大题生物制品学
血液制品
一.为什么要去除白细胞?(用白细胞滤器过滤去除浓缩或悬浮红细胞制品中的白细胞。 )1. 减免白细胞介导的同种免疫的发生。提高输血疗效,降低输血风险。临床常见的非溶血性发热输血反应、血小板输注无效等,55%~75%是因为输入异体血液中的白细胞所致。
2.降低白细胞携带病毒性传染病的输入传播。
一.去除白细胞的方法。1、离心法:又叫去白膜法。根据红细胞和白细胞比重不同,通过离心分层制备少白细胞的方法。残留白细胞多,现已多不采用。2、过滤法:经血液过滤器制备。高效去除白细胞可达99%的白细胞,红细胞回收率大于90% ,血小板回收率大于85% 。
二.单采血小板。1.单采血小板:使用血细胞分离机在全封闭的条件下自动将符合要求的献血者血液中的血小板分离并悬浮于一定量血浆内的单采成分血。含有的血小板数量≥2.5×1011每袋。每份单采血小板约相当于10袋常规浓缩血小板的总量。2.与浓缩血小板比较,单采血小板最大的优点是相对安全,受血者只需要接受一个献血者的血小板即可达到治疗量,可以降低发生HLA同种免疫反应和输血传染病的风险几率。
三.机器单采成份血。Apheresis: 单采。将单采者或患者的血液从体内抽出,用血液细胞分离机对离体的血液进行血液成分的分离,将分离的血液成份一种或多种保留,其它成份再回输给被采集者的过程。产品具有纯度高,容量相对少,输血不良反应率低等优点,是目前临床广为应用的血液制品之一。
四.机采成分血的条件。机采成分血需要专门的设备和场地,所以机采捐血一般都在条件较好的血液中心或血站进行;一般在临床需要时才采集,故捐献成份血的志愿者需要事先填写好《志愿捐献成份血登记表》,等候血液中心的预约通知。
五.单采血小板对献血者的要求。捐献者除符合规定捐献全血的检查标准外,还需符合以下要求:(1)血液要求:红细胞比容(HCT)≥0.36采前血小板(PLT)计数≥150×109/L且<450×109/L预测采后血小板≥100×109/L(2)时间要求:单采血小板间隔时间为1个月。每次采集过程需要1.0小时~1.5小时。 (3)献血量要求:每次可献1个至2个治疗单位,或者1个治疗单位及不超过200ml血浆。全年血小板和血浆采集总量不超过10L。
(4)其它要求:①口服抑制或损害血小板功能药物(如含阿司匹林类药物)停药后超过5天者;②捐献者应肘静脉粗大,充盈良好;③采集前宜吃清淡食物(如稀饭、馒头),切忌空腹献血。
七.单采血小板的特点。1.品质优良,临床输注方便。浓度大于,纯度高,白细胞污染率低,红细胞含量极少。 1位献血者的血小板给1位患者输注。减少了同种抗体的产生。
2. 节省献血者资源:1位献血者的血小板给1位患者输注。单采血小板间隔1个月,时间短,对健康献血者无害。
八.单采血小板对身体有什么影响吗?健康人体内血小板数量充裕,捐出的血小板在48小时内就可以恢复到采前水平,比捐献红细胞的恢复时间要短得多。因此,捐献者可以每间隔1个月捐献一次,但一年最多不超过12次。 在捐献成分血的过程中,捐献者的血液都在经严格消毒的密闭管道套材中循环和分离,每位捐血者每次使用的都是一次性全新套材,绝对不会造成交叉污染。
九.悬浮红细胞.又称添加剂红细胞。通过离心以去除全血中尽可能多的血浆,并代以红细胞保存液所制成的红细胞成分血。红细胞悬液的红细胞比容为
0.50-0.65。该制品具有保存期长(可达35天)、输注顺畅的优点....SRBC的特点,是目前国内外临床应用最为广泛的一种红细胞制品。适用于大多数需要补充红细胞和提高血液携氧能力的患者。含有全血中的全部红细胞、一定量白细胞、血小板、少量血浆和保存液的混悬液。
