粪便细菌DNA的提取
04-10
粪便细菌DNA 的提取
1. 0.2-0.5g 粪便置于Ep 管中（冰水浴），加入1mlPBS ，漩涡振荡混匀，200xg
离心5min ，取上清，冰水浴；
2. 向沉淀中加入1mlPBS ，重复步骤1；
3. 混合两次上清，用300g 离心5min ，弃沉淀；
4. 两次上清用10000rpm 离心8min ，沉淀菌体；
5. 所得沉淀用1mlPBS 洗涤至上清无色；
6. -20℃过夜；
7. 向Ep 管中加入500ulDNA 提取液，6ul 蛋白酶K ，37℃摇床160rpm 摇40min ，
再加入56ul20%SDS，65℃条件下水浴2h ，每隔15-20min 轻摇Ep 管；
8. 等体积酚/氯仿抽提，8000rpm 离心10min ，取上层水相，重复两次，除净蛋
白；
9. 0.6倍体积异丙醇沉淀DNA ，12000rpm 离心10min （4℃）；
10. 用70%乙醇洗涤DNA 沉淀两次，自然干燥；
11. 沉淀中加入15ulTE ，在37℃孵育箱中孵育30min 。
DNA 提取液（pH8.0）
100mmol/L Tris-HCL
100mmol/L Na 2EDTA
100mmol/L 磷酸钠
1.5 mol/L NaCL
1% CTAB（100ml 提取液含CTAB1g ）
Tips ：
● 此DNA 可在4℃贮存6个月，-20℃保存时间更长，但要注意避免反复冻融，以免剪切
高分子量DNA 。
● 混匀时不要用力振摇，以免DNA 断裂。
● Tris 饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1