唾液淀粉酶最适pH值的测定实验实验方案
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验
组员:李艳 高雅华 毛秋丽
实验原理:酶催化活性最高时,反应体系的pH值称为酶的最适pH值[2].碘液与淀粉及其不同程度的水解产物反应呈现不同颜色,即:淀粉(蓝色) 紫色糊精(紫色) 红色糊精(红色)
麦芽糖及少量葡萄糖(黄色)。[3] 利用朗伯-比尔定律[4],用分光光度计测量出各溶液在660nm处的吸光度A,从而间接测出唾液淀粉酶的最适pH值
仪器材料和试剂药品:
仪器材料:1. 白瓷板、中试管、试管架、毛刷、吸耳球、玻璃笔、小烧杯、坐标纸、漱口水
2. 37 C恒温水浴箱、分光光度计、沸水浴
3. 0.1ml、0.5 ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管、胶头滴管
试剂药品:1. 0.02%淀粉溶液 2. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 3. 碘液、水
实验步骤:
1、 缓冲液的配置:根据下表,配置各个pH值的缓冲溶液各10ml pH 值
2、唾液的获取:
蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇,将下嘴唇搁在烧杯边缘,让唾液自然流入试管中.
3、唾液的稀释:取10支试管,分别编上号00~09
①用蒸馏水漱口,然后使蒸馏水停留在口腔30秒,同时不断地搅动,接着吐到干净的一次性杯中
②取8只干净的试管,编号1~8,依次加入5ml蒸馏水
③取5ml唾液,加入1号试管中,充分振荡,然后从1号取5ml稀释的唾液加到2号试管中,充分振荡,依次类推,仅保留8号试管加入蒸馏水作为空白管。37℃保温,备用。至此,1~7号试管分别被稀释了2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍。
4、唾液稀释倍数的选取
另取10支试管,分别编上1~7号,各取上述稀释的唾液各1ml,分别加入相应编号的试管里,向10支试管内同时加入1.5ml的0.02%的淀粉溶液,振荡混匀后放入37 C恒温水浴5分钟后取出,滴加2~3碘液,振荡混匀,观察颜色,选取颜色变化适中的一支,记录稀释倍数。
5)测量pH: 取12支试管,分别标上号1~12,按下表操作
以蒸馏水调零,用分光光度计测出各试管中溶液的吸光度A值,做好记录。以pH值为横坐标,吸光度A为纵坐标,在坐标纸上作出平滑曲线,取曲线最低点对应的pH值,即为唾液淀粉酶的最适pH值。
注意:加入碘液时,尽量每个试管的量都1滴,量不要太大,也不要有太大差别,一免影响吸光度值