R b 2R d 总皂苷
热回流
提取2 612 380 192 905 391 541 0216 02
超声波提取2 842 230 202 845 161 500 9815 75
罐组式逆流提取2 252 420 182 875 371 611 1915 89
组罐式超声波提取2 512 660 242 864 841 511 0915 71
与其它三种提取方法相近得率的情况下, 降低了提取温度, 减少了溶液用量, 在工业化生产中为后续浓缩工段减少了能耗。可以预见, 兼具超声波提取和连续逆流提取两大特色的组罐式超声波提取是一种非常新颖、具有环保节能的中药提取方式, 将为中药现代化的提取工程打开一扇崭新的大门。
参
考
文
献
[1]Ji anyong W u , L i dong L , i F oo ti m Chau U ltrasound assis
ted ex tracti on o f g i nseng saponi ns fro m g i nseng roots and cu lt ured g i nseng cell s U ltrasonics sonoche m i stry , 2001, (8):347 352
[2]Y oun Yuen Shu , M i ng YU K o , Y uan Sh i u m Chang M i
crow av c assisted ex tracti on of g i nsenosides from g i nseng roo t M icro che m i ca l Journa, l 2003, 74:131 139
[3]M agg ie P K Cho i a , K e l v i n K C Chan , H e iW un Le
ung , et a l P ressurized liqu i d extraction of acti ve i ng red i ents (g i nsenos i des) fro m m edicina l plan ts usi ng non ion ic surfactant so l utions Jou m al of Chro m atography A, 2003, 983:153 162
[4]Q iao e W ang , Shao m e iM a , Boqiang Fu , et al D evelop
m ent of mu lti stage couniercurrent extrac ti on techno l ogy f o r the extrac tion o f g lycy rrh i zic ac i d(GA ) from li cor ice (G l y cyrrhza uralensis F isch ) B i o che m i ca lEng i neeri ng Journa, l 2004, 21:285 292
[5]陈赟, 田景奎 一种中药动态连续逆流提取的实验室模
拟方法 亚太传统医药, 2006, (1):60 65
3 小结与讨论
从总皂苷的提取量来看, 四种提取方法的总皂苷得率相近, 热回流提取和罐组式逆流提取略高于超声波提取和组罐式超声波提取。从溶剂的使用量
来看, 罐组式逆流提取和组罐式超声波提取的溶剂使用量约是热回流提取和超声波提取的1/3, 不仅节省了溶剂, 也为后续的浓缩过程节约了能耗。从提取温度的角度来看, 超声波提取和组罐式超声波提取降低了提取过程的温度, 对一些热敏性物质具有保护作用。总的来说, 组罐式超声波提取在达到
(2008-05-19收稿)
香连丸中黄连、木香配伍比例的最佳优选
万琳琳, 张振秋, 王永振, 陈有强(辽宁中医药大学, 辽宁大连116600)
摘要 目的:确定黄连、木香的最佳配伍比例。方法:采用HPLC 法测定黄连与木香不同配伍比例中盐酸小檗碱含量, 采用小鼠醋酸扭体反应进行镇痛实验, 采用小鼠二甲苯耳壳炎症进行抗炎实验, 以及试管两倍稀释法进行抑菌实验。结果:黄连与木香的最佳配伍比例为5 1。结论:本实验综合评估优选出了黄连、木香的配伍比例。
关键词 黄连; 木香; 配伍; 盐酸小檗碱; 药理
中图分类号:R 289 5 文献标识码:A 文章编号:1001 4454(2008) 12 1898 03
*
香连丸出自 太平惠民和剂局方 , 为2005版中国药典一部所收载, 原方由黄连(吴茱萸制) 、木
香组成, 配伍比例为4 1, 具有清热化湿、行气止痛的功效, 用于大肠湿热所致的痢疾、肠炎
1
床应用中, 尚无黄连、木香不同剂量配伍应用的文献报道。因此, 本文采用高效液相色谱法测定黄连与
木香不同配伍比例对黄连中有效成分盐酸小檗碱含量的影响, 采用小鼠醋酸扭体反应进行镇痛实验, 采
。在临
作者简介:万琳琳(1982 ), 女, 硕士研究生, 研究方向为中药分析; Te:l 0411 87586109, E m ai:l li n li n_wan _128@126 co m 。
*
, Te:l , E m a h u@