病生实验设计 肝性脑病
实验设计:小鼠肝性脑病模型的制作与观察
【实验目的】
1.复制小鼠肝性脑病的模型;
2.观察氯化铵药物对小鼠脑电波及血氨浓度的影响,并分析血氨浓度的变化与脑电波变化之间的关系。 【实验原理】
正常情况下,机体内氨的生成和清除保持动态平衡,所以血氨浓度保持在正常范围。肝脏鸟氨酸循环是氨的主要代谢途径,当肝功能严重障碍时,由于氨的浓度增高而清除不足,就会引起血氨增高。这时,一方面增多的血氨可通过血脑屏障进入脑内星形胶质细胞,并与谷氨酸合成谷氨酰胺。谷氨酰胺具有渗透分子作用,细胞内谷氨酰胺增多,可激发细胞内水分积聚,引起星形胶质细胞水肿,此为脑水肿发生的主要机制之一;另一方面,血氨增高引起脑能量代谢障碍,同时,也引起脑内谷氨酸、乙酰胆碱等兴奋性神经递质减少,而谷氨酰胺、GABA等抑制性神经递质增多,从而造成中枢神经系统功能障碍;而且,血氨增高对神经膜有抑制作用,铵根离子干扰神经细胞膜上的Na+-K+- ATP酶活性,使K+内流减少,导致神经冲动的传导形成受抑制。这样就复制了小鼠肝性脑病的模型。
紫外分光光度法检测血液中的氨浓度,可以为肝性脑病、重型肝病、尿毒症等代谢障碍的诊断提供参考。此方法可用加入钨酸钠及硫酸溶液再用酚-次氯酸钠显色。
【实验仪器及药品】
手术器械1套,鼠板,头皮静脉针,1ml注射器3个,6.7mg/ml 戊巴比妥钠,3%氯化铵,试管,试管架,枸橼酸钠,钨酸钠-硫酸溶液,酚-次氯酸钠,肝素生理盐水,分光光度计,生物信号采集器,电脑,打印机。 【实验动物】
小鼠(20-25克) 【实验步骤】
1.取小鼠称重,以 6.7mg/ml 戊巴比妥钠(生理盐水配制)腹腔注射, 0.01ml/g 小鼠体重,小鼠一般数分钟后即入睡,即可行手术。注:此法麻醉可维持 0.5-1 小
时,小鼠安静,适用于较长时间手术,术后小鼠应放在白炽灯下,以维持体温。严格掌握剂量,一般不会引起麻醉死亡;剂量过大时小鼠会死亡。
2. 将小鼠背位固定于鼠板,打开腹腔,切除小鼠肝脏的2/3。
3.在小鼠右侧后腿腹面剪开皮肤,暴露股静脉,向心方向插入头皮静脉针,(内充满生理盐水),用胶布固定,以备给药。 4.连接脑电波测定装置。
5.标记试管:取6支试管分别标记0、1、2、3、4、5,标记好的试管内加入等量的钨酸钠及硫酸溶液和枸橼酸钠。
6. .尾静脉取血,给药前用注射器取血0.1ml加入到0号试管内,迅速震荡摇匀。 7. 股静脉给药:通过股静脉给药,每次给百分之三氯化铵0.1ml,计时,每隔5min给药一次,并在下一次给药前进行尾静脉取血,取血后依次加入1到5号编号试管,并迅速震荡摇匀。
8.观察抽搐发生的时间以及脑电波的变化。
9.将0-5号试管中混合液过滤取上清液,再以酚-次氯酸钠显色后于波长630 nm处测定光密度OD值(以空白校正),查标准曲线,读出各试管对应的血氨浓度。 10.打印脑电图,并填写下表。 A.脑电波情况记录:
B. 表1 小鼠血氨浓度实验记录
【注意事项】
1.肝脏切除时,注意不要损伤肝门附近重要的血管神经。
2. 血液加入试管后迅速震荡摇匀,以免凝血,影响结果。 3. 小鼠尾静脉抽血时宜从远端开始。