大鼠活体心脏穿刺采血法_盛晖

第20卷　第2期湖北医科大学学报Vol . 20, N o . 2

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

1999年4月A cta Academiae M edicinae Hubei Apr , 1999

大鼠活体心脏穿刺采血法

盛　晖

(附一医院普外科, 武汉430060)

　　摘要　报告一种大鼠活体多次采血法。用1%戊巴比妥钠腹腔麻醉后, 剑突下进针, 斜行向上刺入2. 5～3. 0cm 即达心脏, 回抽。30只SD 大鼠, 间隔10d 采血2ml , 共4次, 测定Hb 、RBC 、Hct 、W BC 、A LT 、T P 、BUN 。结果:采血1000余次, 1次穿刺成功率98%以上, 且大鼠成活, 各次血液成份及生化指标差异均无显著性(P >0. 05) 。本法操作简便, 定位准确, 采血量大, 可重复采血。

主题词　心脏; 穿刺术/方法; 大鼠中图分类号　R332

　　在众多的实验动物中, 大鼠在医学研究中应用最广泛, 常常要抽取鼠血作各种检查, 但大鼠采血技术一直又是困扰实验者的一个难题。我们在动物实验中, 通过多次开胸观察, 发现大鼠仰卧位时, 心脏位于胸腔正中。在此启示下, 建立了一种大鼠活体心脏穿刺采血法。这种方法一只大鼠可重复多次采血, 每次采血量不少于2ml , 现介绍如下。1　材料与方法

1. 1　材料　30只SD 大鼠, 雌雄兼有, 体重238±15g , 适应性喂养3d 后行第1次采血。以后每隔10d 采血1次, 每次采血量2. 0～2. 5ml , 共4次。分别测定Hb 、RBC 、H ct 、WBC 、ALT 、TP 、BUN 。1. 2　方法

1. 2. 1　麻醉　用无菌生理盐水将戊巴比妥钠粉剂配制成1%溶液。按30mg /kg 体重用1ml 注射器抽取麻醉药行腹腔注射。

1. 2. 2　固定　在一块40cm ×30cm 的木板上钉上3颗铁钉, 组成一个等腰三角形。将已麻醉的大鼠仰卧于木板上, 用3把环形钳分别夹持鼠颈、左右腹股沟区, 环形钳的手柄套扣在铁钉上, 固定好大鼠(图1) 。

1. 2. 3　采血　于大鼠剑突下脱毛后用碘酒、酒精消毒, 操作者右手持注射器, 针头紧贴剑突下以30°角进行, 刺向心脏。针尖穿过横膈膜继续斜行刺入2. 5～3. 0cm , 约相当于7号注射针头长度, 边进针边回抽针管, 可见血液借心脏跳动的力量进入注射器内, 有时还能见到针管内血液随心脏搏动而跳动。

, 鼠放回笼内。

图1　大鼠心脏穿刺采血示意图

2　结果

3年来我们应用本法采鼠血1000余次, 1次穿刺成功率达98%以上, 用这种采血法分离的血清或血浆无溶血。

我们测定了4次采集的血样中血液细胞成份及主要生化指标, 观察多次采血对大鼠血液成份及营养状况的影响, 实验结果见表1。

经t 检验同一指标各组间数据两两比较差异均无显著性(P >0. 05) 。表明大鼠每隔10d 取血2ml 不会影响血液成份及生化指标。

我们还观察了这种采血法可能对大鼠胸腔脏器造成的影响, 30只大鼠共采血120次, 未发生死亡。

表1　大鼠多次心脏采血后血液成份及部分生化指标的变化( x ±s )

d 0

102030

Hb (g /L ) 146. 1±3. 0144. 5±3. 6147. 3±2. 8142. 8±4. 3

RBC (×10/L )

7. 3±0. 87. 6±0. 77. 4±0. 57. 8±0. 6

Hct (%)

48. 2±6. 347. 4±5. 149. 6±7. 348. 6±5. 9

WBC (×10/L )

12. 5±3. 613. 1±4. 012. 8±5. 213. 0±4. 2

A LT (U /L )

27. 2±3. 629. 1±4. 025. 4±3. 228. 3±2. 8

T P (g /L )

71. 1±4. 270. 5±3. 172. 3±4. 471. 8±5. 0

BUN (mmol /L )

4. 9±1. 45. 1±1. 74. 8±1. 35. 2±1. 2

随机取10只大鼠于第4次采血后3d 处死, 剪开胸腔, 仔细观察肺脏和心脏, 结果均未见陈旧性出血

灶, 胸腔无积血, 心脏无血肿, 无瘀斑。

采用本法麻醉的大鼠一般1h 左右开始清醒, 随后恢复活动, 饮水进食。3　讨论

文献报道[1]:大鼠红细胞每45～68d 更新一代。每1h 进入血循环中的红细胞达2. 4×10个; 大鼠一次失血30%,7d 内可以恢复。我们的实验表明:间隔10d 采血2m l , 对大鼠血液成份、营养状况及生命活动均无明显影响。以1只250g 体重的大鼠为例, 血量占体重的6%～8%,约合10～12ml 血, 1次采血2ml , 低于全身血量的30%,不会导致失血性休克。