十.1.FFP制备方法.(1)原料血的要求使用二联以上的采血袋采集血液。采集的全血冷藏保存时间不超过18小时。采血顺畅,200ml全血采集不超过7分钟,400ml全血采集不超过13分钟。(2)血浆的分离:按照 “浓缩红细胞”或“悬浮红细胞”制备方法操作。(3)速冻拟速冻的血袋逐袋平放,而不应重叠堆放。将新鲜血浆快速冻结,在60分钟内血浆中心温度降至-30℃以下。
2. FFP保存.保存温度低于-18℃,保存期为自采血之日起1年,解冻后2~6℃保存,应24小时内输注。
抗体、疫苗、细胞因子
十一.抗体技术的发展史。1.整体水平抗体生成技术。【多克隆抗体(抗血清)】2.细胞工程抗体技术(单克隆抗体)3.基因工程抗体生成技术。(嵌合抗体、改形抗体、小型化抗体、组合抗体术、噬菌体抗体库技术、Ig转基因小鼠、抗体真核表达技术)
十二.各种人源化基因工程抗体的定义及特点。1.人-鼠嵌合抗体(human-mouse chimeric Ab):将鼠源单抗的可变区与人抗体的恒定区融合而得到的抗体。其制备过程为:将鼠源单抗的可变区基因克隆出来,连接到包含有人抗体的恒定区基因及其表达所需的其他元件(如启动子、增强子、选择标记等)的表达载体上,在哺乳动物细胞(如骨髓瘤细胞、CHO细胞)中表达。2.改型抗体:进一步减少鼠源成分,仅保留6个CDR区,骨架区全部或部分换成人Ab部分,人源成分达到97%。。。。(1)小分子抗体:小分子抗体包括Fab、Fv或ScFv、单域抗体及最小识别单位等。小分子抗体有很多优点【可以用细菌发酵生产,成本低;分子小,穿透力强;不含Fc,没有其带来的效应;在体内循环的半衰期短,容易消除,利于解毒排出;易于与毒素或酶基因连接,便于直接获得免疫毒素或酶标抗体等】Fab抗体:包括完整的L,H链的V区和CH1功能区。IgG的1/3,排斥反应降低稳定,组织穿透力强,常用于治疗和诊断。Fv抗体:由VH、VL组成的具有完整抗原结合位点的最小Ab片段,表现出完整抗体的相似活性。SvFv:是由一段弹性连接肽将VH、VL连接而成,是具有亲代Ab全部抗原结合特性的最小功能单位,大小为完整Ab的1/6。+1.单域抗体:只含有VH、VL的一个功能结构域。即为VH,约为完整分子的十二分之一,它只由一个结构域构成,亲和力有所降低,但仍然保持着原单抗的特异性。+2.最小识别单位:只含有一个CDR多肽的抗体。不稳定。约为完整分子的1/80~1/70,一般由一个CDR构成,也保持着抗体的特异性。(2)特殊的基因工程抗体——双特异抗体,双特异性抗体:能同时识别2种抗原的抗体,1种为对应肿瘤相关抗原,1种为对应效应成分,即能结合靶肿瘤细胞又能结合高细胞毒性的效应细胞,将效应细胞富集在肿瘤周围,而且可以模拟天然配体的作用,与细胞表面引发分子结合,激活效应细胞,实现对肿瘤细胞的杀伤和裂解。所以双特异性抗体与以往肿瘤免疫性治疗相比,除了能特异性识别肿瘤细胞外,还能将循环免疫中的免疫效应细胞再导向至肿瘤细胞处,从而使效应细胞的抗肿瘤活性增强,发挥棉衣导向作用,这是肿瘤治疗的新突破。
