维生素C含量的测定
维生素C 含量测定
一、实验目的
掌握滴定法测定微生物C 的方法。
二、实验原理
维生素C （英语：Vitamin C ，又称L-抗坏血酸）是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素。抗坏血酸在大多的生物体可借由新陈代谢制造出来，但是人类是最显著的例外。最广为人知的是缺乏维生素C 会造成坏血病。维生素C 有两种存在型式，还原型和脱氢型两种，还原型的抗坏血酸分子中有二烯醇（COH=COH）存在，所以他是一种极敏感的还原剂，他可以失去两原子的氢而氧化为脱氢型抗坏血酸（尤其在碱性条件下，更容易被氧化）。
染料2、6-D （DCPIP:2,6-dichlorophenol-indophenol）是一种强氧化剂，可氧化抗坏血酸，而本身被还原为无色的衍生物，2、6-D 易溶于水，在碱性溶液中呈兰色，在酸性溶液中呈桃红色，所以他可以作为指示剂指示反应的终点。
三、实验材料、仪器与试剂
1实验材料： 苹果 2实验仪器
电子太平、研钵、滴定管、容量瓶（100 mL、1000 mL）、刻度吸管、三角瓶（50 mL）。 3实验试剂
（1）2%草酸溶液：称取2 g草酸溶于少量蒸馏水中，定容至100 mL。 (草酸具有很强的还原性，保护Vc 不被氧化；抑制L-ascorbate oxidase 活性) （2）标准抗坏血酸溶液：精确称取纯抗坏血酸10 mg（应为洁白色，如变黄则不能用），用2%草酸溶液溶解并定容至100 mL 。再将该液体稀释20倍，为标准抗坏血酸溶液。此溶液应贮存于棕色瓶中，最好现用现配（终浓度1/200=0.005mg/ml）。 （3）0.01mol/L的2, 6–二氯酚靛酚钠溶液：称取300 mg 2, 6–二氯酚靛酚钠溶于800ml 的热水中，并滴加0.01mol/L的NaOH 25滴，冷却后用蒸馏水稀释至1000 mL，过滤后贮存于棕色瓶中，4℃冷藏可稳定一周，临用前用标准抗坏血酸标定。
四、操作步骤
1．抗坏血酸的提取
称取植物样品0.5 g，放在研钵中加入2％的草酸溶液少许，少量的石英砂将其研成匀浆，到入10 mL的容量瓶中，残渣再用2％的草酸洗2-3次，提取液及残渣一并转入容量瓶中，最后用2％的草酸定容至刻度，然后颠倒混匀数次，混匀，用滤纸过滤，滤液，即为待测液。 2．空白的滴定
取2％的草酸10 mL，用染料2、6－二氯酚靛酚钠溶液滴定至变为桃红色15 s不退色，记下染料消耗的体积V 空。 3．样品的滴定(做两个平行实验)
取待测液10 mL 于三角瓶中，用2、6－二氯靛酚钠溶液滴定至桃红色15s 不褪色为止，记下染料2、6－二氯靛酚钠溶液的用量。取平均值即为10 mL 待测液中的Vc 消耗的染料的体积V 样
4．滴定度的测定
取0.005 mg/mL的标准Vc 1 mL，加入2％的草酸9 mL ，用染料滴定至桃红色记下用的体积V 标
滴定度T （titer ）=0.005/(V标-V 空) 即1mL 染料相当于抗坏血酸的毫克数 5．计算
100 g
W=(V样-V 空) ×T ×10 mL×
0.5 g
注:单位是每100g 样品中所含的Vc 的毫克数
五、注意事项
（1）在选择实验材料的时候尽量避免选择提取后带有较深颜色的材料，否则会干扰滴定终点的判断。如样品本身带有较浅的颜色，可使用硅藻土脱色，或者在滴定前预先加入2-3 mL 二氯乙烷，以二氯乙烷层变为淡红色为滴定终点。
（2）本法只能测定还原型维生素C 的含量，不能测定具有同样生理功能的氧化型和结合型维生素C 的含量。
（3）用2%草酸制备提取液，可有效地抑制抗坏血酸氧化酶，以免维生素C 变为氧化型而无法滴定，而1%草酸无此作用。
（4）如样品浆状物泡沫过多，可加几滴辛醇或丁醇消泡。
（5）样品提取制备和滴定过程中，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免破坏维生素C 。
（6）滴定过程宜迅速，一般不超过2 min 。药品滴定消耗染料以1-4mL 为宜，如超出此范围，应增加或减少样品提取液的用量。