大鼠体小, 外周血采集困难。现行采用的方法主要有剪尾、眼眶后静脉丛取血或摘眼球、断颈, 甚至开胸心脏取血[2]。这些方法有的采血量小, 不能满足检查要求; 有的为了取血要处死动物, 且都存在溶血的弊端。有时实验人员为了连续获取实验数据, 只好增加动物数, 分期分批处死动物采血, 这样增加了实验误差。

我们报告的活体心脏穿刺采血法操作简单、定位准确、采血量多, 且一只大鼠可以重复多次采血而仍然成活是其最大特点。要达到这一效果, 我们认为有以下几点值得引起注意。

(1) 麻醉药浓度不宜过大, 用量要准确。以往普遍用3%戊巴比妥钠, 常因药量掌握不准致动物死亡。如1只250g 大鼠按30mg /kg 计算, 用3%戊巴比妥钠仅0. 25ml 。药物浓度大, 药量稍有过量, 动物易引起呼吸抑制而死亡。我们用1%的浓度和用1m l 刻度注射器, 一次麻醉10只动物, 既提高了工作效率, 麻醉效果又好。戊巴比妥钠水溶液呈碱

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性, 不稳定, 最好现用现配, 未用完的麻醉药应置4℃冰箱内不超过3d , 否则效价减弱。

(2) 采血时, 大鼠要保持头、体、尾在一条直线上, 防止体位不正、胸廓扭曲牵拉致心脏移位。(3) 应沿胸骨柄剑突下潜行进针, 边进针边回抽针管, 见有血液涌入针管时, 固定好注射器。回抽时, 注射器内负压不宜过大, 遇回血较慢时, 要待心脏充盈后抽吸。

(4) 进针深度应依大鼠体重而定, 300g 以内的大鼠用7号针头, 300g 以上的大鼠用8号针头。

(5) 若要获取血浆, 可先用稀释肝素润湿注射器, 血液离心后得到。(6) 大鼠喜群居, 白天活动少, 常依偎在一起, 因此取血后大鼠放回笼内, 注意分开摆放, 避免互相挤压、窒息死亡。

(7) 天冷时取血后的大鼠要注意保暖, 供给充足的水。

(8) 本采血法还适用于豚鼠、小鼠、兔婴等小动物的采血。

以往曾有心脏穿刺采血法的报道。其方法是在胸骨左侧3～4肋间选择心脏搏动最强处垂直进针, 但大鼠心率极快, 每分钟可达216～600次[2]。要想确定心脏搏动点并非易事, 且垂直进针, 不易固定, 实际应用中很难穿刺成功。我们报告的采血法, 采用剑突下进针, 针头固定好, 穿刺极易成功, 一般能做到一针见血。

参考文献

1　施新猷. 医用实验动物学. 西安:陕西科学技术出版社, 1989, 461～462

2　方喜业. 医学实验动物学. 北京:人民卫生出版社, 1995, 223～225

(1998-03-14收稿)

(下转第137页)

Experimental Sutdy on the Electroacupuncture and Formaline

Stimulation Induced the Expression of c -fos G ene

Wang C hengyao , Liu Yingtao , W an Dening , et al

(Department of Anesthesiology , Second Affiliated Hospital , Hubei M edical University , Wuhan 430071, China )

Abstract

The objective w as to explore the molecular mechanism of electroacupuncture by RNA dot hybriditation in comparison w ith electroacupuncture and formaline stimulation induced the ex pression of c -fos m RNA . The results show that electroacupuncture stimulation w as of sig nificant analgesia role . Both electroacupuncture and formaline stimulatio n induced a large of c -fos mRNA expression . The blockade of c -fos gene expression by morphine pre -vented formaline nociception from inducing , but not eletroacupuncture stimulation . It is suggested that c -fos may take part in pain modulation , and electroacupuncture analgesia w as different from noxious stimulation .

MeSH 　electroacupuncture ; analgesia ; formaline ; c -fos gene

(上接131页)

A Method of Gathering Blood by Intracardiac Penetration in Living Rats

Sheng Hui

(Department of General Surgery , First Affiliated Hospital , Hubei Medical University , Wuhan 430060, China )

Abstract

We have established a new method w hich can gather more blood repeatedly in living rats . The rats w ere anaesthetized by intraperitoneal injection w ith 1%sodium pentobarbital , then penetrated upward obliquely at the site of just below the xiphoid , entered about 2. 5～3. 0cm into the heart and drew blood out . Two ml blood has been extracted from 30SD rats every 10days 4times in all , and the H b , RBC , Hct , WBC , ALT , TP and BUN have been determined . Results :by using this method , the rate of one -time successful penetration is over 98%w ithout sacrificing animals , and no significant difference (P >0. 05) has been detected in blood compo nents and biochemical targets each time . The method is easy to control and is applicable for g athering more blood repeatedly in living rats .

MeSH 　heart ; punctures /M T ; rats