十四.1.肿瘤生物治疗:生物治疗是第四类癌症治疗方法,系利用和激发机体的免疫反应来对抗、抑制和杀灭癌细胞。肿瘤生物治疗是用生物来源的制剂或调节生物反应的制剂治疗肿瘤的方法。2.常见的方法和效应细胞:(1)细胞治疗是采集患者自体的免疫细胞进行制备,再回输至患者体内。无法规模化生产,这种治疗方法更适于在医疗机构开展,完成从采集、制备到回输的全过程。(2)非细胞治疗包括:抗体治疗,多肽疫苗,基因疫苗 ,靶向药物治疗,细胞因子治疗 。(3)肿瘤生物治疗常见的方法和效应细胞:免疫效应细胞治疗:过继性免疫效应细胞治疗【通过分离技术获取患者自身免疫细胞,在细胞因子的诱导下,体外大量扩增出具有高度抗肿瘤活性的免疫细胞,再回输到患者体内,达到增强肿瘤患者的免疫功能和抗肿瘤的目的。】【优点:抗瘤免疫细胞可随血液扩散到全身、可针对肿瘤细胞发挥
特异杀伤作用、对正常细胞无毒性】。效应细胞:淋巴因子激活的杀伤细胞LAK、细胞因子诱导的杀伤细胞CIK、抗CD3单抗激活的杀伤细胞CD3AK、PHA激活的杀伤细胞PAK、细胞毒性T淋巴细胞CTL、自然杀伤细胞(NK)、树突状细胞(DC)、单核巨噬细胞(Mφ)。细胞因子的联合应用:IFN-γ, IL-2, anti-CD3 ;免疫效应细胞的联合应用:CIK、DC、DC-CIK、NK、DC-T细胞因子诱导的杀伤细胞生物反应调节剂BRM,一类具有广泛生物学活性和抗肿瘤活性的生物制剂。作用机制:干扰细胞生长、转化或转移的直接抗瘤作用,或激活免疫系统的效应细胞及其所分泌的因子 。主要包括细胞或化学因子、细菌类生物反应调节剂、微生态型生物反应调节剂、真菌多糖类生物反应调节剂等。BRM临床应用举例:卡介苗 (BCG)、短小棒状杆菌CP、多糖类:香菇多糖、云芝多糖等 、免疫组织和细胞提取物:胸腺素、转移。基因治疗。举例:a.今又生:重组人P53腺病毒b.安柯瑞:人5型腺病毒.
十五.疫苗的种类、举例、基本性质。1.、疫苗的种类及举例:传统疫苗:灭活疫苗:百日咳、伤寒、SARS;减毒活疫苗:卡介苗;亚单位疫苗:白喉、破伤风类毒素;新型疫苗:基因工程疫苗:基因工程亚单位疫苗、基因缺失活疫苗、核酸疫苗;遗传重组疫苗;合成肽疫苗;抗独特型抗体疫苗;微胶囊疫苗。2.疫苗的基本性质:安全:无致病性和接种后异常反应;有效:可诱导产生可靠的保护性免疫;实用:易于接种、保存和运输,价廉。3.核酸疫苗与传统疫苗的比较:传统免疫使用抗原是灭活病原体、减毒的活病原体或病原体的亚单位蛋白。核酸疫苗是病原体某种抗原的基因片段,与自然感染过程相似。核酸疫苗兼有重组亚单位疫苗的安全性和减毒活疫苗诱导全方位免疫应答的高效力。核酸疫苗兼有重组亚单位疫苗的安全性和减毒活疫苗诱导全方位免疫应答的高效力。核酸疫苗可在体内不断翻译表达,较长时间维持较高的蛋白水平,免疫具有连续性,一次接种可获得长期或终身免疫力。灭活疫苗和亚单位疫苗在体内代谢较快,难以长时间维持较稳定的含量,需多次接种免疫原,加强免疫。
十六.灭活疫苗优缺点。1.优点:易于制备;免疫原性稳定性高;储存及运输方便;易于制备多价疫苗;疫苗安全性高。2.缺点:免疫力维持短,需要多次接种;主要诱发体液免疫,不能产生细胞免疫或黏膜免疫应答;接种剂量大,不良反应;需要严格灭活。举例——百日咳疫苗、伤寒疫苗、SARS疫苗。
十七.减毒活疫苗。1.定义。用人工诱变、从自然界筛选出的毒力高度降低、无毒的活的病原微生物制成的疫苗,可模拟自然发生隐性感染,诱发理想的免疫应答而又不产生临床症状。举例:结核病、脊髓灰质炎(Sabin)、麻疹、乙型脑炎、甲型肝炎、风疹疫苗、腮腺炎等疫苗。3.优缺点.优点:能诱发全面、稳定、持久的体液、细胞和粘膜免疫应答;一般只须接种一次;可采用口服、喷鼻或气雾途径免疫。缺点:有效期短和热稳定性差,运输、保存条件要求较高;回复突变危险;使用范围相对窄。举例——卡介苗,40亿人接种,是世界上最安全的疫苗之一,但对免疫缺陷者不安全。对感染艾滋病毒者接种卡介菌要慎重。