慢病毒滴度检测 SOP
慢病毒滴度检测标准操作细则
1. 目的：
规范慢病毒滴度检测标准操作程序
2. 范围：
适用于慢病毒滴度检测操作工序
3. 操作程序
3.1 器材准备
移液枪、各种枪头，1.5mL EP管、试管架，酒精灯、荧光显微镜、CO 2培养箱、生物安全柜
3.2 溶液准备
1640培养基，FBS （gemini ），
3.3 操作步骤
3.3.1检测前一天，对293T 细胞传代，每个96孔中加8000个细胞，37度培养过夜，感染时细胞长至30~50％的融合密度；
3.3.2次日，准备10个无菌的Ep 管，每个EP 管中加入90 μL 的培养基（1640培养基+10% FBS），取待测定的病毒原液10 μL 加入到第一个管中，混匀（用移液枪反复吹吸混匀，注意不要吹起气泡）后，标记（10），取10 μL 加入到第二个管中，继续相同的操作直到最后一管（10）。
3.3.4选取所需的细胞孔，吸去孔板中培养液，加入梯度稀释为10至10稀释好的病毒溶液90ul 到孔板中，轻轻混匀，放入37℃ 5% CO2培养箱中培养；
3.3.5 24小时后，视具体情况更换新鲜完全培养基90ul 。小心操作，不要吹起细胞。
3.3.6 第四天，在荧光显微镜下观察各孔中荧光细胞数量，病毒滴度为表达荧光的细胞数乘以相应稀释倍数。
3.3.7例如：某一慢病毒感染细胞后96小时部分孔（某一视野）的荧光照片如下： 一号孔：一号稀释液，含有10*10-3ml慢病毒液
二号孔：二号稀释液，含有10 *10-4ml慢病毒液
三号孔：三号稀释液，含有10*10-5ml慢病毒液
四号孔：四号稀释液，含有10*10-6ml慢病毒液
五号孔：五号稀释液，含有10*10-7ml慢病毒液
六号孔：六号稀释液，含有10*10-8ml慢病毒液 -3-8-1-8
七号孔：七号稀释液，含有10*10-9ml慢病毒液
八号孔：八号稀释液，含有10*10-10ml慢病毒液
某一病毒感染细胞293T ，六号孔中观察到表达绿色荧光的细胞都至少为10个。则病毒的滴度为： 10 TU/（10*10-8）ml=1*108TU/ml
3.3.8滴度检测数据分析及结果，统计相关数据制作慢病毒滴度检测报告。
3.4清场
3.4.1物品集中在废液桶中灭菌后清洗。
3.4.2操作室台面用75%酒精擦拭消毒后，开启紫外灯进行灭菌。
3.5 注意事项
3.5.1 梯度稀释过程中，注意及时更换枪头，避免交叉污染。
3.5.2做滴度检测的细胞，铺板前须保持状态良好。