植物愈伤组织诱导实验
姓名: 马宁 专业年级: 生命基地班2009级 学号: [1**********]0 课程: 细胞工程实验 题目: 植物愈伤组织诱导实验
一 .实验目的
掌握植物愈伤组织诱导的原理和方法。
二 .实验原理
1、植物组织培养:
无菌条件下,培养植物的组织、器官以至单个细胞,使其分裂、增殖和分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在人工培养条件下,脱分化形成愈伤组织,愈伤组织又再分化根和芽等组织和器官。
2、植物激素控制器官分化理论。
3、超净工作台工作原理
本工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备
室内空气→预过滤器(初滤) →小型离心风机压入静压箱→高效空气过滤器(精滤) →出风面吹出洁净气流(具有一定的、均匀的断面风速)→不断排除工作区原来的空气→形成高洁净的工作环境。
三 .主要仪器试剂
每人:培养瓶(内含培养基)1个、100mL去离子水1瓶、100mL空试剂瓶1个; 两人:超净台
胡萝卜
无菌器皿、用具的准备:用酒精擦拭盘子、解剖刀及镊子,灼烧后冷却。
四.实验操作步骤
植物愈伤组织诱导
(1)用70~75%的酒精棉擦拭双手和操作台面,进行常规的无菌操作准备。
(2)将植物体用自来水冲洗后,用流水冲洗片刻后洗净,切段(5cm左右)。先在70%酒精中浸泡数秒。
(3)将材料放入已灭菌的100 ml烧杯中,加入10%的次氯酸钠溶液,浸泡5分钟。
(4)弃次氯酸钠浸泡液,再加入10%的次氯酸钠溶液,浸泡10-15分钟。
(5)弃次氯酸钠浸泡液,用无菌水浸泡漂洗3~4次,每次1~2分钟,用无菌镊子搅动。
(6)将已灭菌的植物材料置于灼烧后冷却的金属盘中或灭菌过的培养皿中,按无菌操作要求剥去外皮,用解剖刀将胡萝卜切去表皮和中柱,取皮层部分,切成0.5cm3的小块。弃去两头的两片,取中间 部分的薄片,用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上,注意圆片的切口朝向培养基,每瓶4~6片,均匀分散。
(7)将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过,拧紧瓶盖。
(8)在培养瓶下部的培养基高度位置作记号。
(9)将接种后的三角瓶,培养于25℃黑暗条件下,20天左右观察,看外植体是否逐渐膨大形成愈伤组织。愈伤组织的形成标志着接种的外植体已脱离分化状态,开始重新恢复分生能力 。
五.实验结果
我自己的胡萝卜褐化了。
以大组总瓶数为样本总数,每瓶为样本个体,统计记录愈伤组织诱导培养的出愈率、污染率和其他现象。
样本总数:26瓶
污染:13瓶
褐化:7瓶
出愈率:23.08% 污染率:50% 褐化率:26.92%
六.思考题
1. 以大组总瓶数为样本总数,每瓶为样本个体,统计记录愈伤组织诱导培养的出愈率、污染率和其他现象。
答:在众多污染的培养基中,有的是长满了白色厚厚的丝状菌毛,有的铺遍了绿色的苔藓状的菌落,还有的是一半金色菌落,一半绿色菌落。
我自己的胡萝卜完全褐化了,连培养基的颜色也变成了褐色,胡萝卜和培养基基本快要融合在一起。另外,培养瓶外壁不够透明,也不便于观察。
统计结果见上。
2.你如何认识无菌操作对植物组织培养的重要性?你认为在具体操作时还应注意那些事项?
答:无菌操作是植物组织培养的基础。做不到无菌操作,组织培养是根本不可能良好的进行
的。因为微生物是无处不在的。会在各种情况下影响实验。要知道,头发、手上到处都是微生物。
无菌操作时,操作过程一定不能在超净台之外进行。每一个动作都必须在酒精灯的有效范围内进行。
就像这次的实验,被污染的现象完全是五花八门的。