柱层析分离色素
生物化学实验报告
题目：柱层析分离色素
姓名： 学号： 班级： 时间：
一、实验目的；
1． 了解拄层析的分类，掌握各种拄层析的原理。
2． 熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、实验原理：
吸附层析法利用吸附剂表面对溶液中的不同物质所具有的不同程度的吸附作用进行分离。用适当的溶剂，如石油醚、甲醇、丙酮、苯等，可将绿叶中的色素（叶绿素 a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素）提取出来，提取液通过吸附柱能将其中的各种色素分开，吸附柱常用蔗糖、碳酸钙、氧化铝等吸附剂作成。
三、实验试剂：
1． 无水乙醇或95%乙醇 5．三氧化二铝
2． 石英砂 6.饱和氯化钠溶液
3． 丙酮 7.无水硫酸钠
4． 石油醚（60~90℃） 8.洗脱掖：丙酮：石油醚＝1:9
四、实验样品：
菠菜等。
五、实验器材：
层析拄（1×30㎝）、研钵、蒸馏装置、脱脂棉、天平
六、实验操作：
1．色素的提取：
20g菠菜，加少许石英砂，再加20ml无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30ml石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40ml饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20ml水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用。
2．样品的浓缩：
将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8ml左右，以备加样使用。
3．层析拄的制备：
15g碱性三氧化二铝加入30ml石油醚搅拌，浸泡10min。在层析拄内加入一团棉花在底部，再加入石英砂0.5cm以上，然后用石油醚半充满柱子，再将浸泡好的三氧化二铝倒入柱内，倒时应该缓慢，重复使用下面的石油醚，直到装完。用石油醚洗柱内壁，顶部加一小团棉花，然后再填入石英砂0.5㎝高。
4．样品的分离层析：吸附层析分离色素
打开层析拄下部开关，向拄内加入2ml浓缩液，至液体没入砂内，再加入石油醚冲洗拄壁，液体浸入砂内，加洗脱液开始层析，可以看到不同色带如图片1，直至洗脱完毕，在拄下面用试管分别接收不同色带
的洗脱液，如图片2（可辅助减压装置，加快洗脱速度）（深黄—暗绿—黄绿—绿）。
七、实验结果：
1. 色素下移循序：黄色（胡萝卜素）——蓝绿（叶绿素a）——黄绿色（叶
黄素）——绿色（叶绿素 b）。
2. 图片
图1 胡萝卜素色带（黄色） 图2 分离出的胡萝卜色素（黄色）
八、结果分析与注意事项：
1. 装填层析柱时要注意保持三氧化二铝在溶剂液面以下，以免混入气泡，
使层析柱不均匀，影响实验结果。
2. 进行色素分离时，要控制流速，以每分钟60-80滴为宜，流速过快，吸
附时间过短，色素分离不开；流速过慢，作用时间过长，色素洗脱很慢，浪费时间。
3. 加样量不要过大，过大，分离条带过宽，如果层析拄不够长，各组分不
易分开，易同时洗脱下来；加样量过少，色带不是很清楚，不易观察，效果不好。